GM_3抑制人白血病J6－2细胞肌醇磷脂代谢循环

采用无载体￣（３２）Ｐ和［￣３Ｈ］肌醇标记磷脂，观察了促分化剂神经节苷脂ＧＭ＿３对人单核样白血病Ｊ６－２细胞肌醇磷脂代谢的影响，ＧＭ＿３抑制［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ和［￣３Ｈ］肌醇掺入Ｊ６－２细胞磷脂酰肌醇（ＰＩ），促进［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ和［￣３Ｈ］肌醇掺入磷脂酰肌醇－４，５－二磷酸（ＰＩＰ＿２），抑制［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ掺入磷脂酸（ＰＡ），抑制［￣３Ｈ］肌醇掺入三磷酸肌醇（ＩＰ＿３）．ＧＭ＿３的上述作用均为浓度依赖性的，随ＧＭ＿３浓度的提高而增强．上述结果表明，ＧＭ＿３抑制Ｊ６－２细胞的肌醇磷脂代谢循环．

具不同淋巴道转移潜能小鼠肝癌瘤株细胞膜鞘糖脂比较研究

采用高效薄层层析（ＨＰＴＬＣ）对两株具有不同淋巴道转移潜能的小鼠腹水型肝癌瘤株细胞膜鞘糖脂组分进行了比较分析．低转移的ＣＬ－Ａ_２瘤株神经节苷脂以ＧＭ_３为主，高转移的ＣＬ－１６Ａ_３瘤株则以ＧＭ_２为主．两细胞株中性鞘糖脂各组分相对百分含量无较显著差异．脂结合唾液酸含量测定表明，ＣＬ－１６Ａ_３瘤株脂结合唾液酸含量约为ＣＬ－Ａ_２瘤株的三倍．提示，具有不同淋巴道转移潜能的瘤细胞，其质膜鞘糖脂的组成也不同．

一种简便的肌醇磷脂微量分析方法

分析磷脂酰肌醇循环（ＰＩｃｙｃｌｅ）的磷脂组分常采用双向薄层层析法．建立了一个简单快速的单向薄层层析分离肌醇磷脂方法．首先采用不同的有机溶剂体系分别提取非多磷酸肌醇磷脂和多磷酸肌醇磷脂，然后用不同的层析展开体系，对两部分磷脂进行单向薄层层析分离．采用无载体（３２）Ｐ标记实验对该方法分离效果进行了观察．此法适用于同位素标记和非标记样品中肌醇磷脂组分的比较分析及多磷酸肌醇磷脂的提取、纯化和定量．

神经节苷脂GM_3对人白血病J6－2细胞磷脂酰胆碱代谢的影响

神经节苷脂ＧＭ３诱导人单核样白血病Ｊ６－２细胞沿单核／巨噬细胞途径分化．在ＧＭ３诱导分化同时，Ｊ６－２细胞磷脂代谢发生了显著变化．采用（（３２）Ｐ）Ｐｉ、［ＧＨ３－３Ｈ］胆碱和［ＣＨ３－３Ｈ］ＳＡＭ参入实验对ＧＭ３影响Ｊ６－２细胞ＰＣ代谢的机制进行了初步的探讨．ＧＭ３促进［（３２）Ｐ］Ｐｉ参入Ｊ６－２细胞ＰＣ；抑制［ＣＨ３－３Ｈ］胆碱参入ＰＣ及ＰＣ合成的前体磷酸胆碱及ＣＤＰ－胆碱；ＧＭ３促进［ＣＨ３－３Ｈ］ＳＡＭ参入ＰＣ，但抑制［ＣＨ３－３Ｈ］ＳＡＭ参入ＰＣ合成的前体胆碱、磷酸胆碱和ＣＤＰ－胆碱．上述结果提示，ＧＭ３抑制Ｊ６－２细胞ＰＣ合成的ＣＤＰ－胆碱途径，促进ＰＣ合成的ＰＥ甲基化途径．

18种中草药中痕量锗的定量测定

用混酸（发烟硝酸＋浓硫酸）回流消化中草药样品，Fe（OH）3共沉淀富集锗，苯基荧光酮－溴化十六烷基三甲胺（CTMAB）胶束增溶分光光度法测定了18种中草药中的锗含量，灵芝和白花蛇舌草含量较高，分别为2．46和0．35μg／g。本法检出界限为193ng／g，变异系数为0．89％，在不同中草药中的回收率为91％～93％。

