甘草酸介导miRNAs对大鼠酒精性肝损伤的保护作用

目的探讨miRNAs在甘草酸治疗大鼠酒精性肝损伤过程中的作用及其机制。方法将45只雄性SD大鼠随机分成甘草酸组(灌胃56%白酒和甘草酸)、模型组(灌胃56%白酒)和对照组(灌胃蒸馏水),给药8周后采集血液和肝组织。检测血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平;提取肝组织RNA,大鼠miRNA芯片检测,对miRNA表达量进行分析,对差异miRNA进行靶基因预测,并采用Gene Ontology(GO)和KEGG Pathway富集分析了解差异miRNA的功能,使用Cytoscape构建差异miRNA-mRNA-Pathway调控网络进一步筛选调控关键miRNA与通路,qRT-PCR对挑选的miRNA进行表达量验证分析。结果与模型组相比,甘草酸组能改善肝组织病变,降低肝血清AST和ALT水平(P<0.05)。通过比较分析甘草酸组和模型组芯片数据,共筛选出差异表达miRNA 13个(P<0.05,fold change≥1.5),其中上调10个,下调3个。差异miRNA靶基因GO分类注释显示,差异miRNA主要与细胞黏附、抗氧化活性、代谢过程、生物过程调控、细胞杀伤、免疫系统等功能相关。差异miRNA靶基因KEGG Pathway通路分析显示,MAPK信号通路、mTOR信号通路、Ras信号通路、Hippo信号通路、PI3K-Akt信号通路、wnt信号通路、细胞凋亡等信号通路可能在甘草酸改善酒精性肝损伤病变过程中发挥着重要的调控作用。结论该研究建立了甘草酸治疗大鼠酒精性肝损伤的miRNA表达谱,提示miR-615、miR-107-3p和miR-292-5p可能在甘草酸治疗酒精性肝损伤过程中起着重要的作用。

血小板衍生生长因子BB促进SD大鼠骨髓间充质干细胞的增殖

背景:研究报道小鼠前破骨细胞分泌的血小板衍生生长因子BB可以促进成骨细胞和成血管细胞形成,而应用血小板衍生生长因子BB干预骨髓间充质干细胞的最佳浓度及最佳时间尚不明确。目的:探讨血小板衍生生长因子BB对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖作用的最佳干预质量浓度及最佳干预时间。方法:体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,第3代细胞经流式鉴定其表面标记物CD45、CD29和CD34,选用纯度较高的骨髓间充质干细胞进行干预实验。将筛选好的细胞接种于96孔培养板中,对照组骨髓间充质干细胞用α-MEM完全培养基培养,其余各组在此基础上加入6.25,12.5,25,50,100μg/L血小板衍生生长因子BB。干预1,3,5,7 d采用CCK-8法检测细胞增殖情况,筛选出血小板衍生生长因子BB干预骨髓间充质干细胞的最佳时间及质量浓度。结果与结论:①经流式鉴定:CD29呈阳性表达(94.6%),CD45呈阴性表达(3.3%),CD34呈阴性表达(0.2%),得到纯度较高的大鼠骨髓间充质干细胞;②采用重复测量方差分析,不同时间点间血小板衍生生长因子BB干预骨髓间充质干细胞的吸光度值改变不同,第3天增殖效果最强,差异有显著性意义(F=27.773,P<0.001),进一步采用LSD法对分组因素进行两两比较,25μg/L血小板衍生生长因子BB组与其他5组比较差异均有显著性意义(P<0.05);③结果表明,25μg/L血小板衍生生长因子BB干预第3天对骨髓间充质干细胞有明显促增殖作用,血小板衍生生长因子BB质量浓度大于50μg/L会促进细胞凋亡。

中药缓溃乐对溃疡性结肠炎小鼠HPA轴和5-HT信号通路相关分子的影响

目的:探讨中药缓溃乐(HKL)对溃疡性结肠炎小鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴以及5-羟色胺(5-HT)信号通路相关关键分子的影响。方法:C57BL/6小鼠(38只)随机分成HKL干预组(HKL组)、5-氨基水杨酸干预组(5-ASA组)、溃疡性结肠炎模型组(UC组)和正常组。前三组小鼠用2%葡聚糖硫酸钠(Dextran sodium sulfate,DSS)干预7天,构建小鼠UC模型,同时分别用HKL、5-ASA和蒸馏水灌胃干预14天。每天观察动物一般状态、粪便性状。在干预结束后采集血清和结肠组织,采用HE染色法评价各组小鼠结肠组织完整性、损伤或愈合程度。酶联免疫吸附法测定血清中促肾上腺皮质激素(ACTH)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、皮质醇(CORT)、5-羟色胺(5-HT)、犬尿氨酸(KYN)和色氨酸(TRP)的含量;RT-qPCR法检测结肠组织中5-羟色胺转运蛋白(SERT)和色氨酸羟化酶I(TPH1)的m RNA水平。结果:HKL和5-ASA组小鼠结肠组织损伤部分恢复。UC小鼠血清ACTH、KYN、TRP和5-HT含量显著高于正常组(P<0.05或P<0.01),而CRH含量显著低于正常组(P<0.001);与UC组比较,HKL组小鼠血清中CORT、ACTH、KYN和TRP的含量显著降低(P<0.05或P<0.01),CRH含量显著升高(P<0.01);与正常组相比,UC组小鼠结肠组织中TPH1的m RNA表达水平显著升高(P<0.01);与UC组相比,HKL组TPH1的m RNA表达水平显著降低(P<0.05),而SERT的m RNA表达水平显著升高(P<0.01)。结论:UC小鼠体内HPA轴过度活化,5-HT信号通路发生异常,肠道炎症明显,中药HKL抑制HPA轴的过度激活,并对5-HT信号通路相关分子的表达产生影响。