病毒性心肌炎小鼠不同时期心肌组织转录因子ROR-γt的表达

目的观察Th17细胞特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptorγt,ROR-γt)在柯萨奇病毒B3(coxsackie virus B3,CVB3)诱导的病毒性心肌炎小鼠不同时期心肌组织中的表达变化,初步探讨ROR-γt在病毒性心肌炎发病中的作用。方法雄性BALB/c小鼠腹腔注射CVB3建立病毒性心肌炎小鼠模型(实验组),对照组小鼠腹腔注射等量的磷酸盐缓冲液,按注射后第0、1、2、3、4、6周分为6个时点亚组,每个时点亚组至相应时间取小鼠心脏,苏木精-伊红染色观察心肌病理改变,半定量反转录聚合酶链反应测定小鼠心肌组织ROR-γt mRNA的表达,Western-Blotting测定小鼠心肌组织ROR-γt蛋白的表达。结果苏木精-伊红染色证实病毒性心肌炎模型构建成功。实验组小鼠中,1周亚组ROR-γt mRNA及其蛋白的表达较0周亚组升高,4周亚组表达最高,6周亚组表达低于4周亚组但仍高于0周亚组;实验组各亚组ROR-γt mRNA及其蛋白的表达与相应时间对照组各亚组比较,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论Th17细胞特异性转录因子ROR-γt在病毒性心肌炎小鼠心肌组织中呈高表达,且其变化趋势与Th17细胞改变趋势一致,提示ROR-γt通过参与病毒性心肌炎中Th17细胞的分化,可能参与病毒性心肌炎的免疫发病过程。

外源性IL-23对病毒性心肌炎小鼠Th17细胞增殖的影响

目的:观察小鼠重组IL-23(rIL-23)对病毒性心肌炎(VMC)小鼠Th17细胞增殖的影响。方法:BALB/c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)建立VMC小鼠模型,1周后磁珠分离脾CD4+T淋巴细胞后进行体外培养,分别加入植物血凝素(PHA)与重组小鼠IL-23(rIL-23)或PHA单独刺激进行体外培养5天。流式细胞术测定培养后Th17细胞占CD4细胞的百分比、RT-PCR测定培养细胞IL-17 mRNA的表达、ELISA法测定培养物上清液中IL-17的水平。结果:与单纯PHA刺激比较,rIL-23刺激后Th17细胞明显增加(1.82%±0.17%比4.70%±1.29%),且培养细胞IL-17 mRNA及上清液中IL-17浓度也增加,两组比较有统计学差异(P均<0.05)。结论:外源性rIL-23可以增加并维持Th17细胞的增殖。

尼可地尔在经皮冠状动脉介入治疗中对NLRP3炎症小体的干预作用

目的:探讨术前口服尼可地尔对经皮冠状动脉介入治疗(PCI)激活的Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体的干预作用,为临床上减轻PCI围术期心肌损伤提供理论依据。方法:入选入住我院心内科拟行择期PCI的冠心病不稳定型心绞痛患者80例,随机分为试验组42例和对照组38例,在常规药物治疗基础上,试验组于PCI术前3 d开始每日口服尼可地尔5 mg 3次,于PCI术前及术后24、48 h采集静脉血,比较两组患者NLRP3、白介素-1β(IL-1β)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、高敏肌钙蛋白T(hs-c Tn T)的变化。结果:两组PCI情况比较差异无统计学意义(P>0.05);试验组PCI术后24、48 h的NLRP3、IL-1β、hs-CRP、hs-c Tn T水平均较对照组下降(P<0.05)。结论:术前口服尼可地尔可以减少PCI相关NLRP3炎症小体的释放,减轻PCI术后心肌炎症反应,从而保护心肌。

小鼠病毒性心肌炎CXCL13表达及其意义

目的:检测病毒性心肌炎(VMC)小鼠急性期6个时间点CXCL13的表达,了解其与VMC发病的关系。方法:雄性Balb/c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)建立小鼠VMC模型为VMC组,腹腔注射等量PBS为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和免疫组化的方法检测第0周、第1周、第2周、第3周、第4周和第6周心肌组织中CXCL13 mRNA和CXCL13蛋白的表达量。二次磁珠分选出VMC小鼠CD4+CXCR5+T细胞(Tfh细胞),磁珠分离出未注射病毒的同龄正常BALB/c小鼠初始CD19^+B细胞,分别接种于transwell上室及下室,在下室培养液中加或不加CXCL13(100 ng/mL)进行共培养,5 d后ELISA检测上清液中抗腺嘌呤核苷酸转位子(ANT)抗体的浓度。结果:与对照组比较,VMC组小鼠自感染CVB3第1周心肌中CXCL13 m RNA的表达升高,第2周时表达最强,并一直持续到第6周,VMC组各周相对表达量均高于相应的对照组(P<0.05)。VMC组小鼠自1周起,心肌CXCL13呈现阳性表达,第2周时达峰值,并维持高水平至第6周(P<0.05)。CXCL13刺激后,Tfh细胞与B细胞分室共培养的上清液中抗ANT抗体升高(P<0.05)。结论:CXCL13在VMC小鼠心肌组织中高表达,并可增加VMC中抗ANT抗体的浓度,提示CXCL13与VMC存在密切关系,CXCL13有可能成为减轻VMC中自身抗体形成的新的治疗靶点。

