一种罕见α-地贫基因突变HbH病(--^(SEA)/α^(*92A>G)α)的家系分析与基因诊断

目的鉴定中国南方人群中的一种罕见α-地贫基因突变,以及此突变所致Hb H病的家系分析和基因诊断。方法采集家系成员外周全血,进行血液学表型分析和地贫基因常规检测,对常规检测基因型与表型不符的标本进一步DNA测序分析。结果该家系中检出罕见α-地贫基因*92A>G突变,确认先证者及先证者姐姐基因型为--SEA/α*92A>Gα的非缺失型Hb H病,先证者哥哥基因型为-α3.7/α*92A>Gα的标准型α-地贫、父亲基因型为αα/α*92A>Gα的静止型α-地贫。结论首次鉴定报道了中国南方人群中罕见α-地贫基因*92A>G突变,以及携带此突变的静止型α-地贫、复合此突变非缺失型Hb H病的基本表型特征,丰富了中国人群α-地贫基因突变谱,有助于指导α-地贫的人群筛查、临床基因诊断和遗传咨询。

高分辨率熔解曲线法检测药物性耳聋相关线粒体12S rRNA突变

目的建立一种基于高分辨率熔解曲线(HRM)技术的药物性耳聋相关线粒体12S rRNA基因1494C>T和1555A>G突变快速检测方法。方法采用定点诱变克隆策略构建突变质粒DNA标准品;建立突变位点靶序列PCR扩增及HRM分析方法,并检测106例非综合征耳聋患者标本,以DNA直接测序法进行验证。结果建立的HRM检测方法能准确检出线粒体12S rRNA基因1494C>T和1555A>G突变,各基因型HRM曲线特征明显且易于分析判断;106例非综合征耳聋患者标本中检出6例1555A>G突变,检测结果与DNA测序结果一致。结论建立了药物性耳聋相关人类线粒体12S rRNA基因1494C>T和1555A>G突变HRM检测方法,操作简单快速、结果准确可靠,可应用于人群筛查和临床常规分子诊断。

2131例女性泌尿生殖道支原体感染情况及药敏试验结果分析

目的了解不同疾病类型及不同就诊科室女性泌尿生殖道支原体感染情况及其耐药性。方法对3 464例女性受检者的生殖道分泌物进行支原体培养鉴定同时做药敏试验。结果 3 464例标本中支原体阳性2 131例,其中解脲脲原体(UU)阳性1 639例(76.9%),人型支原体(MH)阳性54例(2.5%),UU+MH混合感染438例(20.6%),总阳性率为61.5%。不孕组、妇科炎症组、未诊断组、体检组阳性率分别为63.5%、67.6%、60.3%、48.6%;妇科门诊、生殖健康门诊、围产科门诊、体检部阳性率分别为68.2%、61.8%、55.1%、38.9%。药敏结果:UU对交沙霉素(98.5%)、克拉霉素(96.1%)、阿奇霉素(87.8%)等敏感性高,对红霉素、喹诺酮类有较高耐药率。MH和UU+MH则对交沙霉素、美满霉素、强力霉素等敏感性高,对其它抗菌药均有较高耐药率。结论检出支原体其致病性应根据临床情况具体分析,支原体具有较高耐药性,耐药率最低的是交沙霉素,通过药敏试验指导临床合理用药提高治愈率,减少耐药株的产生。

儿童急性中耳炎常见病原菌及耐药分析

目的了解钦州地区儿童急性中耳炎常见病原菌及其耐药情况，为临床诊断和治疗提供依据。方法采集2006年3月至2009年3月钦州市妇幼保健院急性中耳炎患儿的中耳分泌物进行常规病原菌的分离培养，通过TDR-200B微生物分析系统进行鉴定，采用微量肉汤稀释法进行药敏试验。结果从123例标本中115例标本检出病原菌，共分离出119株病原菌，检出率为93．5％，其中有4例标本检出2株病原菌。分离的致病菌主要有：金黄色葡萄球菌26株，凝固酶阴性葡萄球菌24株，肺炎链球菌19林，铜绿假单胞菌9株，奇异变形杆菌5株，肺炎克雷伯菌5株，流感嗜血杆菌4株，大肠埃希菌3株，念珠菌属7株。葡萄球菌产β内酰胺酶已达80％以上，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌分别为19．2％和37．5％，对万古霉素未见耐药，对庆大霉素、喹喏酮类、利福平的耐药率也较低。肺炎链球菌对青霉素有10．5％的耐药率。肠杆菌科对关洛培南全部敏感，对加酶抑制剂的复合抗菌药物耐药率较低，对第3代头孢菌素耐药率在20％～40％，对氨苄西林和复方新诺明的耐药率高。铜绿假单胞菌对阿米卡星、头孢他啶、左氧氟沙星、美洛培南等耐药率较低。结论钦州地区儿童急性中耳炎常见病原菌有金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、肠杆科细菌、铜绿假单胞菌等，治疗应根据药敏试验结果选择安全有效的药物及时进行局部或全身用药。

