基于网络药理学和实验验证的蒙药如达-6治疗胃溃疡作用机制研究

目的:通过网络药理学和动物实验,探讨蒙药如达-6治疗胃溃疡的潜在活性成分、核心靶点和作用机制。方法:利用TCMSP、SwissTargetPredition、BATMAN-TCM、GeneCards、OMIM、PharmGkb、TTD和Drugbank数据库预测和筛选如达-6潜在活性成分及其治疗胃溃疡靶点。利用STRING数据库进行蛋白-蛋白(Protein-protein interaction,PPI)互作分析,使用Metascape数据库进行GO功能注释和KEGG通路富集分析。通过Cytoscape3.8.0软件绘制PPI网络和“成分-靶点”网络。建立吲哚美辛诱导的胃溃疡大鼠模型,观察如达-6对胃溃疡大鼠的胃保护作用,再利用q RT-PCR方法检测关键靶点的mRNA表达水平。结果:共筛选出如达-6的58个潜在活性成分和137个治疗胃溃疡靶点。通过PPI网络分析得到STAT3、PIK3CA、SRC、RELA、TP53、MAPK1、AKT1、JUN、CTNNB1和PTPN11等10个核心靶点;通过“成分-靶点”网络分析得到槲皮素、木犀草素、山柰酚、β-谷甾醇、豆甾醇、异鼠李素、华良姜素、5-羟基-7-甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基-苯基)色酮、3-甲基樟脑酚以及N-(2,5-二甲氧基苯基)-4-甲氧基苯甲酰胺等10个关键成分。功能富集分析显示,如达-6可能通过癌症的途径、人巨细胞病毒感染、PI3K/Akt信号通路、癌症中的蛋白聚糖、脂质与动脉粥样硬化以及MAPK等信号通路发挥抗胃溃疡作用。实验验证结果表明,如达-6对吲哚美辛诱导的胃溃疡大鼠具有预防性保护作用,可缓解胃组织病理学改变,并增加胃组织PIK3CA、TP53、MAPK1和AKT1的mRNA表达水平(P<0.05)。结论:通过网络药理学分析和实验验证,初步揭示了蒙药如达-6通过多成分、多靶点发挥抗胃溃疡作用。

32例慢性肺心病并发冠心病的临床分析

目的慢性肺心病并发冠心病的临床分析。方法 32例患者均在持续低流量吸氧,有效抗生素控制感染,解除支气管痉挛,祛痰平喘,纠正水电解质、酸碱平衡紊乱等治疗,并选择联合强心、利尿、扩冠基础上,给予低分子肝素钙6000u皮下注射,每日2次,连用7d。拜阿司匹林100mg或氯吡格雷75mg顿服。结果 32例患者中,症状、体征明显好转者28例,死亡2例,均死于多器官功能衰竭,2例未愈自动出院。结论治疗慢性肺心病并发冠心病必须重视基本治疗、联合治疗。

蓖麻基因组DNA提取方法研究进展

目前,基因组DNA的提取已有多种方法,但是不同的方法具有各自的优缺点。本文介绍了蓖麻基因组DNA提取原理,并叙述了近年来提取蓖麻基因组DNA的主要方法,如CTAB法、SDS法、试剂盒法、磁性微球法,通过比较这些不同提取方法的优缺点,分析了影响DNA纯度的因素,如样本的采集与保存、提取缓冲液成分的作用、DNA提取纯化方法等,以期为蓖麻相关研究提供理论基础。

蓖麻WOX转录因子家族成员的全基因组分析及逆境胁迫响应

WOX是植物中特有的一类转录因子,参与植物发育和应激反应。为探究蓖麻基因组WOX转录因子信息,本研究通过生物信息学方法鉴定出11个蓖麻WOX转录因子家族成员,并对其系统发育、基因结构、保守基序及理化性质等基本信息进行鉴定与分析。结果显示,11个WOX成员被分为三个进化支,在古代进化支、中间进化支和现在进化支分别有2、2和7个成员,同一进化支成员的外显子、基因结构具有相似性,但理化性质差异较大。利用RT-qPCR检测根、茎、叶不同组织中5个蓖麻RcWOXs基因在干旱与盐胁迫下表达情况,结果表明,RcWOXs在不同组织中的表达具有特异性;除RcWOX10受干旱胁迫抑制外,RcWOX2、RcWOX4、RcWOX8和RcWOX9在干旱和盐胁迫下均被诱导表达,表明RcWOX转录因子在蓖麻逆境胁迫中起调控作用。本研究结果为进一步探究蓖麻WOX转录因子家族在逆境胁迫中的功能提供了一定的理论参考。

