老年痴呆症的发病机制研究

老年痴呆症又称为阿尔茨海默病(AD),是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。近年来,老年痴呆症患者数量逐年上升,临床上表现为记忆障碍、失语、失用、失认、执行功能障碍以及人格和行为改变等,已成为人们正常生活中不可忽略的问题。自从1907年第1例老年痴呆症被发现后,众多学者致力于用心理和智力测评、医学影像技术及其他先进技术寻找该疾病的诊断和治疗的有效方法,但该疾病仍无法在早期被诊断,且病因不明。引起老年痴呆症的因素众多,年龄为主要因素。研究表明,该疾病多发生于老年人,65岁以上老人中患病者占约5%,而85岁以上老人中患病者高达约20%。遗传因素也是该疾病的重要因素,该疾病具有家庭聚集性,除此之外,脑缺血缺氧、脑损伤、内分泌失调、压力大小等也是可能导致老年痴呆症的因素。关于老年痴呆症的发病机制有存在多种假说,包括胆碱能假说、Aβ蛋白的生成和代谢紊乱假说、炎症假说、Tau蛋白异常磷酸化假说等,但目前并没有一个假说可以准确全面的解释老年痴呆症的各种病理特点,较多认为是多机制共同作用结果。胆碱能假说是是较早被提出的假说,也是比较被公认的假说,认为乙酰胆碱作为神经递质与认知过程密切相关,正常基底前脑的胆碱能神经元可以合成大量乙酰胆碱,运送至大脑皮层和海马区域,实现细胞间信息快速传递,老年痴呆症发生时,乙酰胆碱合成减少,乙酰胆碱转移酶活性减低,引起学习、记忆和识别功能障碍。Aβ蛋白的生成和代谢紊乱假说是目前研究最广泛的假说,淀粉样蛋白前体蛋白(APP)是一种具有结构域的蛋白,正常情况下,APP被α-分泌酶在16和17个残基之间裂解,不产生Aβ片段,不具神经毒性,但较小的片段被β-分泌酶和γ-分泌酶裂解,形成可溶性Aβ片段,易积于脑内,当大量Aβ产生而不被机体清除时,则会导致老年痴呆症。炎症假说也逐渐被熟悉,炎症是机体对刺激物的一种防御反应,可以清除有害刺激物,吞噬细胞碎片和凋亡细胞,但炎症反应失控会产生神经毒性,研究表明,老年痴呆症患者脑内存在炎症反应,星形胶质细胞和小胶质细胞释放一氧化氮、肿瘤坏死因子等炎症因子,损伤神经元细胞,加剧神经元的退行性病变。Tau蛋白异常磷酸化假说也是被广泛认可的假说,老年痴呆症患者的主要病理标志之一是神经元内出现大量神经纤维缠结,其主要成分是异常磷酸化的Tau蛋白,Tau蛋白高度磷酸化使神经元微管结构受到损害,造成神经元发生慢性病变,最终导致老年痴呆症。老年痴呆症潜伏期较长,易错失治疗时机,该疾病在较早阶段治疗能改善患者生活质量,因此研究老年痴呆症发病机制对该疾病早期诊断、预防、治疗都有重要意义。

诱发肺纤维化动物模型方法及评价

肺纤维化是慢性肺部疾病引起的一种严重的病理改变。其病因复杂,预后极差,至今临床上缺乏有效的治疗手段,特别是在2003年初发生的严重急性呼吸道症候群(severe acute respiratory syndrome,SARS)中,很多病人出现的肺损害都以肺纤维化为病理特征。因此,建立一种简便、快速、有效的动物模型,对其发病机制和药效研究都非常有意义。

姜黄素长循环脂质体的制备及表征

为了改善姜黄素长循环脂质体(Cur-LCL)的稳定性,延长药物在体内的循环时间,对现有姜黄素脂质体(Cur-Lips)和姜黄素长循环脂质体的制备方法进行了优化。使用乙醇注入法制备Cur-Lips,用后插法将DSPE-PEG2000插入Cur-Lips中制成Cur-LCL。结果表明:Cur-LCL外观为圆形囊泡状球体,平均包封率为(88.91±0.94)%,4℃存放15d包封率没有明显变化,平均渗漏率为2.4%,具有较好的稳定性;Cur-LCL平均粒径为(118.4±3.2)nm(n=3),呈单峰分布,平均电位为(-12.9±0.32)mV(n=3);以溶解度为标准对溶出介质进行筛选,选择以1%Tween 80的生理盐水为体外释放试验的溶出介质,Cur原料药12h基本释放完全,Cur-Lips在36h基本释放完全,累计释放率为92.67%,Cur-LCL在72h基本释放完全,累计释放率为91.36%。Cur-LCL具有明显的缓释性,可以延长药物在血液中的循环时间,达到长循环的效果。

氨基酸分析仪法批量测定小鼠皮质和海马中氨基酸类神经递质和牛磺酸的含量

目的:建立一种简单、准确可靠、可批量检测小鼠皮质和海马内氨基酸类神经递质含量和牛磺酸含量的分析方法。方法:采用A300氨基酸分析仪,使用10%磺基水杨酸进行蛋白沉淀,锂盐试剂为流动相,茚三酮显色,检测波长为570 nm,对该方法的分离效果、线性范围、检出限及定量限、日内精密度和回收率、日间精密度进行测定;选择同日龄的SPF级KM小鼠分为雌雄两组,每组断头处死3只,每只均于冰上分离出皮质和海马,经匀浆、离心、蛋白沉淀、稀释、过膜等过程制成小鼠脑组织游离氨基酸样品,分别测定雌雄小鼠皮质和海马内天冬氨酸(aspartic acid,Asp)、谷氨酸(glutamic acid,Glu)、甘氨酸(glycine,Gly)、γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)4种氨基酸类神经递质的含量和牛磺酸(taurine,Tau)的含量。结果:标准样品、雌雄小鼠皮质样品和海马样品中的5种目标氨基酸分离度好,在8~400μmol·L^-1的浓度范围内,线性良好(R^2≥0.999),检测限为1.29~1.86μmol·L^-1,定量限为4.29~6.20μmol·L^-1,日内精密度良好(标准样品相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)<2.23%,脑组织样品RSD<2.76%),脑组织样品的加标回收率为91.52%~102.51%,采用绘制标样峰面积曲线的方法准确获取样品中的5种氨基酸含量,实验用雌雄小鼠之间未发现明显统计学差异(P>0.05)。结论:该方法简便、准确可靠,适用于小鼠皮质和海马组织中游离氨基酸含量的批量检测。