肿瘤坏死因子α通过激活NF-κB信号通路加快肝细胞周期进程

在慢性炎症部位有易发肿瘤的倾向,大约有20%的恶性肿瘤发生与慢性炎症相关,肝细胞癌是世界第三大癌症死亡病因,其患者多数有慢性炎症病史,当炎症慢性迁延,肝细胞癌发生率明显增加.但慢性炎症与肿瘤发生与发展的细胞和分子机制仍然不清楚.利用人肝细胞株L-02细胞,研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对细胞周期的影响及其机制,并探讨核因子κB(NF-κB)和ERK1/2活化对细胞周期的影响,以期能更确切地阐明炎症介质TNF-α在肝细胞癌发生发展中的作用.发现TNF-α能促进肝细胞从G0/G1期向S期转换.蛋白质印迹检测表明,TNF-α能以剂量依赖方式诱导cyclinD1表达,而对cyclinE的表达无明显影响.同时TNF-α能激活NF-κB,ERK1/2,抑制NF-κB活化降低了TNF-α诱导的cyclinD1表达,导致细胞周期阻滞于G0/G1期.抑制ERK1/2活化则对细胞周期和cyclinD1表达无显著影响.结果提示,TNF-α通过活化NF-κB信号通路,诱导cyclinD1表达,加快细胞周期进程,这可能是促进肿瘤的发生发展重要机制.针对TNF-α和NF-κB的治疗可能延长慢性炎症相关性肿瘤的潜伏期和抑制肿瘤的发展.

NF-κB信号传导途径对TNF-α诱导的SMMC-7721细胞凋亡的影响

背景与目的:已证明核因子κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)在免疫细胞激活、抗病毒、多种应激反应和细胞凋亡的调控等许多方面起着重要作用。本实验研究NF-κB信号传导途径对TNF-α诱导的肝癌细胞株SMMC-7721细胞凋亡的影响。方法:采用ELISA和免疫组化检测TNF-α对NF-κB信号传导通路的激活作用,继而用TPCK(n-tosyl-Phe-chloromethylketone)阻断NF-κB的活化,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:①TNF-α能激活NF-κB信号传导通路;②TPCK能抑制TNF-α诱导的NF-κB活化;③TPCK抑制NF-κB活化后,能加强TNF-α诱导的细胞凋亡。结论:SMMC-7721细胞中NF-κB信号传导途径参与了细胞的抗凋亡过程,在SMMC-7721细胞对TNF-α的细胞毒性作用耐受中起重要作用。抑制NF-κB信号传导途径可能在肿瘤治疗中有潜在的应用价值。

多抗甲素对小鼠巨噬细胞功能的影响

对多抗甲素体外影响小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红染料作用、对Ｌ９２９细胞的细胞毒活性，分泌ＴＮＦ、ＩＬ－１功能等方面进行了探讨。结果表明，ＰＡ能显著增强淀粉刺激的ＭΦ的吞噬功能、细胞毒作用、ＩＬ－１及ＴＮＦ的分泌功能（Ｐ＜０．０５），且呈良好剂量依赖关系。ＰＡ对正常小鼠ＭΦ吞噬功能几乎无明显促进作用（Ｐ＞０．０５），但能明显增强其细胞毒活性（Ｐ＜０．０５）、ＰＡ能协同ＬＰＳ促进ＩＬ－１的分泌（Ｐ＜０．０５），但不能联合ＬＰＳ、ＩＦＮ－ｒ促进ＴＮＦ的分泌（Ｐ＞０．０５）。

中医痰瘀同源理论的实验研究

目的 :旨在探讨传统医学理论中痰瘀同源的病理基础。方法 :将 30只大鼠随机均分为假手术组、术后阴性对照组和术后治疗组 ,在麻醉和严格消毒条件下 ,分离并结扎大鼠右侧颈总动脉 (CA)。假手术组分离CA后但不结扎 ,对照组不给药 ,治疗组于术后当天开始给羌菖合剂 1 0g/ (kg·d) ,连续用药 3d后取各组大鼠血测定PLt、PDW、MPV和P LCR。结果 :对照组PLt与假手术组比较无明显差异 ,P >0 0 5 ;而MPV、PDW、P LCR比假手术组显著增大 ,P <0 0 1。羌菖合剂治疗组与对照组比较 ,PLt差异不显著 ,P >0 0 5;而MPV、PDW、P LCR显著减小 ,P <0 0 1 ,而与假手术组相近。结论 :PLt、MPV、PDW、P

