微单倍型遗传标记及其法医遗传学应用

微单倍型是一种国际广泛关注的新型法医遗传学分子标记。它兼具STR和SNP遗传标记的优势,在法医混合DNA检验、种族地域推断、复杂亲缘关系分析等领域均具有重要应用前景。本文综述了微单倍型遗传标记的基本概念、命名规则,回顾了二代测序、高分辨熔解曲线、单链构象多态性分析等微单倍型检测手段,介绍了微单倍型法医遗传学应用的相关研究进展,并对微单倍型遗传标记未来发展做了展望,提出了其可能面临的挑战。

人胚肺二倍体细胞衰老程度评价生物学指标研究

目的通过细胞生长曲线、流式细胞术检测人胚肺二倍体细胞不同代次情况,筛选评价人胚肺二倍体细胞衰老程度的生物学指标。方法将Walvax-2细胞分为16个代次,绘制生长曲线,观察不同代次Walvax-2细胞的生长增殖情况及细胞活力;通过核酸荧光染料碘化丙啶(PI)作为细胞活力分析的荧光探针使用流式细胞仪检测不同代次Walvax-2细胞周期时相和细胞凋亡情况。结果 P_(20)和P_(30)的细胞活力明显强于P_(40)和P_(50)(均P<0.05),P_(40)的细胞活力明显强于P_(50)(P<0.05);G_0/G_1期所占百分比与细胞代龄间的增长无相关性(P>0.05),而S期、G_2/M期和细胞碎片所占百分比与细胞代龄间的增长显著相关(均P<0.05)。结论通过绘制生长曲线可区分相隔较大代次的Walvax-2细胞的生长活力,在进行细胞衰老综合评定时,可通过PI作为荧光探针使用流式细胞仪检测细胞周期变化作为Walvax-2细胞的衰老程度综合评定的指标。

表观遗传学在法医学中的应用研究进展

表观遗传学指DNA序列无变化的、可遗传的基因表达改变.主要包括:DNA甲基化、基因组印记、X染色体失活以及非编码RNA调控等方面.随着研究的不断深入,表观遗传学为解决法医学领域中的一些问题提供了新思路,如单亲鉴定中亲代必需等位基因的确定、妊娠期胎儿父权的认定、组织来源确定、同卵双生子的区分、个体年龄推断等.主要介绍表观遗传学的主要研究进展,并就法医学应用领域表观遗传学的研究进展进行综述.

MAOA μ-VNTR多态性荧光标记自动分型方法的建立及应用

目的应用毛细管电泳和荧光标记技术,建立MAOA μ-VNTR多态荧光标记自动分型的方法.方法使用Chelex-100法提取DNA后,采用荧光标记和毛细管电泳检测技术对720份云南汉族无关个体血样进行MAOA μ-VNTR基因分型.结果荧光毛细管电泳分型方法能准确、高效地对MAOA μ-VNTR多态性进行分型检测.结论 MAOA μ-VNTR多态性荧光标记自动分型方法操作简便,在针对MAOA μ-VNTR多态性的相关研究中具有良好的应用前景.

基于二代测序的混合检材精细化分型研究

目的基于二代测序平台进行混合检材精细化STR分型,并评估其法医学应用价值。方法收集性侵案件中3例混合检材及其比对样本,采用M48磁珠提取纯化试剂盒提取样本DNA,使用Foren SeqTM DNA Signature Prep试剂盒制备文库,Mi Seq FGx平台进行测序,Foren SeqTM Universal Analysis v1.2.1软件进行数据分析,将STR序列多态分型与长度多态分型进行比较。结果对3例混合检材STR分型进行拆分,在D3S1358、D13S317与D9S1122基因座发现存在同一长度多态等位基因包含两个个体的序列多态等位基因的情况。结论二代测序技术可对混合检材进行精细鉴别,为混合分型数据拆分提供更多线索和依据。

