痰液保存条件对恒温扩增荧光法核酸检测结果的影响

目的评估痰液保存条件对恒温扩增荧光法的结核分枝杆菌核酸检测结果的影响,为痰液保存方式和有效期的确定提供参考依据。方法选取2018年11月~2019年1月杭州市萧山区第一人民医院诊断治疗肺结核的患者104例剩余痰液样本为研究对象。将痰液样本分成4组,分别给予室温(14~22℃)、冷藏(4~8℃)、冷冻(-18^-23℃)以及反复冻融的条件进行保存。在不同的时间点,用恒温扩增荧光法检测痰液样本中的结核分枝菌复合群的核酸。以0d检测结果为对照,根据检测结果以及扩增曲线的Tt值变化,分析痰液样本在不同条件下的保存效期。结果痰样本室温保存5d,冷藏保存5d,未发现核酸降解,继续延长保存时间,核酸降解的风险显著升高。冷冻条件下反复冻融4次,未发现核酸降解。结论痰液样本应尽可能当天检测,获得最准确的核酸检测结果。当天不进行检测,痰液样本应保存于冷冻条件,时间不超过1个月且避免反复冻融,或保存于冷藏条件,时间不超过5d。

不同核酸提取试剂盒对血浆游离DNA提取效果的比较

目的比较北京天根生化科技有限公司生产的大体积游离核酸提取试剂盒(磁珠法,货号:DP-710,以下简称天根)与德国Qiagen公司生产的Circulating Nucleic Acid kit(硅胶膜吸附柱法,货号:55114,以下简称Qiagen)对血浆当中游离DNA(cfDNA)的提取效果。方法收集Qiagen和天根试剂盒的基本情况,采用浙江省肿瘤医院提供的临床血浆样本,用Qiagen和天根分别提取血浆样本中的cfDNA。用超微紫外分光光度仪分析两种试剂盒提取得到cfDNA的浓度和纯度。采用人表皮生长因子受体(EGFR)突变基因检测试剂盒(多重荧光PCR法)评价两种试剂盒提取血浆中cfDNA的提取效果,通过扩增结果的Ct值分析两种不同试剂盒对人EGFR基因突变的检出率和重复性的影响。结果在cfDNA提取浓度、纯度方面,Qiagen的cfDNA提取浓度明显高于天根,且Qiagen提取得到的cfDNA纯度更优;在人EGFR突变基因阳性检出率方面,Qiagen阳性检出率为100%,天根阳性检出率为85%;在重复性方面,Qiagen试剂盒提取的cfDNA的检出结果Ct值的变异系数(CV)均小于5%,而天根试剂盒有分部分CV超过5%。结论Qiagen试剂盒在cfDNA提取浓度、纯度,人EGFR突变基因的阳性检出率、重复性方面的表现均要优于天根试剂盒。