调节性T细胞发育的一个关键转录因子Foxp3

调节性T细胞是目前免疫学领域研究的热点,对于维持机体免疫耐受和免疫应答稳态具有非常重要的作用. 对其发育和功能机制的深入认识,不但有助于了解错综复杂的免疫系统理论,而且在自身免疫性疾病、肿瘤和艾滋病的治疗以及移植耐受的诱导等方面具有广泛的应用前景. 最近的研究发现,转录因子Foxp3对于调节性T细胞的发育具有重要的作用,是调节性T细胞发育的一个关键转录因子.

单嘧磺隆对不同小麦品种的耐药性研究

以主根长为指标，研究了５个小麦品系对磺酰脲类除草剂单嘧磺隆的敏感性。 比较了单嘧磺隆对它们的乙酰乳酸合成酶（简称ＡＬＳ）在离体条件下的活性的影响。研 究表明单嘧磺隆对不同小麦品种的耐药能力与其ＡＬＳ的敏感性无关。

CaMBP-10的cDNA克隆和表达及钙调素结合活性分析

采用RT PCR法 ,从中国大白菜中分离了编码CaMBP 1 0的cDNA克隆 .该cDNA全长 4 96bp ,编码 92个氨基酸 ,3′端含有 2 1 6bp的非编码区和poly A尾 .将此BP 1 0cDNA的成熟蛋白序列导入表达质粒pET1 5b并转化至大肠杆菌E .coliBL2 1 (DE3)condonplus RIL进行表达 .以免疫印迹和钙调素结合分析法对重组BP 1 0进行鉴定 ,证明其保持了与天然BP 1 0相同的钙调素结合活性 .氨基酸和核苷酸序列分析结果显示 ,它与植物转脂蛋白高度同源 ,特别是含有 8个保守半胱氨酸 .BP 1 0与转脂蛋白之间具极为相似的理化性质如分子量、等电点、热稳定性等 .据此认为 ,CaMBP 1 0是转脂蛋白家族的新成员 ,Ca2 +

小鼠OCILrP2基因的克隆、原核表达及抗血清的制备

目的:在原核系统中表达破骨细胞抑制凝集素家族成员之一OCILrP2基因,并制备大鼠抗OCILrP2的抗血清。方法:应用RT-PCR从小鼠脾细胞中克隆的部分OCILrP2cDNA,构建重组表达载体pET-28a-OCILrP2,并转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达His-OCILrP2融合蛋白。以表达产物免疫SD大鼠,制备大鼠抗OCILrP2的抗血清。采用Westernblot测定其效价和特异性。结果:RT-PCR法扩增出235bp的OCILrP2基因,其cDNA序列与GenBank中登录的序列一致。以构建的重组质粒pET-28a-OCILrP2转化大肠杆菌获得目的蛋白的高表达。以表达的His-OCILrP2融合蛋白免疫大鼠获得抗小鼠OCILrP2的抗血清。Westernblot分析表明,该抗血清均可与原核表达的His-OCILrP2融合蛋白和真核表达的OCILrP2-Ig融合蛋白特异性结合;抗血清的效价为1∶2000。结论:在原核细胞中表达了小鼠的OCILrP2蛋白,制备了大鼠抗小鼠OCILrP2的抗血清,为进一步研究OCIL-rP2的生物学功能奠定了基础。

miR-17-92对急性白血病L1210/DDP细胞多药耐药性影响研究

目的:研究miR-17-92在白血病L1210/DDP细胞多药耐药形成中的作用。方法:首先构建L1210/DDP耐药细胞系,运用real-time PCR方法检测miR-17-92在L1210/DDP细胞与L1210细胞中的表达差异。利用脂质体Lipofectamine 2000将miR-17-92抑制物(miR-17-92 sponge)及阴性对照(sponge vector)转染L1210/DDP细胞,构建miR-17-92表达下调的L1210/DDP细胞系。用MTS法检测转染后耐药细胞对顺铂和阿霉素体外药物敏感性。结果:miRNA-17-92在L1210/DDP耐药细胞系中高表达,上调倍数为(1.61±0.01)倍。体外药物敏感性实验表明,转染miR-17-92抑制物的实验组对顺铂和阿霉素的IC50分别为(3.29±0.51)、(1.35±0.13)g/ml,而转染阴性对照组对上述药物的IC50分别为(6.73±0.82)、(2.66±0.42)g/ml,在耐药株中抑制miR-17-92在L1210/DDP细胞中的表达,显著增加细胞对顺铂和阿霉素的敏感性。结论:miR-17-92在白血病耐顺铂L1210/DDP细胞中高表达。抑制miR-17-92的表达可增加白血病L1210/DDP细胞对顺铂和阿霉素化疗药物的敏感性,部分逆转耐药。

microRNA-17-92对人套细胞淋巴瘤细胞放射敏感性的影响

目的 探讨microRNA-17-92对人套细胞淋巴瘤细胞放射敏感性的影响.方法 通过细胞转染获得Z138c-TMP2细胞株和稳定高表达miR-17-92的Z138c-TMP2-miR-17-92细胞株.采用锥虫蓝染色活细胞计数和3H-TdR掺入方法,观察两组细胞外照射后生长情况.采用流式细胞仪检测两组细胞照射后周期时相分布和细胞晚期死亡率.结果 随着照射剂量的增加,miR-17-92组较TMP2组有更多存活细胞（t=-3.12和-3.28,P＜0.05）;TMP2组细胞出现G2/M期阻滞,miR-17-92组未出现明显周期阻滞（t=2.885,P＜0.05）.2和4 Gy照射后培养96 h以上,TMP2组细胞PI单染阳性细胞百分比（24.02%和36.16%）明显高于miR-17-92组（6.49%和11.39%）,差异有统计学意义（t=-17.59、-4.972,P＜0.05）.结论 miR-17-92高表达可明显降低人套细胞淋巴瘤细胞株Z138c细胞的放射敏感性.改变细胞周期和抵抗照射诱导的凋亡是miR-17-92发挥作用途径之一.