血清神经节苷脂快速测定法及其初步应用

目的 建立GLS快速测定法并研究其临床价值。方法 从血清提取糖脂 ,间苯二酚 -HCl与GLS特异糖基反应 ,测定吸光度。结果 健康人血清GLS含量 5 81± 90mg/L(40 0～ 76 0mg/L)。头颈恶性肿瘤患者GLS(90 8± 2 2 6mg/L)显著增高 ;良性肿瘤和非肿瘤患者GLS(6 0 2± 12 8与 6 95± 16 1mg/L)则不增高。该法对头颈恶性肿瘤敏感度、特异度、准确度、诊断效率为 73.8%、88.6 %、81.4 %、6 5 .4 %。结论 GLS快速测定法简便、稳定、可靠 ;测定GLS对头颈恶性肿瘤诊断具有显著临床价值。

多抗甲素促小鼠巨噬细胞分泌细胞因子及IL－2受体的表达

对多抗甲素促小鼠巨噬细胞（Ｍφ）分泌细胞因子及ＩＬ－２受体（ＩＬ－２Ｒ）表达初步探讨的结果表明，经淀粉刺激后的Ｍφ加入ＰＡ后，分泌ＩＬ－１、ＴＮＦ的功能显著增强，呈良好的剂量依赖特征。ＩＬ－２吸收试验提示，ＰＡ能促进Ｍφ表达ＩＬ－２Ｒ。在ＰＡ浓度为０～５μｇ／ｍｌ范围内，上清液ＩＬ－２活性明显降低。同时ＰＡ对Ｍφ与ＩＬ－２的反应性有明显增强作用。

LPS直接诱导对肺微血管内皮细胞核因子κB活化的影响

目的 探讨内毒素 (lipopolysaccharide ,LPS)的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞 (pulmonarymicrovascularen dothelialcells ,PMVECs)核因子κB(NF κB)活化的影响。方法 10 0ng/mlLPS刺激PMVECs 0、0 5、1、2、4、6、8h或 1、10、10 0ng/mlLPS刺激 1h后 ,凝胶电泳迁移率分析 (electrophoreticmobilityshiftassay ,EMSA)检测NF κB的活化 ,免疫细胞化学(ICC)观察其亚基p5 0、p65的核转位。并通过加入NF κB活化阻断剂TPCK观察其对 10 0ng/mlLPS刺激 1h诱导活化的影响。结果 LPS的直接刺激能迅速活化NF κB ,诱导其p5 0、p65亚基核转位 ,1h即达到高峰 ,且呈剂量依赖关系 ,后逐渐下降。TPCK能显著抑制其活化 (P <0 0 1)。结论 LPS的直接刺激能诱导NF κB的活化 ,这可能是LPS诱导炎症反应的一个重要环节。

内毒素作用下肺动脉内皮细胞ET－1基因表达与释放

应用斑点杂交、放免电测定等方法检测分析了内毒素不同浓度同时相和内毒素同浓度不同时相作用下体外培养的牛肺动脉内皮细胞ＥＴ－１基因表达与释放。结果表明，内毒素具有促进内皮细胞ＥＴ－１基因表达和释放的作用，且该作用有明显的剂量依赖关系和时间效应关系；两组ＥＴ－１基因表达的强弱与释放量的增减均呈显著的正相关。提示内毒素血症时血浆ＥＴ水平升高与ＥＴ合成增加和基础释放量增高有密切关系。

肝癌患者血清GLS含量

目的 :研究肝癌患者血清GLS含量及其临床意义。方法 :测定肝癌、非癌肝病患者和健康人GLS ,然后分组统计。结果 :肝癌组GLS(799± 2 2 6mg/L)显著高于健康组 (4 6 6± 6 5mg/L)和各良性肝病组 ;各良性肝病组与健康组无明显差异。测定GLS对肝癌诊断敏感度、特异度、准确度和诊断效率分别为 82 4 %、94 7%、89 7%和 78 0 % ,具有显著临床应用价值 ,并且高于血清AFP测定。测定GLS与AFP联合应用诊断价值更为显著。结论 :肝癌患者血清GLS显著增加 ;其测定对肝癌诊断、病情及疗效监测、预后分析具有显著临床价值 ;

肝癌患者血清磷酸酪氨酸蛋白含量

目的研究测定血清PTPr对肝癌诊断的意义。方法用ELISA法测定健康成人和患者血清PTPr,然后分组统计分析。结果 77例健康成人血清PTPr全部低于30μg·L^(-1),其中74例未能测出(即<8);72例非癌症患者中44例未测出,仅5例超过30;肝癌组66例中56例超过30(283.4±535.7),显著高于前两组。测定PTPr对肝癌诊断敏感度达78.8％,特异度达93％,准确度达86.2％,诊断效率达73.3％。文中将PTPr与AFP测定的结果进行了对比,并研究了两项联合检测的意义。结论测定血清PTPr对肝癌诊断具有显著临床价值;其意义可与AFP相当,且与AFP联合应用更有意义。