蓖麻GRAS转录因子家族的全基因组分析及逆境胁迫响应

GRAS转录因子在植物生长发育及逆境胁迫等多个生理生化途径中具有重要作用。本研究从蓖麻基因组中鉴定出48个GRAS转录因子,对其理化性质、系统发育模式、基因结构与保守基序进行了分析。结果表明,蓖麻GRAS基因编码的蛋白全部为亲水蛋白,其中酸性蛋白质约占94%,等电点在4.82~10.21之间,相对分子量介于10096.8~90986.6之间。GRAS转录因子家族成员分为11个亚家族,同一亚家族成员具有相似的基因结构与保守基序。利用RT-qPCR技术检测了根、茎、叶不同组织中的5个基因在干旱与盐胁迫下的表达情况,结果表明,RcGRASs在不同组织中的表达具有特异性,干旱与盐胁迫诱导RcGRAS14、RcGRAS21、RcGRAS35的表达,抑制RcGRAS1、RcGRAS10的表达。本研究结果为进一步研究GRAS转录因子在非生物胁迫中的功能提供参考。

CRISPR/Cas9技术在非模式植物中的应用进展

基因组编辑技术的出现对植物遗传育种及作物性状的改良产生了深远意义。CRISPR/Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeat)是由成簇规律间隔短回文重复序列及其关联蛋白组成的免疫系统,其作用是原核生物(40%细菌和90%古细菌)用来抵抗外源遗传物质(噬菌体和病毒)的入侵。该技术实现了对基因组中多个靶基因同时进行编辑,与前两代基因编辑技术:锌指核酶(ZFNs)和转录激活因子样效应物核酶(TALENs)相比更加简单、廉价、高效。目前CRISPR/Cas9基因编辑技术已在拟南芥(Arabidopsis thaliana)、烟草(Nicotiana benthamiana)、水稻(Oryza sativa)、小麦(Triticum aestivum)、玉米(Zea mays)、番茄(tomato)等模式植物和多数大作物中实现了定点基因组编辑,其应用范围不断地向各类植物扩展。但与模式植物和一些大作物相比,CRISPR/Cas9基因编辑技术在非模式植物,尤其在一些小作物的应用中存在如载体构建、靶点设计、脱靶检测、同源重组等问题有待进一步完善。该文对CRISPR/Cas9技术在非模式植物与小作物研究的最新研究进展进行了总结,讨论了该技术目前在非模式植物、小作物应用的局限性,在此基础上提出了相关改进策略,并对CRISPR/Cas9系统在非模式植物中的研究前景进行了展望。

稻瘟病菌MSP1的表达、纯化及生物信息学分析

【目的】稻瘟病菌MSP1是由MGG-05344基因编码的一种与稻瘟病菌的植物毒性相关的蛋白,本研究进一步探索MSP1的晶体结构、功能以及与该蛋白相关的研究。【方法】对NCBI数据库提供的MSP1氨基酸序列进行生物信息学分析,构建原核表达载体pETSUMO_1b-MSP1,并对该重组蛋白进行诱导表达和纯化处理。【结果】MSP1分子量约为14.2 KD,等电点为4.6,为不稳定性疏水蛋白;含有信号肽,无跨膜结构域,为非典型分泌蛋白;含有11个磷酸活性位点,含有Cerato-platanin保守结构域,属于Cerato-platanin家族成员。该蛋白可被0.3 mmol/L IPTG诱导表达,镍离子亲和层析的最适洗脱条件为20 mmol/L Tris-HCl,500 mmol/L NaCl,80 mmol/L、100 mmol/L咪唑;阴离子交换层析表明该蛋白具有耐低盐性;分子筛层析具有单峰且对称性良好,最大峰在17.1 mL出峰,分子量约20 KD,表明MSP1以单体形式存在。【结论】本研究最终纯化得到大量高纯蛋白,以期为进一步探索该蛋白的晶体结构、功能、互作蛋白以及与稻瘟病菌毒性相关的后续研究奠定理论与实践基础。

锦灯笼和枸杞子水提液对乳酸菌的促生作用

目的研究锦灯笼和枸杞子对乳酸菌的促生作用,为微生态制剂的开发及中药合理使用提供理论依据。方法将不同浓度的锦灯笼和枸杞子水提液添加到乳酸菌的体外生长培养基中,37℃培养48h,活菌计数。结果 2%和5%的锦灯笼以及0.5%和1%的枸杞子对乳酸菌生长具有明显的促进作用(P<0.01),5%的锦灯笼促进乳酸菌生长的效果最好,菌数分别是对照组的1.6倍左右,但随着药物浓度的增加,两种药物促乳酸菌生长的作用显著减弱。结论一定浓度的锦灯笼和枸杞子水提液能够促进乳酸菌的生长。

