加味四妙方通过调控蛋白多糖降解治疗大鼠痛风性关节炎的机制研究

目的:基于蛋白多糖降解探讨加味四妙方对单钠尿酸盐(MSU)诱导的大鼠痛风性关节炎(GA)的作用及其作用机制。方法:将6只SD大鼠随机分为空白组和模型组,每组3只,模型组向关节腔内注射0.1 mL MSU溶液(100 mg/mL)建立GA模型,对照组注射等体积生理盐水。24 h后对两组大鼠的滑膜组织进行转录组测序,筛选出差异表达基因。体外培养家兔膝关节软骨细胞,甲苯胺蓝染色、RT-PCR法检测不同代数软骨细胞中蛋白多糖(PGs)的表达。采用Western blot与qRT-PCR法检测不同浓度MSU(200、500、1000µmol/L)处理后MMP-3的蛋白及mRNA表达。将33只SD大鼠随机分为空白组、模型组、给药组,每组11只。膝关节注射0.1 mL MSU溶液(100 mg/mL)制备大鼠痛风性关节炎模型,免疫组化检测滑膜组织中MMP-3的表达,番红固绿染色法检测大鼠关节软骨细胞蛋白多糖的表达。结果:MMP-3是显著上调的差异表达基因,与Jak/STAT信号通路、TGF-β信号通路、趋化因子信号通路、IL-17信号通路等密切相关。体外验证发现,与空白组比较,经250、500、1000µmol/L MSU刺激24 h后,MMP-3蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与空白组比较,MMP-3 mRNA表达水平经250µmol/L MSU刺激后明显升高(P<0.01),经500、1000µmol/L MSU刺激后其表达显著升高(P<0.001)。与空白组比较,经250、500µmol/L MSU刺激后,各组软骨细胞蛋白多糖表达均显著降低(P<0.05);与250µmol/L MSU组比较,10%和20%加味四妙方含药血清(MSM)组均能有效逆转上述结果(P<0.001)。与500µmol/L MSU组比较,20%MSM能够有效上调蛋白多糖的表达(P<0.05)。与空白组比较,模型组软骨细胞蛋白多糖mRNA表达显著降低(P<0.001);与模型组相比,10%MSM与20%MSM均能有效增加其mRNA表达(P<0.001,P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠膝关节肿胀明显(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各给药组能明显抑制其关节肿胀(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组MMP-3表达增加且关节软骨表层蛋白多糖丢失;与模型组相比,各给药组对上述现象均有明显改善作用。结论:加味四妙方通过抑制MMP-3生成调控蛋白多糖降解从而治疗痛风性关节炎。

三七总皂苷调控HIF-1α/PDHK1通路介导的CD4^(+)T细胞有氧氧化促进Treg分化的机制

目的观察三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)调控HIF-1α/PDHK1通路介导的有氧氧化,探讨其对促进Naive CD4^(+)T细胞向Treg细胞分化的机制。方法磁珠分选C57BL/6小鼠脾脏Naive CD4^(+)T细胞,诱导其向Treg细胞分化并进行体外培养,将Naive CD4^(+)T细胞分为PNS处理组(5、10、20μg·mL^(-1))、PNS联合HIF-1α抑制剂(PX-478)组,并设置对照组,采用流式细胞术检测Treg细胞分化比例,Western blotting检测HIF-1α、PDHK1蛋白表达,实时荧光定量PCR检测HIF-1α、PDHK1、FOXP3 mRNA的表达,酶联免疫吸附实验检测细胞培养上清液中IL-10的水平。结果PNS可显著增加Treg细胞比例,并增加其IL-10的分泌水平,使细胞中FOXP3 mRNA的表达增加;同时抑制HIF-1α、PDHK1蛋白及mRNA的表达。10μmol·L^(-1)的PX-478处理细胞后再以10μg·mL^(-1)的PNS干预细胞,其对PDHK1、FOXP3的表达及Treg细胞的分化比例的调控作用与单独使用10μmol·L^(-1)的PX-478处理细胞无明显差异。结论PNS通过HIF-1α抑制PDHK1的表达而增强Naive CD4^(+)T细胞的有氧氧化,促进其向Treg细胞分化。

关于幼儿自主游戏中的教师倾听策略探讨

师幼之间的和谐关系需要教师与幼儿之间进行有效的配合与交流,对教师而言,在授课过程中关注幼儿的健康成长与发展,并对幼儿进行科学的指引与帮助,认真倾听幼儿的表达与学习思路,为幼儿的健康成长提供有效帮助.随着教育改革的深入与发展,教师在幼儿进行自主游戏的过程中,认真倾听幼儿的观点,已成为现代幼儿教育中的重点内容,教师倾听幼儿的观点,能够及时掌握幼儿的心理变化,从而进行针对性的游戏指导,推动幼儿的健康成长.本文从幼儿自主游戏中教师倾听的角度出发,旨在顺利推进幼儿的游戏活动.