LPS诱导肺微血管内皮细胞ICAM-1的表达及核调控机理的实验研究

目的 :研究细菌脂多糖 (LPS)诱导的肺微血管内皮细胞 (PMVEC)ICAM - 1的表达及调控机制。方法 :10 0ng·ml-1LPS刺激PMVEC 0h、2h、4h、6h、8h或 10ng·ml-1、5 0ng·ml-1、10 0ng·ml-1LPS刺激 6h ,免疫细胞化学检测PMVECICAM - 1的表达。凝胶电泳迁移率变化分析检测NF -κB的活化。并通过加入活化阻断剂PDTC观察对PMVECICAM - 1表达的影响。结果 :PMVECICAM - 1的表达与LPS的刺激呈时相 -剂量依赖方式。LPS的刺激迅速活化NF -κB ,6 0min达到高峰 ,后逐渐下降。PDTC能显著降低ICAM - 1的表达 (P <0 .0 1)。结论 :LPS刺激诱导NF -κB的活化 ,启动ICAM - 1的合成表达。

IL-6对TNF-α的细胞杀伤作用影响的实验研究

目的 :研究IL - 6在肿瘤细胞对TNF -α耐受中的作用。方法 :检测SMMC - 772 1细胞在TNF -α作用下IL - 6的分泌。同时应用MTT实验检测细胞存活率 ,观察IL - 6和阻断IL - 6活性对细胞存活率的影响。结果 :SMMC - 772 1细胞能分泌IL - 6 ,TNF -α能促进细胞分泌IL - 6。外源加入的IL - 6对SMMC - 772 1细胞生长起促进作用。但加入抗IL - 6抗体或抗IL - 6R抗体时 ,与对照组相比 ,SMMC - 772 1细胞对TNE -α的敏感性也显著增加 ,10ng/mLTNF -α对SMMC - 772 1细胞就有显著的杀伤作用 ,P <0 0 1。随着浓度的增加 ,细胞存活率显著降低。结论 :抗IL - 6抗体和抗IL- 6R抗体可以抑制SMMC - 772 1细胞生长 ,能明显增加SMMC - 772 1细胞对TNF -α的敏感性。IL - 6对SMMC -772 1细胞的生长起促进作用。

糖尿病患者血液流变学检测的意义

目的:研究探讨糖尿病患者血液流变性的改变。方法:用R—20锥板式粘度计检测58例糖尿病患者血液流变学指标,与50例正常人对照。结果:糖尿病患者全血粘度增高,以中切L和低切为明显,血浆粘度增高,血沉加快,(P<0.05以上),显示出高粘滞综合征的特点。结论:糖尿病患者血液流变学有明显高粘倾向,表明患者红细胞聚集性增高,容易导致微循环障碍,是糖尿病并发微血管损伤的流变学基础,为临床治疗提供了实验报告依据。

硬肝复康防治肝硬化的初步实验研究

目的 :研究复方中药硬肝复康对小鼠实验性肝纤维化的防治作用。方法 :单次或多次给予实验小鼠CCl4 油剂 ,分别造成急性肝损伤和肝纤维化 ;给小鼠静脉注射BCG和LPS造成免疫性肝损伤。检测各组实验小鼠血清ALT、AST、ALP ,并取肝纤维化小鼠肝脏做病理学检查。结果 :CCl4 急性肝损伤实验中 ,硬肝复康 (2g/(kg·d) )组小鼠ALT、ALP( (6153±3491)IU/L、(202±24)IU/L)低于对照组 ( (9275±2744)IU/L、(421±67)IU/L) (P<0 05) ;免疫性肝损伤实验中 ,硬肝复康组ALT、AST( (36 3±13 0)IU/L、(164 4±17 2)IU/L)显著低于对照组 ( (83 2±52 6)IU/L、(235 5±73 4)IU/L) (P<0 01) ;实验性肝纤维化实验中 ,硬肝复康组ALT、ALP( (1100±342)IU/L、(166±54)IU/L)显著低于对照组 ( (1638±336)IU/L、(328±128)IU/L) (P<0 01)。病理检查显示 ,硬肝复康组肝脏纤维化程度明显较轻。结论 :硬肝复康对慢性肝损伤和肝纤维化具有较好防治作用。

多抗甲素对小鼠巨噬细胞IL－2受体表达及对IL－2反应性的影响

多抗甲素对小鼠巨噬细胞ＩＬ－２受体表达及对ＩＬ－２反应性的影响马布仁，刘晓波，曾祥元，丁雁（成都军区总医院临床实验研究所中医科，成都６１００８３）多抗甲素（ＰｏｌｙａｃｔｉｎＡ，ＰＡ）为国内首创的一种新型免疫调节剂，大量的临床观察及一些动物实验证实Ｐ...