外源性IL-23对病毒性心肌炎小鼠Th17细胞增殖的影响

目的观察小鼠重组IL～23（rIL-23）对病毒性心肌炎（VMC）小鼠Th17细胞增殖的影响。方法BALB／c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3（CVB3）建立VMC小鼠模型，1周后磁珠分离脾CD4^＋T淋巴细胞后进行体外培养，分别加入植物血凝素（PHA）与重组小鼠IL-23（rIL-23）或PHA单独刺激进行体外培养5天。流式细胞术测定培养后Th17细胞占CD4细胞的百分比、RT—PCR测定培养细胞IL-17mRNA的表达、ELISA法测定培养物上清液中IL-17的水平。结果与单纯PHA刺激比较，rIL-23刺激后Th17细胞明显增加（1．82％±0．17％比4．70％＋1．29％），且培养细胞IL-17mRNA及上清液中IL—17浓度也增加，两组比较有统计学差异（P均〈0．05）。结论外源性rIL-23可以增加并维持Th17细胞的增殖。

B淋巴细胞对急性心肌梗死后纤维化的作用及机制的研究进展

急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)是冠状动脉粥样斑块破裂,形成血栓,导致血管完全闭塞,造成部分心肌缺血坏死的一种严重心血管疾病[1]。虽然AMI患者经药物溶栓或急诊经皮介入治疗及时开通冠状动脉,提高AMI救治率,但仍有一部分患者发生心肌纤维化。心肌梗死后纤维化一旦进展为病理性重构,可引起严重不良心脏事件的发生。

尼可地尔联合瑞舒伐他汀对经皮冠状动脉介入治疗患者的心肌保护作用

目的观察尼可地尔联合瑞舒伐他汀对冠状动脉介入治疗患者心肌保护作用。方法将68例择期进行经皮冠状动脉介入治疗术(PCI)的冠心病患者随机分为对照组36例和试验组32例。对照组术前予瑞舒伐他汀10 mg,qd,共3 d;试验组在对照组的基础上,术前加用尼可地尔5 mg,tid,共3 d。比较2组患者临床疗效、PCI术前和术后24,48 h血清高敏肌钙蛋白T(hs-cTnT)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)水平,以及药物不良反应的发生情况。结果治疗后,试验组和对照组的显效率分别为78.13%(25例/32例)和52.78%(19例/36例),差异有统计学意义(P<0.05)。PCI术前,试验组和对照组hs-cTnT水平分别为(36.56±15.35),(30.29±13.67)pg·mL^(-1),hs-CRP分别为(3.67±1.24),(3.53±1.32)mg·L^(-1),TNF-α分别为(6.54±2.42),(6.76±2.15)pg·mL^(-1),IL-10分别为(6.87±1.92),(7.02±1.85)pg·mL^(-1)。PCI术后24 h,试验组和对照组hs-cTnT水平分别为(71.25±17.87),(82.65±18.34)pg·mL^(-1),hs-CRP分别为(9.48±2.35),(13.56±3.52)mg·L^(-1),TNF-α分别为(8.72±2.26),(10.65±3.16)pg·mL^(-1),IL-10分别为(13.55±4.51),(11.21±3.54)pg·mL^(-1);术后48 h试验组和对照组hs-cTnT水平分别为(60.56±15.64),(73.54±16.51)pg·mL^(-1),hs-CRP分别为(6.62±1.98),(10.24±2.84)mg·L^(-1),TNF-α分别为(7.56±1.86),(8.86±1.95)pg·mL^(-1),IL-10分别为(11.16±3.28),(9.76±3.11)pg·mL^(-1),术后24 h与术后48 h比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。试验组及对照组均没有出现明显的药物不良反应。结论 PCI术前尼可地尔联合瑞舒伐他汀可以降低炎性因子,提高IL-10,减轻PCI心肌损伤,安全性好。

