肝细胞癌患者肿瘤组织和癌旁组织中乙型肝炎病毒准种变异差异分析

目的应用二代测序(NGS)方法,比较源于肿瘤组织(TT)和邻近非肿瘤组织(ANTT)的HBV准种基因组S区的遗传变异特征。方法39例HBV相关性肝癌患者纳入本研究。收集TT和ANTT配对样本,并提取HBV DNA,采用PCR方法对cccDNA定量后对HBV基因组S区进行大规模测序。以HBV C型标准株为参考序列,比对后计算突变频率。配对比较TT和ANTT中HBV的核苷酸和氨基酸的复杂度。采用基于序列特征的方法比对不同样本类型的HBV基因组S区NGS数据,并进行主坐标分析(PCoA)。比较TT和ANTT样本中HBV S基因MHR和α-决定簇中不同发生频率水平的突变分布。结果TT组cccDNA水平明显高于配对ANTT组。在核苷酸和氨基酸水平上,ANTT样品中HBV S基因的复杂性高于TT。TT中有助于免疫逃逸的氨基酸位点,如T131N、G145R,发生频率更高(P<0.001)。结论TT与ANTT HBV S基因存在差异。肿瘤组织中HBV准种具有较低的基因组复杂性和多样性。基于我们的研究推测,HCC发展后,TT和ANTT的不同宿主细胞环境决定了HBV的独特演变。

原发性肝细胞癌患者术前染料排泄试验ICGR15检测与肝功能指标的比较研究

目的原发性肝细胞癌患者术前ICGR，，检测与肝功能指标相关性的研究。方法横断面调查。收集2014年5月至2015年3月在第二军医大学东方肝胆外科医院就诊的原发性肝癌患者192例，其中男160例，女32例，男女比例5：1，年龄26～72岁，平均50．5岁。对192例原发性肝癌患者采用脉搏光度法色素密度（PDD）法行吲哚菁绿（ICG）清除试验测定ICG15min滞留率（ICGR15），依据ICGR15检测值进行分段：ICGR15〈10％、ICGR1510％～20％、ICGR15〉20％，分析ICGR15；分段值在Child—Pugh分级中的比例；在检测ICGR15当日清晨空腹采集静脉血测定患者的肝功能指标：TBIL、TBA、TP、ALB、PA、ALT、AST、PT－INR、HA、LN、Ⅲ、Ⅳ、APRI、PLT等，采用Spearman非参数相关分析对ICGR，；与肝功能指标进行相关性分析。结果（1）192例患者ICGR15与Child—Pugh分级呈正相关（r=0．477，P〈0．01），分段值分层分析表明：不同ICGR15各分段值在Child—Pugh分级中所占比例有显著差异（P〈0．05）。（2）Child-Pugh分级与肝储备功能指标比较：随着Child—Pugh分级的递增，ICGR15值升高、ICG血浆清除率（ICGK值）和有效肝脏血流量（EHBF）降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。（3）ICGR，；值与肝功能指标的相关性分析：ICGR15值与TBIL、TBA、ALT、AST、AFU、GGT、PT—INR、HA、LN、Ⅲ、Ⅳ、APRI指数：[（AST／ULN）×100／PLT（×10^9／L）]呈正相关性（r=0．422、0．389、0．219、0．301、0．219、0．244、0．325、0．652、0．403、0．523、0．519、0．434，P值均〈0．05）；与TP、AIJB、PA、SOD、WBC、PLT指标呈负相关（r=－0．290、－0．532、－0．546、－0．531、－0．256、－0．327，P值均〈0．05）。结论ICGR15作为肝脏储备功能动态定量指标能够比较全面地反映肝脏储备功能，与现有的临床肝功能Child—Pugh分级及肝功能生化指标相关，是反映术前肝脏储备功能的敏感指标。

