慢病毒载体介导的脂肪干细胞miR-1重组表达系统的构建

目的构建miR-1稳定过表达并且适于体内示踪的基因修饰大鼠脂肪干细胞(rASCs)模型.方法首先对体外培养的rASCs进行表型鉴定及成骨、成脂诱导分化;然后观察重组慢病毒转染rASCs过程中不同感染复数(MOI)及有无添加聚凝胺(polybrene)对报告基因萤火虫荧光素酶(FLuc)表达和活性的影响;最后采用qRT-PCR检测miR-1-3p和miR-1-5p的表达水平.结果通过观察FLuc介导酶促反应引起的生物发光筛选出最佳转染条件为MOI 60,且添加聚凝胺能增强慢病毒转染rASCs的效率;随后应用该条件转染rASCs构建miR-1稳定过表达模型,qRT-PCR结果显示miR-1-3p和miR-1-5p的表达水平分别升高了65.6倍和37.4倍(P<0.05),证实该模型构建成功.结论慢病毒载体能成功介导外源基因在rASCs中稳定过表达,并且报告基因FLuc催化底物产生的生物发光有利于进一步的体内示踪研究.总言之,本研究为基因修饰细胞模型的构建提供了方法学基础,并为心肌组织再生修复提供新的工程细胞株.

miRNA-17～92基因簇在冠状动脉疾病中的研究进展

微小RNA(miRNA/miR)是一类非编码单链短RNA,通过靶向信使RNA(mRNA)抑制其翻译或促进其降解从而调控基因表达。部分miRNA基因紧密相连并排列成簇,miRNA基因簇的个体之间可能以协同的方式发挥生物学效应。miR-17～92基因簇及其旁系同源体通过调控多种靶基因表达参与冠状动脉疾病的病理生理过程。本文阐述miR-17～92基因簇及两个旁系同源体在脂质代谢和冠状动脉粥样硬化发生发展中的作用,以及对冠状动脉疾病诊断和预后评估的价值。