多重PCR检测奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母菌方法的建立与应用

参照GenBank发表的序列,在金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和停乳链球菌16S rRNA与23S rRNA之间的区域设计了3对引物,参照念珠菌和隐球菌的18S rRNA的序列设计1对引物,建立了检测金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母真菌4种乳腺炎主要致病菌的多重PCR方法。参照Skladny的方法制备模拟了细菌感染临床标本。结果表明:本试验建立的多重PCR方法具有较好的特异性,多重PCR方法检测乳样中的金黄色葡萄球菌的细菌最小浓度为104CFU/mL,检测无乳链球菌、停乳链球菌和酵母真菌的细菌最小浓度分别为102CFU/mL、103CFU/mL和103CFU/mL。通过对采自临床型乳腺炎(46个)和隐性乳腺炎(167个)动物共计213个乳样分别用传统细菌学培养法和多重PCR方法进行检测,多重PCR对金黄色葡萄球菌和酵母真菌的检测具有更高的检出率(P<0.01),但该方法对无乳链球菌和停乳链球菌的检出率与培养法差异不显著(P>0.05)。

奶牛纯中药乳头消毒剂的临床应用效果观察

将93头奶牛分成3组,1组31头用碘伏进行乳头药浴,2 组 32 头用鱼腥草、红花和明矾组成的中药乳头消毒剂进行药浴,30 头作为对照组,35 d的临床应用,结果如下:中药乳头消毒剂和碘伏能使临床型乳腺炎发病率降低,差异不显著(P>0 05);1组隐性乳腺炎的发病率,由药浴前的 58 1%下降到 48 4%,与对照组差异显著(P<0 05),2组隐性乳腺炎的发病率由药浴前的81 3%下降到药浴后的75%,与对照组差异显著(P>0 05);1 组和2组隐性乳腺炎的乳区发病率差异不显著(P>0 05),与对照组差异极显著(P<0 01);中药乳头消毒剂药浴后体细胞数和LDH活性明显降低,与药浴前差异显著(P<0 05);NAGase的活性药浴前后差异不显著(P>0 05),该中药乳头消毒剂对奶产量无显著影响。

奶牛隐性乳腺炎病原菌的分离鉴定和体细胞数及酶的相关性研究

对330个乳样分别用加州乳腺炎检验(California Mastitis Test,CMT),体细胞计数(Somatic Cell Count,SCC)和细菌的分离培养(Isolation of bacteria)法进行隐性乳腺炎的检测,结果表明3种方法检测的结果差异不显著(P>0.05);对检测患有隐性乳腺炎的241乳区进行了细菌的分离培养,结果表明引起隐性乳腺炎的最主要致病菌为金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、链球菌、酵母菌、假单胞菌和棒状杆菌、其它细菌的检出率差异根显著(P<0.05)。对分离出优势细菌的部分乳样进行了SCC与LDH,NAGase,ALP和ACP几种酶的测定和相关性分析,结果表明:LDH与SCC有显著的相关性(r=0.7936),并且LDH与NA-Gase,ALP,ACP都有明显的相关性;NAGase与ACP,LDH有明显的相关性,但与ALP没有相关性;ALP只与ACP和LDH有显著的相关性外,与SCC,NAGase没有相关性;ACP与SCC,LDH,NAGase,ALP都有极显著的相关性。

用PCR与ELISA、RPLA对照检测乳腺炎金黄色葡萄球菌肠毒素和毒素休克综合征毒素-1

用PCR方法对14个奶牛场分离得到的临床型乳腺炎金黄色葡萄球菌(金葡菌)124株,隐性乳腺炎金葡菌213株,山羊临床型乳腺炎金葡菌12株进行超抗原毒素sea,seb,sec,sed.see和tst基因的分子调查,结果表明:奶牛标本肠毒素基因和tst基因的阳性率为27.42%,隐性乳腺炎为1.41%,山羊标本为33.3%。奶牛标本产生毒素的类型以SEA,TSST-1和SEC为主,山羊标本产生肠毒素的类型以SEC为主。对于肠毒素基因和tst基因PCR阳性的金葡菌同时用ELISA和RPLA检测,3种方法检测结果基本一致。

17种中药对奶牛乳腺炎4种病原菌的抑菌试验

奶牛乳腺炎是危害奶牛养殖业最常见的疾病之一,虽然对其的研究已经有100年的历史,取得了一些令人可喜的成果,但仍然是当今奶牛场难以防治的疾病之一.

奶牛乳腺炎的细菌学研究

在对山东7个地区14个奶牛场临床型和隐性乳腺炎调查的基础上采集234头临床乳腺炎病牛乳样、241个隐性乳腺炎乳样并分别做了细菌学检查,结果表明:泌乳期临床型乳腺炎病原菌以凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、酵母菌和棒状杆菌为主;干奶期临床型乳腺炎病原菌以大肠杆菌、链球菌、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌和酵母菌为主;隐性乳腺炎病原菌以凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌链球菌、酵母菌、假单胞菌和棒状杆菌为主;厌氧菌在隐性乳腺炎、干奶期乳腺炎和干奶期乳腺炎乳样的捡出率分别为 5．82％,4．17%,10．16％;隐性乳腺炎、干奶期乳腺炎细菌的共感染率较高,与泌乳期乳腺炎病原菌的差异极显著(P<0．01),隐性乳腺炎与干奶期乳腺炎病原菌共感染率差异不显著(P >0．05)。

