葡萄白粉病菌环介导等温扩增检测体系的建立与应用

为了建立高效准确的葡萄白粉病菌(Uncinula necator)环介导等温扩增(LAMP)检测体系,为葡萄白粉病的早期诊断和监测预警提供依据,根据葡萄白粉病菌细胞色素P450全长基因序列设计合成3组LAMP引物并进行筛选,对包括葡萄白粉病菌在内的11种植物病原真菌的DNA进行LAMP扩增,检测体系的特异性,建立并优化葡萄白粉病菌LAMP反应体系,评价体系的灵敏性。使用优化后的检测体系扩增田间发病叶片的总DNA,检测所建立体系的实用性。LAMP最佳反应条件是:以UNITF3-1/UNITB3-1为外引物,以UNITFIP-1/UNITBIP-1为内引物,62℃反应60 min,Bst DNA聚合酶浓度为0.320 U/μL,甜菜碱浓度为0.8 mol/L,dNTPs浓度为2.6 mmol/L,Mg浓度为4.8 mmol/L,内外引物配比为6∶1,能够检测出葡萄白粉病菌DNA,灵敏度为1 pg/μL。应用已建立的检测体系对田间采集的病叶样品进行检测,能够检测到葡萄白粉病菌,准确率达100%。综上,建立的葡萄白粉病菌LAMP检测体系特异性强、灵敏度高,可用于田间葡萄白粉病菌的检测。