目的探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对大鼠肾小球内皮细胞(r GEn C)通透性的影响及线粒体功能障碍在其中的作用。方法采用原代培养的r GEn C,予AGEs 80 mg/L作用24 h,采用跨内皮细胞电阻抗和异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白滤过率观察通...目的探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对大鼠肾小球内皮细胞(r GEn C)通透性的影响及线粒体功能障碍在其中的作用。方法采用原代培养的r GEn C,予AGEs 80 mg/L作用24 h,采用跨内皮细胞电阻抗和异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白滤过率观察通透性的变化,Mito SOX试剂盒检测细胞内活性氧,JC-1荧光标记法检测线粒体膜电位(△Ψm),荧光素酶检测系统测定三磷酸腺苷(ATP)的生成,蛋白免疫印迹法检测NF-E2相关因子2(Nrf2)的表达。结果 AGEs可引起r GEn C通透性升高,活性氧产生增加,采用叔丁基对苯二酚(t BHQ)(20μmol/L)、N-乙酰半胱氨酸(NAC)(10 mmol/L)和抗AGE受体抗体(100 mg/L)预处理后,上述AGEs作用被抑制。AGEs可引起r GEn C△Ψm下降,ATP和Nrf2减少,而anti-RAGE抗体可抑制△Ψm下降和ATP减少,t BHQ则能抑制△Ψm下降和Nrf2减少。结论 AGEs可导致r GEn C线粒体功能障碍,引起活性氧产生增加,从而导致r GEn C间通透性增加。展开更多
文摘目的探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对大鼠肾小球内皮细胞(r GEn C)通透性的影响及线粒体功能障碍在其中的作用。方法采用原代培养的r GEn C,予AGEs 80 mg/L作用24 h,采用跨内皮细胞电阻抗和异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白滤过率观察通透性的变化,Mito SOX试剂盒检测细胞内活性氧,JC-1荧光标记法检测线粒体膜电位(△Ψm),荧光素酶检测系统测定三磷酸腺苷(ATP)的生成,蛋白免疫印迹法检测NF-E2相关因子2(Nrf2)的表达。结果 AGEs可引起r GEn C通透性升高,活性氧产生增加,采用叔丁基对苯二酚(t BHQ)(20μmol/L)、N-乙酰半胱氨酸(NAC)(10 mmol/L)和抗AGE受体抗体(100 mg/L)预处理后,上述AGEs作用被抑制。AGEs可引起r GEn C△Ψm下降,ATP和Nrf2减少,而anti-RAGE抗体可抑制△Ψm下降和ATP减少,t BHQ则能抑制△Ψm下降和Nrf2减少。结论 AGEs可导致r GEn C线粒体功能障碍,引起活性氧产生增加,从而导致r GEn C间通透性增加。