蒙药光明盐-4对功能性消化不良大鼠的治疗作用及对胃肠激素的影响

目的:研究光明盐-4对碘乙酰胺(IA)诱导功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)大鼠的胃肠道运动、血清胃泌素(Gastrin,GAS)、胃动素(Motilin,MTL)及胃饥饿素(Ghrelin)水平的影响。方法:10日龄新生SD大鼠72只随机分为正常组、模型组、光明盐-4低、中、高剂量组和阳性对照组(n=12)。自10日龄起正常组每日灌胃2%蔗糖,其余组在2%蔗糖中加入0.2 mL 0.1%碘乙酰胺(IA)持续6 d。各组大鼠随后进入成年期(8周龄)后光明盐-4低、中、高剂量组给药量分别为0.3、1.5、3.0 g·(kg·d)^(-1),阳性对照组给予莫沙必利混悬液30 mg·kg^(-1),给药3周,测试行为、内脏指数、3 h进食量和胃肠运动功能及血清MTL、GAS及Ghrelin水平。结果:与正常组比较,模型组的大鼠3 h摄食总量、胃排空和小肠推进均明显减少(P<0.05),血清GAS(P<0.05)、Ghrelin水平均降低;与模型组相比,光明盐-4各组大鼠的3 h进食量、胃排空率和小肠推进率均有不同程度的增加(P<0.05);血清GAS、Ghrelin水平均显著升高(P<0.05)。结论:蒙药光明盐-4可以促进IA诱导型FD大鼠的胃肠运动功能,提高血清GAS水平,此结论可能是其治疗碘乙酰胺诱导FD大鼠的机制之一。

蓖麻赤霉素受体蛋白RcGID1B的生物信息学分析

赤霉素受体GID1(gibberellin insensitive dwarf1,GID1)是一种可溶性蛋白,是赤霉素信号转导途径中与赤霉素结合的关键蛋白。根据KEGG数据库得到的蓖麻赤霉素受体蛋白RcGID1B氨基酸序列并对其进行生物信息学分析。结果表明:RcGID1B是由345个氨基酸组成的不稳定亲水蛋白,等电点为6.42,无跨膜结构,含组氨酸和丝氨酸活性位点,有Abhydrolase-3保守结构域,属于Abhydrolase家族。进化树聚类分析显示蓖麻与同为大戟科植物的木薯、橡胶树和麻风树聚类到了一起,符合生物学分类。本实验对RcGID1B进行生物信息学分析,旨在为蓖麻赤霉素信号转导途径的研究和蓖麻矮化研究提供参考基础。

蓖麻RcDELLA基因的克隆与功能鉴定

赤霉素(gibberellin acid,GA)是调控植物生长发育的重要激素,DELLA通过参与GA信号转导途径,使植株出现矮化现象。本研究以蓖麻(Ricinus communis)2129六叶期茎尖的cDNA为模板,利用常规PCR法成功克隆了RcDELLA基因(XM002533984.2)的完整开放阅读框,全长1701 bp,推测编码567个氨基酸。亚细胞定位试验表明RcDELLA融合蛋白定位在细胞核中。以蓖麻子叶节为外植体,利用农秆菌介导法侵染子叶节受体,最终成功培育出7株RcDELLA基因过表达的蓖麻植株。PCR鉴定转基因植株结果显示为阳性,qRT-PCR结果显示阳性植株RcDELLA基因的表达量显著高于野生对照植株。对转基因植株进行GUS染色,阳性植株的叶脉均呈蓝色。通过表型分析发现,转基因植株株高均矮于野生型。

蓖麻RcGASA9基因克隆及生物信息学分析

GASA蛋白是富含半胱氨酸的植物特有的一类小分子蛋白,GASA蛋白家族在赤霉素信号传导过程中具有重要的调控作用。本研究通过克隆RcGASA9基因以及对其进行相关的生物信息学分析;利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)技术扩增该基因的完整阅读框,发现该基因片段长度为342 bp,编码113个氨基酸,分子量12 674.91 kD,等电点为9.45,不稳定指数为66.20。通过功能结构域预测发现RcGASA9蛋白属于GASA超大基因家族。同源性分析结果表明,与麻疯树亲缘关系最近,符合进化关系。这些分析结果为进一步研究RcGASA9蛋白功能提供理论依据。

追奸电话

一个深夜,睡梦中的我突然接到一个电话。电话那端,一个女人恶声恶气地问我:"他在哪儿?叫他接电话!"我迷迷糊糊地问:"谁啊?""少装蒜,叫我老公接电话!"我一听,明白了:女人是在捉奸,一定是个聪明的"小三"

有爱,就不会有绝对的AA制

当初跟高洋恋爱时,两家父母都反对,原因是俩人都是独生子女,将来照顾两边的老人会很吃力。因为有爱,我们当时嘻嘻哈哈地回答:"我们一起养呗!"婚后大约七八年吧,老人们的担心变成了现实。孩子刚上小学。