杜仲细胞悬浮培养产黄酮及其动力学研究

应用正交设计对杜仲细胞悬浮培养的基本培养基和植物生长物质浓度进行了筛选,并对影响杜仲细胞悬浮培养和总黄酮含量的不同因素进行了考察。结果表明,B5培养基+0.5mg/LNAA+0.6mg/L6-BA、蔗糖30g/L、初始pH5.0～5.5、接种量20g(FW)/L以及摇床转速110r/min为杜仲细胞悬浮培养的适宜条件。通过对杜仲悬浮细胞生长和代谢动力学的分析表明:杜仲细胞悬浮培养生长符合Logistic生长模型,最大比生长速率(μm)为0.417/d;细胞基于蔗糖的真正比生长得率(YG)与维持系数(m)分别为0.619g/g和0.0206g/(g.d-1);黄酮合成属部分生长耦联型,可用Luedeking-Piret模型进行描述。研究结果为杜仲细胞大规模悬浮培养生产天然活性成分奠定了基础。

剪切环境对南昌链霉菌形态和代谢的影响

通过在摇瓶和发酵罐上考察不同剪切环境对南昌链霉菌的代谢过程和菌丝形态的影响 ,并对某些菌丝形态参数进行了定量分析 ,发现南昌链霉菌对剪切的敏感性。在此基础上通过改变发酵罐上搅拌桨叶类型促进了前期菌体生长 ,并使最终发酵效价提高了 5

蛇足石杉内生真菌Shiraia sp.Slf14化学成分及其抑菌活性研究

利用多种现代色谱方法从药用植物蛇足石杉内生真菌Shiraia sp．Slf14发酵提取物的石油醚、乙酸乙酯萃取部位中分离纯化获得9个化合物，借助ESI—MS、NMR等波谱技术鉴定其结构分别为齿孔醇（1）、9，12-十八二烯酸-2，3-二羟基丙酯（2）、十八烷酸-2，3-二羟基丙酯（3）、十六烷酸-2，3-二羟基丙酯（4）、竹红菌甲素（5）、竹红菌乙素（6）、痂囊腔菌素B（7）、痂囊腔菌素C（8）和亚油酸（9）。其中化合物1—4、7和9为首次从该属真菌中分离得到。并在对石油醚萃取部位的GC-MS分析中，首次在该属真菌中检测到1-甲基-2吡咯烷酮、十五烷酸乙酯、9-十六烯酸乙酯、十六烷酸乙酯、9，12-十八碳二烯酸乙酯、9-十八烯酸乙酯和十八烷酸乙酯7种化合物。抑菌实验结果表明化合物2—5对指示菌均有不同程度的抑制作用，具有较高的药用价值和开发前景。

一株拮抗真菌的蛇足石杉内生细菌分离鉴定及培养条件优化

从蛇足石杉(Huperzia serrata)叶片中分离到一株对小麦赤霉(Fusarium graminearum)等多种植物病原真菌有强拮抗作用的内生细菌H-6。通过形态和培养特性观察、生理生化实验及16SrDNA序列分析,初步鉴定该菌属于伯克霍尔德属,命名为Burkholderia sp.H-6。同时还对该菌培养条件进行了优化,得出马铃薯浸出液中添加2.5%的甘露醇和0.1%NaNO3有利于细胞生长和抑菌活性的产生,最适培养温度为28℃,最佳初始pH4.0。

大孔树脂对金鸡菊黄酮吸附分离特性研究

选择8种大孔吸附树脂,比较其对金鸡菊类黄酮的吸附率和解吸率,并筛选出较优的金鸡菊类黄酮吸附剂,结果表明:AB-8树脂对金鸡菊类黄酮有较好的吸附和解吸效果。

银杏内生真菌菌株R2的鉴定及其抑菌活性

以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)3种微生物为指示菌,采用杯碟法对分离自药用植物银杏(Ginkgo biloba L.)的36株内生真菌进行抗菌活性检测。并通过形态学特征观察和ITS-rDNA序列系统发育分析对强抑菌活性菌株进行鉴定。结果发现,菌株L1、L4、L5、L7、T2、T3、R1和R2等8株内生真菌的发酵粗提物具有抑菌活性,其中以内生真菌R2的抑菌活性最高,抑菌圈直径分别为20 mm、20 mm和21 mm。结合形态学特征和ITS-rDNA序列分析确定菌株R2为尖孢枝孢菌(Cladosporium oxysporum)。