多系统联合分析在复杂亲缘关系鉴定中的应用评估

目的对公安部物证鉴定中心自主研发的4种DNA扩增试剂盒在复杂亲缘关系鉴定中的联合应用评估。方法使用公安部物证鉴定中心自主研发的DNATyper TM19C试剂盒、DNATyper TMY29试剂盒、DNATyper TMX19试剂盒和DNATyper TM25试剂盒检测收集的302份复杂亲缘关系样本,并将结果与使用市面上已推广使用的PowerPlex?21 System试剂盒的检测结果进行对比分析,以此评估此次4种研发试剂盒的实用性和可靠性。结果DNATyper TM19C试剂盒、DNATyper TMY29试剂盒、DNATyper TMX19试剂盒和DNATyper TM25试剂盒的检出率分别为95.7%(289/302)、57.4%(70/122)、61.1%(110/180)、94.4%(285/302);对于不同DNA浓度样品的检测,这4种试剂盒的检出情况有一定区别,且以DNATyper TM19C试剂盒效果最好;与只有20个常染色体基因座的PowerPlex?21 System试剂盒相比,DNATyper TM19C和DNATyper TM25这两种试剂盒包含40个常染色体基因座,累积二联体排除率(CPE)大于(1-2.44×10-14),且在样品基因座出现差异时,DNATyper TM19C试剂盒的检测结果为正确分型。此外,DNATyper TM19C试剂盒具有最好的性价比。结论 DNATyper TM19C和DNATyper TM25常染色体检验试剂盒在复杂亲缘关系的鉴定中具有良好的系统效能和经济效应,且与DNATyper TMY29及DNATyper TMX19性染色体检验试剂盒参数兼容,可联合使用,对检验结果进行验证和补充,值得推广应用。

云南汉族NR3C1基因多态性与暴力攻击行为相关性

目的为了探讨云南汉族人群糖皮质激素受体基因(NR3C1)多态性与攻击行为的相关性。方法应用改良多重高温连接酶反应(improve multiplex ligasedetection reaction,iMLDR)技术检测194例云南汉族有攻击行为的监狱服刑人员和301例健康对照样本的NR3C1基因SNPs(rs6190、rs6191、rs6198、rs41423247、rs56149945)基因型,采用SPSS19.0软件、PHASE2.1平台进行统计学分析。结果 rs6191和rs41423247单个基因座的等位基因分布在非攻击组与攻击组、抢劫亚组和故意伤害亚组中均无显著性差异;rs41423247的基因型在非攻击组与抢劫亚组中的分布有显著性差异(p=0.048);构建的4种单倍型分布在非攻击组与攻击组、抢劫亚组和故意伤害亚组中均无显著性差异。结论云南汉族人群NR3C1基因的rs41423247基因座的单基因座多态性可能与指向他人的躯体攻击行为相关,rs6191基因座的单基因座多态性可能与暴力攻击行为无关。

衰老程度评价生物学指标在人胚肺二倍体细胞的筛选研究

目的:通过在微观结构水平和分子水平检测不同代次人胚肺二倍体细胞衰老相关的指标值,筛选出能够系统性评价人胚肺二倍体细胞衰老程度的生物学指标。方法:将Walvax-2细胞分成16个代次,在倒置显微镜下观察不同代次Walvax-2细胞生长情况及形态学变化;在透射电镜下观察不同代次Walvax-2细胞生长情况和衰老情况;通过检测SA-β-gal染色阳性率,分析不同代次Walvax-2细胞β-半乳糖苷酶的表达水平。结果:细胞可传58代。倒置显微镜下:随细胞代次的增加,可见颜色逐渐加深,色素积累;透射电子显微镜观察到:P20到P43细胞正常且骨架结构明显,细胞核完整,具有较高的核质比,P44和P45开始出现衰老现象,细胞质色素积聚加深,核膜不同程度内折,P50和P55细胞衰老更加明显;β-半乳糖苷酶的阳性染色率和细胞代龄之间呈显著相关(P<0.01)。结论:细胞形态学变化,β-半乳糖苷酶阳性率变化与Walvax-2细胞代龄增长显著相关,可选择作为Walvax-2细胞衰老程度评价的生物学指标。