淫羊藿苷对半胱氨酸刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究淫羊藿苷对半胱氨酸刺激的兔血管平滑肌细胞增殖的影响,为探讨淫羊藿苷降血脂、预防动脉粥样硬化的作用机制及其药效提供实验依据。方法兔血管平滑肌细胞增殖模型组给予不同剂量淫羊藿苷处理,采用MTT方法测定各组细胞OD值,用流式细胞术分析其细胞周期。并用TUNEL法镜下观察凋亡细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果半胱氨酸能显著促进VSMC的增殖(P<0.05),而淫羊藿苷对半胱氨酸刺激平滑肌细胞的增殖具有明显的抑制作用(P<0.05)。淫羊藿苷影响了增殖平滑肌细胞的细胞周期,使S期细胞数量减少。淫羊藿苷对增殖的兔血管平滑肌细胞具有促凋亡作用,随药物浓度的增加,细胞的凋亡率增加。结论淫羊藿苷对增殖的兔血管平滑肌细胞有明显的抑制生长及促凋亡作用,在心血管疾病的治疗方面具有重要的研究价值。

A型流感病毒核蛋白原核表达载体的构建与表达

目的:构建A型流感病毒核蛋白(NP)的原核表达质粒,分析其在大肠杆菌中的表达状况。方法:采用逆转录聚合酶链式反应技术从A型流感病毒基因组中扩增出编码核蛋白的基因片段,克隆至pGEM-TEasy载体,PCR筛选阳性克隆并测序。经酶切后将目的片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL2(CDE3),PCR和酶切鉴定转化菌落。将阳性菌落经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析目的蛋白的表达。结果:RT-PCR扩增出NP基因序列,将其亚克隆至表达载体pGEX-4T-1构建成重组表达质粒,并在BL2(CDE3)中表达了NP融合蛋白。结论:成功构建A型流感病毒NP的重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达了NP融合蛋白。

A型流感病毒株核蛋白基因的克隆与重组质粒的构建

目的克隆A型流感病毒株Swine/Henan/703/2001(H3N2)的核蛋白(NP)基因序列并构建重组质粒。方法采用逆转录聚合酶链式反应技术从病毒株基因组中扩增出编码核蛋白的基因序列,克隆至pGEM-TEasy载体,经蓝白筛选、菌落PCR及酶切鉴定挑取阳性克隆并测序。结果利用RT-PCR扩增到目的基因片段,并将其克隆至T载体。结论成功构建重组质粒pGEM-TEasy-NP,为NP相关功能及流感疫苗的进一步研究奠定实验基础。

幽门螺杆菌中国临床分离株iceA基因突变株的构建和鉴定

目的:构建幽门螺杆菌(Hpylori)iceA基因突变株.方法:克隆iceA基因及两侧的部分序列至载体pBluescriptSKⅡ(-)多克隆位点中.运用基因重组方法将卡那霉素抗性基因(kam)插人iceA基因片段之间,构建出带卡那霉素抗性标志的突变载体pBS-iceA-kam.再将突变载体转化至Hpylori中国临床分离株MEL-Hpylori27中,用卡那霉素筛选iceA基因的突变株,经PCR和DNA测序鉴定.结果:用PCR方法扩增突变株基因组DNA,结果显示卡那霉素抗性基因已插入iceA基因片段中,测序进一步证实已筛选获得Hpylori中国临床分离株iceA基因的突变株.结论:成功构建一株HpyloriiceA基因突变株.