实时荧光定量PCR快速诊断肺炎链球菌

目的建立实时荧光定量聚合酶链反应(PCR),用于肺炎链球菌检测和流行病学调查。方法以肺炎链球菌自溶素(lyt)和溶血素(ply)的基因为目的序列分别设计引物和探针,将其分别与10株肺炎链球菌、13株非肺炎链球菌DNA以及不同浓度梯度的肺炎链球菌DNA进行荧光定量PCR,并将引物和探针应用于200例临床标本检测,同时通过传统的微生物培养鉴定的方法来验证荧光定量PCR的特异性和敏感性。结果 10株肺炎链球菌均获得了明显的扩增产物,13株非肺炎链球菌DNA无明显的扩增信号,其检测敏感性可达100 fg;200例临床标本,实时荧光定量PCR检测出42例肺炎链球菌阳性(阳性率为21%),而培养法阳性16例(阳性率为8%)。结论实时荧光定量PCR是一种敏感、特异、快速的检测肺炎链球菌方法,可用于肺炎链球菌的诊断和流行病学调查。

钦州地区儿童细菌感染性腹泻的病原菌及药敏试验分析

目的分析钦州地区儿童细菌感染性腹泻常见病原菌及其耐药情况,为临床诊疗提供依据。方法采集2006年1月至2009年12月钦州市妇幼保健院腹泻患儿的大便标本进行常规病原菌的分离培养,通过TDR-200微生物分析仪和血清凝集试验进行鉴定,采用药敏板条微量肉汤稀释法进行药敏试验。结果从1930例标本中检出274株病原菌,检出率为14.2%,常见的病原菌有259株,其中志贺菌117株,致病性大肠埃希菌88株,沙门菌32株,奇异变形杆菌22株。几种主要致病菌对美洛培南均未耐药,第3代头孢菌素和加酶抑制剂的复合药物耐药率多在25%以下,对氨苄西林和复方新诺明的耐药率高,奇异变形杆菌对抗菌药物的耐药性总体较低。结论钦州地区儿童细菌感染性腹泻的常见病原菌是志贺菌、致病性大肠埃希菌、沙门菌和奇异变形杆菌。儿童细菌感染性腹泻宜选用第3代头孢菌素、加酶抑制剂复合药物及碳青霉烯类药物等进行治疗。

TaqMan实时荧光定量PCR检测肺炎链球菌

目的利用实时荧光定量聚合酶链反应(实时PCR)方法进行肺炎链球菌的检测和流行病学调查。方法用实时PCR技术扩增并检测400例临床标本的肺炎链球菌的自溶素(lyt)基因,并将其与传统的培养法进行对比。结果 400例临床标本中,实时PCR检测肺炎链球菌为阳性的有78例(阳性率为18%),传统培养法结果为阳性的有29例(阳性率为7.25%)。结论实时PCR是一种灵敏、特异、快速的检测肺炎链球菌方法,其可用于肺炎链球菌的诊断和流行病学调查。

新生儿肺炎常见病原菌及耐药性分析

目的探讨新生儿肺炎常见病原菌的种类及其耐药情况,为临床选择使用合适的抗生素提供依据。方法对本院2006年2月至2008年2月收治的新生儿肺炎患儿的呼吸道标本进行培养分离、鉴定出的常见病原微生物(前7种)进行病原学分析。结果312株病原菌中革兰阴性杆菌244株,常见的有:肺炎克雷伯菌86株、铜绿假单胞菌60株、鲍曼不动杆菌30株、阴沟肠杆菌30株、大肠埃希菌20株。革兰阳性球菌68株,其中凝固酶阴性葡萄球菌43株,金黄色葡萄球菌18株。上述病原菌均是从住院新生儿肺炎患儿气管吸出物(痰)、气管插管头分离出的细菌。凝固酶阴性葡萄球菌耐甲氧西林发生率为55.8%,对青霉素类、苯唑西林及红霉素、头孢类等具有较高耐药性,对万古霉素、庆大霉素、喹喏酮类药等敏感性很高;革兰阴性杆菌对氨苄西林/舒巴坦、头孢菌素类已有较高的耐药率,对美洛培南(碳青霉烯类)、氨基糖甙类以及喹诺酮类、哌拉西林/他唑巴坦具有高敏感性。肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的产生率分别为51.2%和40.0%,ESBLs的肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌仅对碳青霉烯类、氨基糖甙类以及喹诺酮类少数抗菌药物敏感,而对第三代头孢菌素高度耐药。结论肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、凝固酶阴性葡萄球菌等是新生儿肺炎患儿中检出率很高的几种病原菌,随着各种抗菌药物的广泛使用甚至滥用,在治好一些感染性疾病的同时也不断筛选出更多的多重耐药的菌株,应及时从临床标本中分离出病原菌并做好药敏试验,为临床合理使用抗生素提供可靠依据,尽量遏止细菌耐药性的蔓延。