气升式反应器培养集胞藻6803过程中光能利用特性研究

在气升式光生物反应器中,对集胞藻6803分批培养条件下的光衰减、平均光强、光的分布以及藻细胞生长对光能的利用特性进行分析。结果表明:Lambert-Beer定律可较好描述细胞浓度及光程对光衰减的影响;随着藻细胞密度的增加,光生物反应器内平均光强不断减小,藻细胞的比光能吸收速率和比生长速率也不断降低,反应器中"暗区"体积在培养6d后超过总体积的80%;利用Pirt细胞生长生物能量模型描述比生长速率和比光能吸收速率的关系,在入射光强为58.73KJ/(m2·h),求得基于光能的细胞得率YG和维持系数m分别为9.98×10-3g/kJ和0.445kJ/(g·h)。

蛇足石杉中石杉碱甲含量测定及其时空动态

采用HPLC法首次测定江西庐山和井冈山蛇足石杉不同时期、不同组织部位中石杉碱甲(HupA)的含量.结果表明,蛇足石杉中HupA含量随着季节的推移逐渐增加,庐山和井冈山蛇足石杉植株HupA含量均在每年12月达到最高,分别为211.9μg·g-1和325.9μg·g-1.蛇足石杉中不同组织部位HupA含量各不相同,茎部和叶部HupA含量较高,且表现出相同的变化趋势,根部含量较少.本研究揭示了蛇足石杉中HupA含量的时空动态变化规律,从而为合理利用该稀缺植物资源提供科学参考.

不同环境因子对谷皮菱形藻生长的影响

本实验研究了不同环境因子包括氮源种类、氮源浓度、硅盐浓度、光强、盐度和pH值对谷皮菱形藻生长的影响。结果表明,以CO(NH2)2为氮源生长最快,最大比生长速率和最大细胞浓度最大,分别为0.49d-1和0.54g/L;NaNO3浓度为0.72g/L时,有利于谷皮菱形藻生长;在硅酸钠浓度0～0.4g/L的范围内,随着硅浓度的增加,谷皮菱形藻生长明显加快;光强对谷皮菱形藻的影响十分显著,易成为其生长的限制因素;NaCl浓度0.15mol/L时,谷皮菱形藻最大比生长速率和最大细胞浓度最大;碱性的培养液最利于谷皮菱形藻生长。

羰基还原酶工程菌构建及其应用于还原制备S-CHBE

S-4-氯-3-羟基丁酸乙酯(S-CHBE)是多种药物的手性中间体,可由4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE)不对称还原合成。该研究对来自Candida magnoliae AKU4643的S1羰基还原酶基因进行E.coli密码子优化,获得的S1'基因序列并进行人工合成,利用该序列构建了基因工程菌BL21(DE3)/pET28a-S1',提高了羰基还原酶表达效率,经诱导条件优化后羰基还原酶活力达11.49 U/mg蛋白;将BL21(DE3)/pET28a-S1'与E.coli BL21(DE3)/pET28a-gdh进行偶联,在单一水相中未添加辅酶条件下转化10 h,产物的摩尔转化率和对映体过量值(e.e.)分别达92.1%和100%。