A型流感病毒核衣壳蛋白研究进展

A型流感病毒核衣壳蛋白参与病毒生活周期的多个阶段,影响病毒的转录、复制、装配及转运功能。另外,核衣壳蛋白是细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别的主要抗原,CTL通过识别MHC类分子递呈的核衣壳蛋白抗原肽而清除感染的流感病毒。与核衣壳蛋白有关的CTL免疫逃避的研究证实了CTL反应对于控制病毒感染的重要性。由于核衣壳蛋白诱导产生的细胞免疫反应能针对同型不同亚型的流感病毒株产生交叉反应,将核衣壳蛋白作为疫苗成分有可能提供更加广泛、有效的保护作用。因此,对流感病毒核衣壳蛋白的深入研究,将有利于理解流感的发病机理,并为设计有效的流感疫苗奠定理论基础。

幽门螺杆菌iceA基因对SGC7901细胞生长的影响

目的观察幽门螺杆菌(Hp)野生株与iceA基因插入失活突变株对人胃上皮细胞株SGC7901细胞生长的影响,研究Hp毒力基因iceA相关的细胞毒性效应。方法分别将幽门螺杆菌野生株与iceA基因插入失活突变株与SGC7901细胞共培养48h,观察比较细胞形态学变化;用MTT法检测分析共培养12～36h细胞增殖活性;流式细胞仪分析48h细胞周期和24、48h细胞凋亡。结果 Hp野生株组和突变株组引起相似的细胞形态学改变;30h和36h时各组细胞的增殖活性表现出明显差异(P<0.05),培养30h时突变株组(0.745±0.006)的细胞增殖活性高于野生株组(0.728±0.017)(P<0.05);细胞周期结果显示,野生株组G2期阻滞,而突变株组为S期阻滞;培养24、48h野生株组[(33.04±10.69)%、(52.28±3.41)%]和突变株组[(44.23±11.34)%、(57.32±0.88)%]均可以诱导细胞产生明显凋亡(P<0.05),但二者在诱导细胞凋亡的能力方面差异无统计学意义(P>0.05)。结论幽门螺杆菌对于SGC7901细胞生长状态产生明显的影响,iceA基因的插入失活突变对于SGC细胞的形态变化和凋亡的影响无明显差异,对细胞增殖和细胞周期影响差异较明显。

人铜锌超氧化物歧化酶真核表达载体的构建及在酿酒酵母中的分泌表达

目的:探讨酿酒酵母中人铜锌超氧化物歧化酶(hCu/Zn-SOD)的分泌表达。方法:采用RT-PCR技术从人胃总RNA中分离扩增hCu/Zn-SOD的cDNA,与酿酒酵母交配因子(MF)α信号肽编码序列融合,将融合基因插入大肠杆菌-酵母细胞穿梭型质粒pYES2.0,构建真核分泌表达质粒pYES-MS,将其转化入酿酒酵母的缺陷型菌株INVSc1中,用半乳糖进行诱导表达,采用SDS-PAGE、蛋白质免疫印迹分析及电泳谱活性染色测定表达产物分泌情况及其活性。结果:该工程菌可高效表达一相对分子质量约为21000的蛋白并与兔抗人Cu/Zn-SOD多抗有特异的免疫反应,同时在培养基上清中检测到此表达蛋白的分泌,具有特异性SOD酶活性。结论:作者成功构建了pY-ES-MS/INV菌株,该菌株大量表达有天然酶活性的hCu/Zn-SOD,并有部分hCu/Zn-SOD分泌到酵母细胞外,为开发hCu/Zn-SOD的基因工程产品奠定了良好的基础。

淫羊藿甙对家兔血管平滑肌细胞凋亡相关基因表达水平的影响

目的:观察葡萄糖调节蛋白基因78(GRP78)在动脉粥样硬化组织中的表达,探讨淫羊藿甙防治动脉粥样硬化的可能机制。方法:淫羊藿甙诱导培养的兔血管平滑肌细胞凋亡,组织原位杂交观察凋亡基因GRP78在兔斑块组织中的表达水平。结果:兔斑块组织原位杂交显示该基因片段在动脉粥样硬化斑块组织中表达水平增高。结论:葡萄糖调节蛋白78基因在AS细胞质中表达增高,可能是淫羊藿甙作用靶点之一,如上调该基因促进则可促进平滑肌细胞凋亡,将对动脉粥样硬化治疗产生一定作用。