剖宫产手术切口支原体感染5例分析

目的探讨剖宫产手术切口感染支原体的情况、为临床治疗和预防提供帮助。方法对2008年5月至2009年5月在本院剖宫产术后腹部切口感染的产妇取切口分泌物进行支原体及其他病原体培养。结果送检的产妇剖宫产腹部切口分泌物中有5例支原体培养阳性,其中3例解脲脲原体(Uu)、1例人型支原体(Mh)、1例Uu合并Mh。3例Uu对美满霉素、阿奇霉素、强力霉素、克拉霉素均敏感;Mh则对四环素、强力霉素、美满霉素、交沙霉素等敏感;Uu合并Mh的则只有交沙霉素对两种支原体同时敏感。结论Uu及Mh可引起剖宫产术腹部切口的感染,导致切口愈合不良,应采取必要的预防措施,并进行针对性的培养和药敏试验,为临床治疗提供依据。

免疫荧光法检测C-反应蛋白的临床应用分析

目的探讨免疫荧光法检测血清C-反应蛋白在感染性疾病和心血管疾病等诸多疾病中的临床应用。方法采用免疫荧光法检测血清中C-反应蛋白包括超敏C-反应蛋白(hs-CRP)和常规C-反应蛋白(cRP)。结果在婴幼儿感染性疾病中细菌性炎症(化脓性脑膜炎、败血症、脓肿、脐炎)CRP>25mg/L和hs-CRP>3.0mg/L者分别占77.3%和95.5%,两组构成比均高于病毒感染多见的疾病(肺炎、支气管肺炎、上呼吸道感染、小儿肠炎)的6.2%、27.4%和病毒感染性疾病(手足口病、CNS病毒感染)的0.0%、51.6%,差异有统计学意义(P<0.05)。其它(消化道出血、窒息、早产、湿肺)非感染性疾病则以CRP<10mg/L、hs-CRP<1.0mg/L为主,分别占98.7%和83.1%。婴幼儿CRP<25mg/L、hs-CRP<1.0mg/L时,细菌培养阳性组与病毒感染组分布比例接近,差异无统计学意义(P>0.05);CRP<25mg/L、hs-CRP>3.0mg/L时,细菌培养阳性组分布比例为22.9%,低于病毒感染组的51.6%,差异有统计学意义(P<0.01);CRP>25mg/L、hs-CRP>3.0mg/L时则细菌培养阳性组分布比例高于病毒感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。成人感染性疾病中CRP>50mg/L者,发热占77.8%,肺炎占68.7%,支气管肺炎占13.3%;外伤、直肠癌、产后出血等分别占78.6%、75.0%、69.2%。心血管疾病hs-CRP>3.0mg/L者占47.2%,hs-CRP 1.0～3.0 mg/L者占33.3%, hs-CRP<1.0mg/L者占19.5%。结论免疫荧光法定量检测CRP、hs-CRP临床应用广泛,特别是对幼儿、成人感染性疾病的诊疗及心血管疾病危险评级等有重要参考价值,是灵敏的实验室指标。

HBsAg阳性产妇血清及乳汁HBV-DNA定量分析及应用

目的 为选择方便、准确的方法定量检测产妇血清及乳汁HBV-DNA的含量,依据两项检测结果特别是乳汁中乙型肝炎病毒载量,指导母乳喂养.方法 选择HBsAg阳性的产妇232例,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测产妇血清及乳汁HBV-DNA的含量.结果 232例血清HBsAg阳性产妇血清HBV-DNA阳性177例,据血清HBV-DNA的含量,分≥105 copy/ml和＜105 copy/ml两组,两组乳汁HBV-DNA阳性符合率分别为为54.4%和14.9%,两组比较差异有统计学意义（P＆lt;0.01）.血清HBV-DNA阴性者乳汁HBV-DNA均阴性,血清HBV-DNA阳性者乳汁HBV-DNA总阳性符合率为37.9%.结论 血清HBV-DNA定量检测阳性的产妇其乳汁中HBV-DNA检测阳性的占较大比例,且乳汁中HBV-DNA含量与血清病毒含量成正比.检测HBV感染产妇乳汁中HBV-DNA含量,对阻断母婴传播,为HBV感染产妇选择是否母乳喂养提供了指导依据.