突托蜡梅叶化学成分及其抑菌活性

目的:对突托蜡梅(Chimonanthus grammatus M.C.Liu)叶的化学成分进行抑菌活性研究。方法:采用多种柱色谱技术进行分离,根据其理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。结果:鉴定了9个化合物:蜡梅碱(1)、β-谷甾醇(2)、豆甾醇(3)、胡萝卜苷(4)、4-羟基-3((2E,6E)-3,7,11-三甲基十二烷-2,6,10-三烯)苯甲酸(5)、(E)-4-(4,8-二甲基壬-3,7-二烯)呋喃-2(5H)-酮(6)、邻苯二甲酸二异丁酯(7)、槲皮素(8)和东莨菪素(9);抑菌实验结果显示化合物5、6、7和9均对受试菌均有不同程度的抑菌活性。结论:化合物5、6、7和9均是首次在该属植物中分离得到,且均显示较好的抑菌活性。

1株羊蹄强拮抗内生芽孢杆菌H-g的分离鉴定

从羊蹄(Radix Rumicis Japonici)根中分离到1株对小麦赤霉(Fusarium graminearum)等多种植物病原真菌有强拮抗作用的内生芽孢杆菌H-g.通过形态特征和培养特征观察、生理生化实验及16S rDNA序列分析,初步鉴定该菌为枯草芽孢杆菌属,命名为bacillus subtilis subsp H-g.

高效液相色谱法测定杜仲愈伤组织和悬浮细胞中绿原酸

目的建立高效液相色谱法测定杜仲愈伤组织和悬浮细胞中绿原酸含量。方法利用Hypersil C18-ODS柱（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱，乙腈-水-磷酸溶液（12：87．9：0．1）为流动相，检测波长为327nm，流速1．0ml／min，柱温为25％。结果绿原酸在2．216～55．4μg/ml范围内线性关系良好，r=0．9981，愈伤组织和悬浮细胞中绿原酸的平均加样回收率分别为100．69％和97．62％，RSD分别为2．42％和2．71％。结论该方法快速简便，准确可靠。杜仲愈伤组织和悬浮细胞中绿原酸含量分别为1．528mg／g和3．949mg／g。

羊蹄内生真菌的分离鉴定及其多样性分析

[目的]为从羊蹄中寻找具有药用价值的内生真菌奠定基础。[方法]利用PDA培养基进行羊蹄内生真菌的分离、纯化和初步鉴定,并对其进行多样性分析。[结果]从羊蹄中共分离到45株内生真菌,其中根部21株,占46.67%。从茎部和叶部分别分离到14株和10株。这说明羊蹄根部的内生真菌资源比茎部和叶部更为丰富。羊蹄根部的内生真菌比茎中和叶中生长得快。形态学鉴定结果表明分离菌株中共有青霉属8株,木霉属4株,镰孢霉属3株,拟茎点霉属、黑霉属和曲霉属各1株,无孢类群27株(占整个内生真菌类群的60%)。[结论]青霉属、木霉属和镰孢霉属为羊蹄内生真菌的优势种属,而无孢类群为其绝对优势类群。

用于微生物油脂发酵的木薯淀粉水解工艺的优化

为了提高木薯淀粉的发酵产脂能力,采用正交实验和均匀设计法对木薯淀粉酶法水解工艺进行了优化,结果表明α-淀粉酶量、糖化酶量和液化温度对木薯淀粉水解有显著影响。当淀粉酶量为756 U/g,糖化酶量为602 U/g,液化温度为92°C,其水解DE值达到97.3%。以该水解液进行皮状丝胞酵母B3(T.cutaneum B3)油脂发酵时,其生物量和油脂产量分别为16.38 g/L和7.22 g/L,比葡萄糖作为碳源的生物量和油脂产量高46.25%和41.12%,利用木薯淀粉水解液作为新型发酵碳源生产微生物油脂是一种理想的途径。

内生真菌SF4的鉴定及产乙酰胆碱酯酶抑制剂发酵条件的初步优化

基于菌株菌落和显微形态特征以及ITS-r DNA序列分析结果,将产乙酰胆碱酯酶抑制剂(ACh EI)的内生真菌SF4鉴定为枝顶孢霉属Acremonium sp.真菌,命名为Acremonium sp.SF4.通过对菌株SF4发酵的基础培养基、发酵温度、发酵时间、摇床转速进行初步优化,确定了其最适产ACh EI的摇瓶发酵条件为:沙氏培养基,发酵温度28℃,摇床转速为150 r·min-1,发酵培养14 d.在此条件下可发酵获得含ACh EI的发酵浸膏0.331 g·L-1,对乙酰胆碱酯酶的抑制率可达60.27%,相比优化前均有提高.研究有助于后期规模化高效发酵,为分离、纯化和结构解析单一组分ACh EI奠定基础.