外源性细胞因子对柯萨奇病毒性心肌炎小鼠脾Th17细胞的影响

目的:观察转化生长因子(TGF)-β、白细胞介素(IL)-6和IL-23对柯萨奇病毒性心肌炎(VMC)小鼠脾中Th17细胞分化增殖的影响。方法:以6周龄雄性Balb/c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒液建立VMC模型,1周后磁珠分离脾脏CD4+T淋巴细胞,分成对照组、TGF-β+IL-6组和TGF-β+IL-6+IL-23组进行体外培养。5d后应用流式细胞术测定刺激后Th17细胞的百分比;逆转录-聚合酶链式反应测定细胞中IL-17mRNA的表达;ELISA测定细胞培养上清液IL-17的水平。结果:与对照组比较,TGF-β+IL-6组Th17细胞数稍增加[(1.64±0.43)%∶(1.96±0.35)%],IL-17mRNA表达水平及细胞培养上清液IL-17浓度稍增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。而TGF-β+IL-6+IL-23组Th17细胞数显著增加(4.08±0.77)%、IL-17mRNA表达水平及细胞培养上清液IL-17浓度均明显高于前2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:外源性TGF-β联合IL-6对VMC小鼠脾中已分化的Th17细胞无增殖作用,而添加外源性IL-23则能显著增加Th17细胞数及其效应分子IL-17的表达。

病毒性心肌炎小鼠白细胞介素17和γ干扰素双阳性细胞的变化

目的观察病毒性心肌炎（VMC）小鼠不同时间点白细胞介素17和γ干扰素双阳性细胞（IL-17＋／IFN-γ＋细胞）的变化，探讨其在VMC发病中的作用。方法雄性Balb／c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3（CVB3）建立VMC小鼠模型（VMC组），对照组注射等量磷酸盐缓冲液，在注射的第0、1、2、3、4和6周苏木精-伊红染色观察心肌病理改变并计算心肌病理积分，流式细胞仪检测小鼠IL-17＋／IFN-γ＋细胞占CD4＋T细胞的比例。结果VMC组小鼠心肌组织病理积分于第1周升高（1．8±0．5），第2周达到最高（2．8±0．5），第3周开始逐渐降低，VMC组各时点与对照组相应时点比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。VCM组小鼠各时点脾IL-17＋／IFN-γ＋细胞维持在低水平，与对照组相应时点比较差异均无统计学意义（P均〉0．05），Spearman相关性分析显示IL-17＋／IFN-γ＋细胞与心肌病理积分无显著相关（P〈0．05）。结论VMC小鼠中存在少量IL-17＋／IFN-γ＋细胞，但可能与VMC的炎性过程无关。

病毒性心肌炎小鼠IL-9^+/Th17细胞的变化

目的:观察病毒性心肌炎(VMC)小鼠不同时间点白细胞介素(IL)-9+/Th17细胞的变化,探讨其在VMC发病中的作用。方法:BALB/c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)建立VMC小鼠模型(VMC组),对照组注射等量磷酸盐缓冲液,在注射的第0、1、2、3、4、5和6周,苏木精-伊红染色观察心肌病理变化,流式细胞仪检测小鼠IL-9+/Th17细胞占CD4+T细胞的比例。结果:VMC组小鼠第1～6周心肌组织病理积分升高,除第0周外,VMC组各时点与对照组相应时点比较均差异有统计学意义(均P<0.05)。VMC组小鼠各时点脾IL-9+/Th17细胞维持在低水平,与对照组相应时点比较均差异无统计学意义。Spearman相关性分析显示,IL-9+/Th17细胞与心肌病理积分无显著相关性。结论:VMC小鼠中存在少量IL-9+/Th17细胞,但可能与VMC的炎症过程无关。

静脉联合口服水化预防慢性肾功能不全患者对比剂肾病的效果研究

目的：比较静脉联合口服水化与常规水化预防慢性肾功能不全患者对比剂肾病的作用。方法选择心内科拟行冠脉介入诊治患者48例，分为短时间水化方案组25例，按3 ml/（ kg·h）速度在冠脉介入诊疗术前1 h至术后4 h进行生理盐水水化，按照1 ml/（kg·h）速度在术前4 h至术后10 h口服水化，常规水化方案组23例，按1 ml/（ kg·h）速度在冠脉介入诊疗术前12 h至术后12 h进行生理盐水水化。检测两组患者术前及术后1d、2d、3d血肌酐、胱抑素C水平，统计两组患者对比剂肾病发生率。结果两组患者在术前及术后1d、2d、3d血肌酐、胱抑素C、对比剂肾病发生率差异无统计学意义（ P〉0.05）。结论短时间静脉联合口服水化方案与常规水化方案预防慢性肾功能不全患者对比剂肾病的效果相当。