不分型检测高危型乳头瘤病毒8个常见亚型的临床应用

目的：检测高危型人乳头瘤病毒的8个常见亚型，分析其对防治富颈癌的临床应用价值。方法：取女性宫颈拭子用实时荧光定量PCR法不分型同时检测高危型乳头瘤病毒（HR—HPV）最常见的8个亚型。结果：518例宫颈拭子中HR—HPV（16、18、31、33、45、52、53、58）8亚型检出阳性86例，阳性率16．6％。86阳性病例中宫颈上皮细胞在正常范围（WNL）和意义不明的不典型鳞状细胞（ASCUS）73例；低度鳞状上皮内病变（LSIL）8例；高度鳞状上皮内病变（HSIL）3例；鳞状细胞癌（SCC）2例。结论：高危型人乳头瘤病毒最常检出的8个亚型是引起宫颈上皮内瘤样病变及宫颈癌的主要病因，开展此项检测对宫颈病变的筛查及防治很有价值。

婴幼儿肺炎克雷伯菌肺炎76例药敏分析

目的 探讨婴幼儿肺炎克雷伯菌的药敏情况,了解肺炎克雷伯菌非产超广谱β内酰胺酶与产超广谱β内酰胺酶的发生情况,以指导临床合理使用抗生素.方法 回顾分析笔者所在医院2007年1月～2009年11月住院患儿的临床资料,呼吸道分泌物细菌培养出肺炎克雷伯菌,进行鉴定及药敏试验测定,并行SEBLs检测.结果 培养出76株肺炎克雷伯菌,其中非产ESBLs菌株43例,占56.58%,对美洛培南、左氧氟沙星100%敏感,对哌拉西林/他唑巴坦、第三代头孢菌素抗生素有较低的耐药率;产SEBLs菌株33例,占43.42%,对美洛培南、左氧氟沙星100%敏感,第三代头孢菌素绝大部分耐药.结论 肺炎克雷伯菌非产SEBLs菌株普遍敏感,产SEBLs菌株耐药强.应根据药敏试验结果选择敏感抗生素,以减少ESBLs菌株的产生.

钦州地区地中海贫血罕见基因型检出情况分析

目的了解广西钦州地区地中海贫血罕见基因型的类型及所占比例,以更好地指导基因诊断及产前诊断。方法选取2011年12月至2014年3月在钦州市及周边辐射地区经地贫筛查并在钦州市妇幼保健院(广西地中海贫血产前诊断分中心)进行基因检测的对象12 374例。在常规地中海贫血基因检测的基础上,采用MLPA、DNA测序、Gap-PCR、深度测序等技术对血液学表型与基因型不符的样本作罕见基因型检测。结果检出各类罕见基因型占全部检出基因型的0.46%,α-地中海贫血罕见基因型检出22例,其中--THAI9例,含HKαα基因型3例,含αααanti3.7或αααanti4.2基因型5例,-α4.2-Q Thailand基因型2例,有2例基因型为同一家系,为新发现的-αQINZHOU基因型。β-地中海贫血相关的罕见基因型17例,其中点突变9例,遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症东南亚缺失型(HPFH-SEA)5例,δβ地贫中国型缺失2例,有2例为调铁素调控基因发生的突变。有6例因夫妻双方为同型携带者需要做产前诊断,其中1例胎儿为基因型复杂的中间型地贫。结论除常见及常规检测的地中海贫血基因型外,出现血液学表型与基因型不符时,应注意进一步做罕见基因型的检测以避免漏诊或误诊。

广西北部湾地区人群地中海贫血基因突变分析

目的了解广西北部湾地区人群地中海贫血等位基因分布情况。方法采用Gap-PCR、PCR-RDB、AS-PCR、MLPA和测序等方法,对21 137例受测者进行分析。结果共检出6种常见α地贫等位基因,8种罕见α地贫等位基因,分别是-α21.9、HKαα、--THAI、αααanti3.7、αααanti4.2、Qthailand、α2-α2α1和α2:CD30 GAG>CAG,常见α地贫等位基因占总检出量的99.58%;共检出14种常见β地贫等位基因,7种罕见β等位基因,分别是HPFH、Gγ+(Aγδβ)0、-90M、95M、Int(G>A)M、37M和-50M,常见β地贫等位基因占检出量的99.41%。在研究中,研究组将所检测的Hb A2值和Hb F值根据所测出的地贫基因型进行分类,经数据分析,Hb A2值是较好的预测β地贫基因型阳性的指标,研究组将阳性切值定义为3.2。在检测中也应留意Hb F值较高的个体,以防止缺失型β地贫基因型的漏检。结论广西北部湾地区人群地中海贫血基因携带者较多,在日常检测中,检测中心应遵循血常规、血红蛋白检测和基因分析的检测流程,并配置多种检测方法,以降低该地区人口出生缺陷几率。