壳多糖酶3样蛋白1在原发性肝癌中的检测及其临床价值

目的:通过研究壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)在原发性肝细胞癌(HCC)外周血、肝癌及配对癌旁组织中的表达水平,探讨CHI3L1在辅助原发性HCC临床管理中的价值。方法:回顾性研究。纳入2013至2017年在海军军医大学第三附属医院就诊的HCC患者405例,同时纳入肝硬化患者112例、正常体检(NC)者114例分别作为疾病和健康对照,酶联免疫法(ELISA)检测外周血CHI3L1蛋白水平。收集经病理确诊为原发性肝癌患者的肿瘤组织及配对癌旁组织90对,制成组织芯片,应用免疫组化染色分析HCC患者组织中CHI3L1的表达情况。采用Mann-Whitney U检验或Kruskal Wallis H检验比较各组差异,相关性分析采用Pearson双变量相关分析,癌组织和癌旁组织比较采用配对秩和检验。结果:外周血中肝硬化组、HCC组、NC组CHI3L1蛋白中位数(四分位数)分别为195.8(103.3,330.4)、118.2(74.9,201.0)及46.8(30.7,66.4)μg/L,肝硬化组CHI3L1蛋白水平显著高于HCC组和正常对照组(Z=5.186、12.928,P均<0.001),HCC组CHI3L1蛋白水平显著高于正常对照组(Z=10.788,P<0.001),HCC组中CHI3L1水平与是否合并肝硬化无关(Z=-0.286,P=0.775);血清CHI3L1水平与肝纤维化相关标志物[透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP)、Ⅳ型胶原蛋白(Ⅳ-C)、FIB-4指数]呈正相关(r=0.202、0.159、0.299、0.221,P均<0.05),与白蛋白(ALB)呈负相关(r=-0.326,P<0.05),与丙氨酸氨基转移酶(AST)、凝血酶原时间(PT)呈正相关(r=0.138、0.160,P均<0.05),与肿瘤直径呈正相关(r=0.284,P<0.05),与中国肝癌的分期方案分期(CNLC)分期相关[晚期组CHI3L1水平为125.2(81.9,228.5)μg/L,高于早期组的112.0(70.2,169.2)μg/L(Z=-2.326,P=0.018)],而与微血管侵犯(Z=-1.531)、肿瘤包膜(χ^2=0.818)无明显相关关系(P均>0.05)。73对HCC组织标本中,癌组织CHI3L1表达阳性率为78%(57/73),癌旁组织CHI3L1表达阳性率为83%(61/73),配对分析比较癌组织中染色强度评分1.5(1.5,2.0)和癌旁组织染色强度评分1.5(1.5,2.5)发现癌旁组织染色强度高于癌组织(Z=-2.053,P=0.040)。结论:原发性肝细胞癌CHI3L1蛋白的组织来源包括癌组织和癌旁组织,检测血清CHI3L1水平有助于肝癌患者肿瘤负荷评估和疾病分层管理。

双抗体夹心法测定血清YKL-40在肝硬化中的诊断价值研究

探讨肝硬化(liver cirrhosis,LC)患者外周血中血清YKL-40(壳多糖酶3样蛋白1)蛋白水平及其在LC中的诊断意义。采用ELISA方法共检测112例LC患者以及114例健康者血清中YKL-40蛋白水平,并进一步分析其在LC中的诊断价值及其与LC患者肝功能和现有肝纤维化指标的相关性。LC组血清YKL-40蛋白水平高于正常对照组(P<0.001);将LC组和对照组作比较,ROC曲线分析血清YKL-40蛋白对LC的诊断效能,曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.934(95%置信区间为:0.904~0.964),YKL-40在cutoff值为92.25ng/mL时,敏感度为81.3%,特异度为90.4%;通过相关性分析发现血清YKL-40蛋白水平与肝功能Child-Pugh分级和FIB-4指数正相关。YKL-40对LC具有良好的诊断效力,能辅助诊断LC并有助于判断LC的严重程度。