蛋白质组学分析小鼠动脉血栓揭示新的血栓调控通路

目的本研究采用蛋白质组学对小鼠动脉血栓相关蛋白进行分析,明确参与调控动脉血栓形成的蛋白分子。方法应用30%氯化铁诱导小鼠颈动脉血栓形成,收集带血栓的血管组(血栓组)和颈动脉假手术血管组(非血栓组)。使用非靶向无标记液相色谱⁃质谱联用蛋白质组学定量方法对样本进行蛋白质鉴定。绘制火山图、热图并进行基因本体(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)代谢通路和蛋白质相互作用网络等生物信息学分析两组间显著差异表达蛋白(DEPs)。结果共鉴定出2896个血栓相关蛋白质,通过对血栓组与非血栓组蛋白质组学比较,火山图和热图展示了249个组间显著差异表达的蛋白(P<0.05,|Log2(fold change)|>2),其中211个表达显著上调,38个表达显著下调。GO分析和KEGG代谢通路富集分析显示,DEPs主要参与血小板活化(脱颗粒)、粘附、聚集,补体与凝血级联反应,内皮细胞受体交互作用,中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)形成等生物学过程。其中,TGFb1、ITGa6、LY6G6F、MPIG6B、FGA、NR3C1、PDLIM2、PDGFRA与动脉血栓发生密切相关。结论除凝血系统和血小板激活之外,补体系统、天然免疫反应释放的NETs可能参与动脉血栓形成。血栓关键蛋白的发现为血栓发生机制及防治提供了新研究方向和潜在干预靶点。

荧光标记中性粒细胞特异性敲除膜结合型前列腺素E2合酶-1小鼠的构建及其在静脉血栓形成中的应用

膜结合型前列腺素E2合酶-1(mPGES-1)是一个新型抗炎药靶,全身敲除mPGES-1不影响动脉血栓形成,抑制血管病理性重构。目的构建荧光(tdTomato)标记的mPGES-1中性粒细胞特异性敲除小鼠并鉴定其在静脉血栓形成中的应用。方法与结果人工合成基因打靶序列,包括mPGES-1同源序列、LoxP序列、Lox2272序列和tdTomato表达序列,利用CRISPR/Cas9技术将这段合成序列同源置换C57BL/6N小鼠的mPGES-1基因序列,制备转基因小鼠(mPGES-1fl/fl),将其与中性粒细胞特异性表达Cre重组酶的小鼠(Lyz-Cre+)杂交获得Lyz-Cre(+)mPGES-1fl/fl小鼠。向小鼠腹腔注射脂多糖诱导炎症,半定量PCR结果显示Lyz-Cre(+)mPGES-1fl/fl小鼠外周血白细胞mPGES-1表达缺失,荧光显微镜观察和流式细胞分析结果表明tdTomato成功标记Lyz-Cre(+)mPGES-1fl/fl小鼠中性粒细胞。通过限制血流诱导小鼠下腔静脉血栓,荧光标记的中性粒细胞参与静脉血栓形成。敲除中性粒细胞mPGES-1不影响基础状态血液PGE2水平,但显著抑制诱导静脉血栓相关的PGE2水平上调。结论成功构建报告基因tdTomato特异性标记的mPGES-1组织特异性敲除的转基因小鼠,利用此工具鼠进一步发现中性粒细胞参与静脉血栓形成,中性粒细胞mPGES-1介导静脉血栓形成相关的PGE2合成。

中性粒细胞胞外诱捕网在血栓形成中作用的研究进展

血栓栓塞性疾病是全球性重大健康问题。多项研究表明中性粒细胞与血栓形成密切相关。活化的中性粒细胞可以响应各种刺激释放中性粒细胞胞外诱捕网,激活凝血级联、补体系统和血小板等促进血栓形成,参与动脉血栓、静脉血栓和癌症相关血栓等各种血栓性疾病。本文就中性粒细胞胞外诱捕网在血栓形成中的作用机制进行总结,以期为抗栓治疗提供新靶点和新思路。