发酵法生产L—赖氨酸

介绍了世界上Ｌ—赖氨酸的研究概况。目前，Ｌ—赖氨酸的生产方法主要包括直接发酵法和酶法等。最常用的直接发酵法就是用某些筛选菌种进行发酵。从培养液中提取所需的Ｌ—赖氨酸。

豫医无毛小鼠无毛基因部分内含子突变研究

目的研究豫医无毛小鼠突变的分子机制。方法对豫医无毛小鼠和昆明小鼠的基因组DNA进行PCR扩增,对二者扩增片段克隆后测序,对结果进行比较,以确定豫医无毛小鼠无毛基因的特异性程度。结果本实验共测出豫医无毛小鼠DNA序列1 746 bp和昆明小鼠DNA序列1 733 bp,两者不同之处有32处,均位于内含子,突变形式包括插入、缺失和点突变。结论无毛性状的产生可能与内含子中的插入、缺失和点突变有关。

论《内经》的发病观与医学微生物学、免疫学的关系

《黄帝内经》是中医药学的经典之作,它以辩证唯物主义为基础,体现了先进的、科学的世界观和方法论,为中医学的发展奠定了理论依据和指导思想。中西医结合,不能仅停留于实验室水平,应当从理论上加以融合,相互促进,共同提高。我们试从发病的角度探讨《内经》与医学微生物学和免疫学之间的相互关系,旨在为中西医理论层面上相结合起抛砖引玉之用。

A型流感病毒株A/Henan/703/2001(H3N2)核蛋白部分序列的原核表达

目的构建A型流感病毒核蛋白(NP)基因部分序列的原核表达质粒,并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白。方法采用PCR方法扩增NP基因部分序列,并定向插入原核表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21,将阳性菌落经IPTG诱导目的基因融合蛋白的表达。结果扩增到NP基因部分序列,构建成重组表达质粒pGEX-SNP,并在大肠杆菌中进行了表达。结论成功构建A型流感病毒NP部分基因序列的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了目的基因融合蛋白。

幽门螺杆菌分离株iceA基因克隆及序列分析

目的克隆幽门螺杆菌中国郑州市慢性萎缩性胃炎患者分离株MEL-Hp27iceA基因,测序后对其进行序列分析。方法根据iceA基因上下游基因序列设计引物,PCR扩增iceA基因,并将其连接至pMD19-T载体,测序后采用相关数据库和生物信息学软件对基因序列进行分析。结果成功克隆幽门螺杆菌Hp27菌株iceA基因序列,扩增产物大小约为790 bp;重组质粒pMD19-T-iceA单酶切产生3 820 bp片段,双酶切产生3 000和820 bp的2个片段;Hp27iceA基因与大多数美国来源菌株同源性>85%,与日本、印度等地区来源菌株同源性<70%。序列分析结果表明,所克隆到的基因为iceA2亚型,与美国株Alaska strain 219、Alaska strain 213关系最近,同源性分别为87%和95%,与芬兰株Finland strain 9496等菌株存在聚类关系,同源性88%～93%,与CR9等其他菌株距离较远。结论成功克隆幽门螺杆菌Hp27菌株iceA基因序列;不同地区幽门螺杆菌分离株的iceA基因间存在着一定差异。

某医院重症监护病房住院病人感染病原菌分布特点研究

目的了解重症监护病房住院患者医院感染病原菌分布特点,为感染预防与控制提供依据。方法采用病原学标本检测和鉴定方法,对某医院重症监护病房2010-2012年住院患者送检的病原学标本进行了检测与分析。结果共分离出病原菌1 993株,其中革兰阴性菌占49.02%,真菌占27.75%,革兰阳性菌占23.23%。鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌均为优势菌群。铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌分离率逐年增高。结论该医院重症监护病房患者医院感染病原菌以革兰阴性菌为主,但真菌分离率较高,应加强目标监测和综合防控方法。