基于超高效液相色谱-串联质谱法研究宽缨酮在大鼠体内的生物利用度及代谢产物

目的建立快速、灵敏的UHPLC-MS/MS方法用于宽缨酮的生物利用度研究,并初步鉴定其在大鼠体内的代谢产物。方法将SD大鼠分为静脉注射组和灌胃组,给予相应剂量宽缨酮。以槲皮苷为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)法测定不同时间点血浆中宽缨酮的浓度,并采用DAS 3.0软件计算主要药动学参数。采用UHPLC-Triple-TOF/MS鉴定大鼠灌胃给药宽缨酮后血浆、尿液及粪便样品中的代谢产物,并使用Peakview软件分析其中的代谢产物。结果方法学验证表明,宽缨酮在血浆中的定量下限为1 ng·mL^-1,在1~150 ng·mL^-1范围内有良好线性关系;日内和日间的精密度及稳定性考察的RSD值均小于10%;提取回收率在89.81%~99.95%之间,基质效应为91.15%~105.29%,满足生物样品定量分析的要求;尾静脉注射及灌胃给药宽缨酮后主要药动学参数:药时曲线下面积(AUC0-24 h)分别为(331.95±40.35)、(93.69±17.83)μg·h·L^-1;消除半衰期(t1/2)分别为(15.76±7.24)、(13.06±11.08)h;达峰浓度(Cmax)分别为(691.99±197.46)、(31.00±10.29)μg·L^-1;生物利用度为2.8%。在大鼠体内发现了包括宽缨酮原型在内的12种代谢产物,代谢途径主要涉及水解、甲基化、磷酸化和牛磺酸结合等。结论宽缨酮经灌胃给药后在大鼠体内生物利用度低,体内半衰期较长,结合代谢产物研究推测可能其原型在体内经转化后主要通过尿液排泄。

天麻钩藤药对治疗急性偏头痛模型大鼠的代谢组学分析

目的通过代谢组学研究天麻-钩藤治疗硝酸甘油致大鼠急性偏头痛模型的作用机制。方法 40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、琥珀酸舒马普坦组(25 mg/kg)和天麻钩藤组(4.2 g/kg),每组10只,灌胃给药7d,在第7天给药前1 h,后颈部皮下注射硝酸甘油(10 mg/kg),给药后1 h眼眶取血并收集血浆。测定血浆中一氧化氮(NO),5-羟色胺(5-HT),降钙素基因肽(CGRP)的含量,确定天麻-钩藤治疗偏头痛的药效。利用UPLC-Q-TOF-MS进行代谢组学研究,通过偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)进行模式识别及生物标志物的鉴定。结果与正常组比较,NO,CGRP在模型组血浆中的浓度升高,5-HT在模型组血浆中的浓度下降,且均有显著性差异(P<0.05,P<0.01),说明急性偏头痛模型建立成功;与模型组比较,给予天麻钩藤提取物后NO,CGRP浓度下降,5-HT浓度升高,均有显著性差异(P<0.05,P<0.01),证明天麻钩藤对偏头痛模型大鼠有治疗作用。通过代谢组学分析,鉴定了10个与偏头痛模型有关的生物标志物。与正常组相比,模型组中甘氨胆酸,L-精氨酸,3-吲哚硫酸盐,酪氨酸,柠檬酸含量升高;2-羟基-3-氧代己二酸,鞘氨醇-1-磷酸,L-色氨酸,亚麻酸,亚油酸含量下降。天麻钩藤给药后可使上述10个异常变化的生物标志物回调甚至恢复正常。结论天麻-钩藤主要通过调节色氨酸代谢、精氨酸代谢、亚麻酸代谢等代谢途径发挥药效。

UHPLC-MS/MS法同时测定杏香兔耳风中13种成分的含量

目的建立一种快速同时测定杏香兔耳风药材中13种成分含量的UHPLC-MS/MS方法。方法采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱技术检测,色谱柱为UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm),柱温为40℃,流动相为5 mmol甲酸铵和0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱,体积流量0.25 mL/min,ESI负离子采集,雾化器和辅助气均为344.5 kPa,气帘气为206.7 kPa,喷雾电压为-4500 V,离子化温度为500℃,13种成分均采用多级反应监测模式(MRM)。结果在优化的液相-质谱条件下,原儿茶酸、咖啡酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草素、木犀草苷、芹菜素的检测质量浓度线性范围分别为1.099~274.800、1.006~100.600、1.080~1080.000、83.12~8312.00、19.92~996.00、1.076~269.000、5.555~555.500、4.420~4420.000、44.76~17904.00、48.00~9600.00、2.108~210.800、4.136~413.600、1.070~107.000 ng/mL,且线性关系良好(r≥0.9958),平均加样回收率(n=6)为96.54%~99.75%,RSD为0.48%~0.96%,精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3.90%。结论该方法重复性和专属性好,稳定可控,可用于杏香兔耳风药材及其制剂的质量控制。