蜜桔果酒用非酿酒酵母的分离鉴定、发酵特性及挥发性香气成分分析

目的:获得适合蜜桔果酒发酵的非酿酒酵母。方法:从南丰蜜桔自然发酵液中分离产香酵母菌,经26S rDNA序列分析来鉴定菌株。根据单菌发酵后蜜桔酒的残糖、乙醇、总酸、pH来筛选发酵能力较好的菌株,采用顶空气相色谱质谱(headspace-gas chromatography-mass spectrometry,HS-GC-MS)分析蜜桔果酒香气成分。结果:一共分离出7株产香酵母,鉴定为Pichia fermentans、Pichia aff.fermentans、Pichia kluyveri、Hanseniaspora guilliermondii、Hanseniaspora opuntiae、Hanseniaspora thailandica、Candida ethanolica。其中,C.ethanolica具有较好的蜜桔酒发酵性能,发酵后果酒残糖为1.2 g/L,乙醇为8.9%;H.thailandica是一株发酵蜜桔果酒产香能力较好的菌株,能够产生较少的杂醇和挥发性酸和丰富的酯类物质,包括乙酸乙酯、羊蜡酸乙酯、月桂酸乙酯、辛酸乙酯、乙酸苯乙酯、丙酸乙酯、乳酸乙酯等,能够减弱尖酸味,协调苦涩味,令酒香醇厚,并且具有较好的感官评分。结论:本研究得到一株具有较好的蜜桔果酒发酵性能的酵母菌C.ethanolica,和一株产香能力较好的酵母菌H.thailandica,为后续混合发酵改善蜜桔果酒风味提供研究基础。

光生物反应器中光传递模型在微藻培养中的应用

微藻光自养生长的细胞密度很大程度上受到光生物反应器中光能传递效率的限制,研究光生物反应器中光能传递规律是提高微藻光能利用效率的基础。分别综述了微藻在光生物反应器中的光衰减和光强分布数学模型,这些模型不但能揭示微藻培养过程中光能的动态变化规律,也为开发高效的光生物反应器和优化培养工艺提供理论依据。

高效液相色谱法测定山香圆中熊果酸含量

目的采用高效液相色谱（HPLC）测定山香圆中熊果酸的含量。方法色谱条件：Hypersi ODS C18色谱柱（4．6mm×250mm；5μm）；流动相为乙腈：甲醇（体积比为68：32），检测波长210nm，流动相流速1．0ml／min，柱温25％。结果熊果酸检测的线性范围0．50～10．05mg（R^2=0．9987），平均回收率为99．28％，相对标准偏差（RSD）为1．96％（n=5）。结论该方法准确、快捷、灵敏、重复性好，可作为山香圆药材及相关制剂质量控制的一个有效方法。

不同碳源对内生真菌Shiraia sp. Slf14产苝醌类色素的影响

苝醌类化合物是一类具有抗癌、抗病毒活性的光敏性色素.该文比较了不同碳源对蛇足石杉内生真菌Shiraia sp.Slf14液态发酵产苝醌类化合物的影响,结果表明:可溶性淀粉有利于Shiraia sp.Slf14菌体的生长,而果糖则有利于苝醌类化合物的生物合成.当果糖浓度为60 g·L^-1时,菌体苝醌类化合物总产量可达1 566.64 mg·L^-1,同时果糖能提升竹红菌甲素组分的含量.菊粉作为一种来源于菊芋的果糖基生物质,同样有利于苝醌类色素的生物合成,当其浓度为40 g·L^-1时,色素总产量可达1 322.85 mg·L^-1,且其有利于痂囊腔菌素A组分积累.