活动性结核标志物检测对肺结核鉴别的意义

检测临床患者血清ATM结果如下：肺结核组ATM阳性率79．4％（81／102），显著高于肺癌和肺炎组（P＜0．001）；肺癌组ATM阳性率23．7％（36／152），且36例阳性者中还发现8例合并结核者；肺炎组ATM阳性率16．9％（15／89％），且15例阳性者中还发现3例合并结核。结果表明检测血清ATM对肺结核与肺癌或肺炎鉴别具有一定临床应用价值。

菖羌合剂对实验性脑缺血大鼠的血流变影响

目的：探讨菖蒲羌活合剂对大鼠实验性脑缺血的作用。方法：用颈总 动脉结扎法建立大鼠脑缺血模型，检测中药对大鼠脑缺血的血液流变学指标的影 响。结果：用药组的红细胞压积和全血低切粘度明显低于盐水对照组（P＜0.01）， 凝血酶原和纤维蛋白原指标各组间无明显差别，用药组脑含水量较盐水对照组相 比显著降低（P＜0.05）。结论：菖蒲羌活合剂能够降低脑缺血大鼠的红细胞压积及 全血低切粘度，改善缺血脑组织的血液循环，对脑缺血具有一定的预防和治疗作 用。

LPS诱导肺微血管内皮细胞ICAM-1的表达及NF-κB作用的实验研究

目的研究LPS诱导的肺微血管内皮细胞 (PWVEC)ICAM -1的表达及调控机制。方法100ng/mlLPS刺激PMVEC0h、2h、4h、6h、8h或10ng/ml、50ng/ml、100ng/mlLPS刺激6h ,免疫细胞化学检测PMVECICAM -1的表达。凝胶电泳迁移率变化分析检测NF -κB的活化。并通过加入活化阻断剂PDTC观察对PMVECICAM -1表达的影响。结果PMVECICAM -1的表达与LPS的刺激呈时相 -剂量依赖方式。LPS的刺激迅速活化NF -κB ,60min达到高峰 ,后逐渐下降。PDTC能显著降低ICAM -1的表达 (P<0 .01)。结论LPS刺激诱导NF-κB的活化 ,启动ICAM -1的合成表达。

脂多糖直接诱导对肺微血管内皮细胞IL-8表达的影响及通过NF-κΒ调控机理的研究

目的 探讨脂多糖 (LPS)的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞 (PMVEC)IL 8表达的影响及通过核因子κB(NF κB)的调控机理。方法 以 10 0ng/mlLPS刺激PMVEC 0 ,0 .5 ,1,2 ,4,6,8h或 1ng/ml、10ng/ml、10 0ng/mlLPS刺激 1h或6h为检测时相点 ,ELISA、原位杂交试验分别检测的培养液上清中分泌的IL 8及PMVEC内IL 8mRNA的表达 ;凝胶电泳迁移率分析 (EMSA)检验NF κΒ的活化 ;并观察NF κΒ活化抑制对IL 8表达的影响。结果 LPS能显著促进PMVEC表达IL 8,包括促进IL 8mRNA的表达及IL 8的分泌。在时间上mRNA的表达先于IL 8分泌。且LPS的直接诱导能迅速活化NF κΒ ,1h达到高峰 ,后逐渐下降。PDTC能显著抑制NF κΒ的活化及IL 8的表达 (P <0 .0 1)。结论 表明细菌致病因子LPS的直接诱导确能通过促进NF κΒ的活化 ,从而启动IL 8的高效表达和分泌 ,为多形核中性粒细胞 (PMN)的迁移提供必需的物质条件 ,导致肺损伤。

微血栓形成与内皮细胞损伤间关系的临床及实验研究

目的探讨内皮细胞损伤在微血栓形成中的作用及两者之间的关系。方法动物实验部分用wistar大鼠制作微血栓动物模型 ,临床部分观察冠心病和高血压病患者。测定循环内皮细胞 (CEC)、内皮素 (ET)等相关因子 ,观察微血管内膜的组织学变化。结果微血栓形成动物及病人CEC、血浆TXB2、ET明显增高 ,而患者的内皮细胞舒张因子 (EDRF)低于正常对照。结论微血栓形成与内皮细胞损伤关系密切 ,内皮细胞损伤可导致微血栓形成 ,微血栓形成又能造成内皮细胞损伤。