高抗体水平种鸡NDV的分离鉴定和分子特性

从抗体水平较高、产蛋下降的种鸡群分离到一株新城疫病毒(Newcastle Disease virus,NDV)SGM01,经动物回归可产生NDV典型病变,其MDT、ICPI和IVPI等分别为50．5h、1．76和2．41,表明为强毒。对其F和HN基因进行克隆测序,F基因氨基酸多肽裂解位点的基序为^(111)GRRQKRF^(117),与强毒基序一致。基因分型表明SGMO1属Ⅶ型。氨基酸同源比较显示:SGM01与LaSota、SQZ04等基因Ⅱ型的同源性为:87．7%～88．3%;(?) Taiwan95、Yunnan03等基因Ⅶ型的同源性为:95．7%～98．2%;与F_(48)E_9等基因Ⅸ型的同源率为:90．8%～91．7%。HN基因与F基因不同,具有明显的时空性。SGM01、Taiwan95、SQZ04等新近分离毒氨基酸高度同源,同源性为:95．3%～97．2%,显著高于与LaSota(经典弱毒疫苗株)和F_(48)E_9(经典强毒株)的同源性87．4%～89．0%。

奶牛急性乳腺炎病原菌的分离与鉴定研究

对 6头患有急性乳腺炎奶牛的 2 4个乳区进行细菌的分离培养和初步的生化鉴定 ,检出葡萄球菌 7株 。

羊十二指肠和回肠插管的试验研究

对 8只 35— 40kg的健康小尾寒羊进行十二指肠和回肠插管。结果表明 ,十二指肠插管宜采用 2 8号T型橡胶管 ,回肠插管宜采用外直径约为 1.0cm、内直径约为 0 .8cm的聚乙烯管 ,在回肠插管经网膜切口引出优于从网膜上隐窝直接引出。本试验的成功率为 6 2 .5 %。

奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白配基结合区基因的克隆与原核表达

运用PCR方法扩增出奶牛乳腺炎分离株10A的Fnbp配基结合区基因,该片段大小为350bp左右,将其与PGEM-T载体连接,转化到受体菌DH5α中,用Amp/IPTG/X-gal琼脂平板筛选出含有重组子的菌株,鉴定成功后,测序结果表明:奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌10A的Fnbp配基结合区基因的序列与金黄色葡萄球菌Mu50、N315、MSSA476、MW2、RF122、COL以及NCTC8325的相应区域序列同源性分别为97%、97%、95%、95%、96%、94%和94%。将重组克隆载体质粒进行BamHⅠ和XhoⅠ双酶切回收后的DNA,定向插入到融合表达载体PET-32a中,构建了重组质粒PET-Fnbp,并转化到宿主菌BL21(DE3)株中,经IPTG4h诱导后,SDS-PAGE电泳表明,重组蛋白得到高效表达,重组蛋白主要以分泌形式存在,分子量35000左右,Ni柱纯化后的蛋白经Western-blotting检测,具有良好的抗原性和特异性。

奶牛乳腺炎防治的思考与探讨

从 3个方面分析了奶牛乳腺炎防治失败的原因 ,包括 :抗生素 ,细菌和宿主之间相互作用和自身发生变化 ;不注重隐性乳房炎的治疗 ;挤奶技术、设备、程序不当等。提出防治乳腺炎几点建议 :创造良好的饲养环境 ;补充维生素和微量元素 ;开发研制奶牛乳腺炎疫苗 ;

奶牛乳腺炎的研究进展

介绍了引起奶牛乳腺炎的致病菌 ,其致病菌可分为接触传染性病原微生物和环境性病原体 ;乳房的防御能力 ,包括乳头管、乳中免疫球蛋白 ;其发病率与饲养管理 ,环境卫生 ,季节 ,胎数 ,泌乳月等的关系 ;各种类型乳腺炎表现出不同的症状 ;患病奶牛的乳腺的变化及其乳汁成分发生变化 ;另外还介绍了乳腺炎的各种诊断方法 ;搞好环境卫生、改善技术设备、增强乳腺的天然防御能力、饲料中添加微量元素在一定程度上可以预防乳腺炎 ,列举了乳腺炎的各种治疗方法。

国外兽医针灸研究与应用

针灸——用来治疗骨骼、皮肤、生殖、心脏、胃肠的疾病并且取得了很大的成功。在犬猫上 ,针灸应用于椎间盘疾病、肉牙瘤、髋关节发育异常、关节炎、轻瘫、瘫痪、慢性呼吸道病、创伤性神经损伤、肌肉损伤、呼吸道病。本论文主要介绍了国外兽医针灸的历史、原理、神经生理、器械、适应症、禁忌症。

奶牛乳腺炎的研究进展

介绍了引起奶牛乳腺炎的致病菌,其致病菌可分为接触传染性病原微生物和环境性病原体;乳房的防御能力,包括乳头管、乳中免疫球蛋白;其发病率与饲养管理,环境卫生,季节,胎数,泌乳月等的关系;各种类型乳腺炎表现出不同的症状;患病奶牛的乳腺的变化及其乳汁成分发生变化;另外还介绍了乳腺炎的各种诊断方法;摘好环境卫生、改善技术设备、增强乳腺的天然防御能力、饲料中添加微量元素在一定程度上可以预防乳腺炎,列举了乳腺炎的各种治疗方法。