钦州市4304例地中海贫血基因诊断结果

目的了解地处南方沿海地区的钦州市人群地中海贫血突变基因构成比。方法以来医院进行产前检查的孕妇夫妻中,夫妻一方或双方地中海贫血筛查阳性,自愿进行地中海贫血产前基因分析者为研究对象。基因型确诊运用PCR法或PCR结合反向点杂交(RDB)技术进行地中海贫血常见突变分析。结果在4 304例筛查人群中,经基因诊断后,确诊为地中海贫血基因携带者3 033例,检出α地中海贫血基因携带者1 848例,β地中海贫血基因携带者904例,β地中海贫血复合α地中海贫血基因携带者281例。3种常见α地中海贫血缺失型基因的突变频率是:--SEA占63.22%;-α3.7占12.45%,-α4.2占7.14%;3种常见的α地贫非缺失型基因的突变频率是:ααWS/αα占5.35%、ααCS/αα占3.8%,ααQS/αα占1.46%;检出13种β基因突变类型,其中7种常见β基因突变类型的构成比是:41-42M占44.64%,17M占22.79%,-28M占9.9%,654M占7.85%,βBE占6.92%。71-72M占4.22%,IVS-1-1M占1.56%,其他均在1%以下。此次检测还发现了形式多种的复合型地中海贫血基因携带者,除α地贫复合β地贫基因携带者外,还有各种缺失型复合非缺失型地贫基因携带者,如-SEA/ααCS,-α4.2/ααWS,-α3.7/ααCS9,-SEA/ααWS,-α3.7/ααWS,-α4.2/ααCS,-α3.7/ααQS等基因型。结论本研究获得了地处我国南方沿海的广西钦州市人群的地中海贫血基因突变谱的分布特点,为钦州市开展地贫人群遗传咨询、产前诊断和预防计划提供了有价值的资料。

胎儿亲子鉴定中21-三体综合征1例

1 案例资料 1．1简要案情 2012年本单位受理1起亲子鉴定案，征得当事人同意，采集母亲（孕5月余）、嫌疑生父的口腔拭子及羊水（胎儿样本），进行STR分型实验。

产前诊断中地中海贫血--^(THAI)型和HPFH-SEA型的基因检测

目的建立可用于--THAI型和HPFH-SEA型地中海贫血的基因检测的实验体系。方法设计针对--THAI型和HPFH-SEA型地中海贫血的基因的Gap-PCR引物,经PCR扩增后用琼脂糖凝胶电泳方法进行分析。结果采用所构建的实验体系,可检出--THAI型和HPFH-SEA型基因型。讨论在日常检案中,应密切留意血液学检测与常规地贫基因分型试剂盒分型不一致的情况,避免--THAI型和HPFH-SEA型基因型的漏检。

利用双色实时荧光定量PCR法快速进行产前诊断

目的利用双色实时荧光定量PCR法进行21-三体与18-三体的快速产前诊断。方法分别以21号的APP基因与18号染色体的TYMS基因为目的基因设计引物和不同荧光标记的Taqman探针,以相对定量指标△CT值判断21号与18号染色体的数目;并将其检测结果与传统染色体核型分析方法进行对比。结果 60例羊水细胞区分出了4例21-三体,3例18三体标本,正常人的△CT值为-0.89±0.22,21-三体患者及18-三体患者的△CT值分别-0.04±0.17和-1.55±0.24,患者与正常人标本组之间无交叉重叠,均有明显差异(P<0.001)。结论实验建立的双重实时荧光定量PCR能用于快速诊断羊水细胞的21-三体和18-三体等非整倍体。

亲子鉴定中一例FGA罕见等位基因13的分析

目的对疑似FGA罕见等位基因携带者进行分析研究,以确定其罕见等位基因的核心序列。方法合成PCR(Polymerase Chain Reaction)引物,扩增后切胶回收并测序。结果该FGA罕见等位基因核心序列为13。结论本案的研究为判别类似的罕见等位基因提供了参考方案。