pemt2-cDNA的转染抑制大鼠CBRH-7919肝癌细胞c-Met及Bcl-2的表达并诱发凋亡

为探讨磷脂酰乙醇胺 N 甲基转移酶 2 (phosphatidylethanolamine N methyltransferase 2 ,PEMT2 )的转染抑制大鼠肝癌CBRH 7919细胞增殖的分子机理 ,构建了带有完整的pemt2 cDNA基因质粒载体 ,经转染和鉴定 ,确知其在大鼠肝癌细胞系CBRH 7919细胞中稳定高表达 .用细胞培养、免疫细胞化学、Western印迹、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳等技术研究c Met(HGF的受体 )及抗凋亡蛋白Bcl 2在此过程中的表达和是否诱发凋亡 .免疫组织化学及Western印迹分析显示在转染高表达细胞中 ,c Met及Bcl 2的表达下调 .流式细胞仪分析表明 ,在转染pemt2 cDNA的高表达细胞中 ,G1期细胞增加 ,S期细胞减少 ,并在G0 期出现一个凋亡峰 .琼脂糖凝胶电泳谱显示梯状条带 .结果表明 :pemt2的转染可使大鼠肝癌细胞的c Met及Bcl 2的表达下调 ,并发生凋亡 .

猪、羊、鸡、兔肝脏中磷脂及脂肪酸组分的比较

[目的 ]研究不同动物肝脏组织磷脂和脂肪酸的组成以充分有效地开发利用动物来源的磷脂和脂肪酸资源。 [方法 ]采用有机溶剂萃取、高效薄板层析和高压气相色谱技术对 4种动物肝脏磷脂及脂肪酸组成进行比较分析。 [结果 ]4种动物肝脏均含有丰富的卵磷脂、脑磷脂及各种营养必需脂肪酸。尤其是兔肝中营养必需脂肪酸亚油酸和花生四烯酸分别占 2 4 .0 8%和 2 .34% ,含量很高。 [结论 ]动物肝脏可作为商品磷脂及营养必需脂肪酸的重要来源 ,具有潜在的开发价值。

pLNCX-pemt2重组载体的构建及pemt2基因在大鼠肝癌CBRH-7919细胞中的表达

为进一步研究 pemt2对肝癌细胞生长抑制的作用机制提供方便的实验模型 ,构建了p LNCX- pemt2重组体 .将目的基因 pemt2连接入含有 neo抗性基因的真核细胞表达载体 p LNCX中 ,构建 p LNCX- pemt2重组子 ,并用磷酸钙沉淀法将其转入大鼠肝癌 CBRH- 791 9细胞中 ,应用PCR、Western印迹及 [3 H]SAM参入等技术对其转染、表达及活性进行鉴定 .转染 p LNCX- pemt2的大鼠肝癌细胞 ,PEMT2成功表达 (分子量为 2 2 .5k D) ;高表达克隆 PEMT2的表达量比对照组高约 5倍 ,其活性比对照组高 2 .1倍 ;细胞生长的倍增时间从 2 1 .54± 7.0 8h延长到 43.2 2± 7.1 1h.结果表明 ,p LNCX- pemt2重组体转入肝癌细胞后 ,PEMT2蛋白得到高效表达 ,明显抑制肝癌细胞生长 .

用鞘磷脂作为标志分子鉴定脂筏

脂筏是质膜双层中富含鞘脂、胆固醇及特殊蛋白质的质膜微区.对其功能的研究,首先要对其进行分离和鉴定.常利用密度梯度超速离心将其分离,然后以脂筏中富含的神经节苷脂GM1作为标志分子,利用荧光或生物素标记的霍乱毒素B亚基进行亲和标记来鉴定脂筏.但这一鉴定方法操作复杂、费时、易对环境造成污染,所用关键试剂霍乱毒素不易获得,再加上一些组织GM1含量甚微或不含GM1,使其应用受到局限.为建立一个特异性高又对各种组织广泛适应的脂筏鉴定方法.对两种细胞系脂筏的脂类组分进行了分析.结果发现,可用鞘磷脂作为脂筏的特异性标志分子,采用高效薄层层析技术对脂筏进行鉴定.

PEMT2过表达抑制大鼠肝癌细胞PI3K,Akt的表达

为探讨磷脂酰乙醇胺 N 甲基转移酶 2 (PEMT2 )过表达抑制大鼠肝癌细胞增殖的机制 ,构建了PEMT2高表达细胞克隆 ,并采用半定量RT PCR、免疫细胞化学及流式细胞仪技术 ,研究了PEMT2过表达对PI3K/Akt信号转导途径的影响 .实验结果显示 ,PEMT2过表达可抑制细胞PI3K和Akt的表达 ,并诱导细胞凋亡 .这一结果提示 ,PI3K/Akt信号转导途径下调可能是PEMT2抑制肝癌细胞增殖的部分机制 .

大鼠正常肝细胞与肝癌细胞磷脂酰胆碱及脂肪酸组成的比较研究

目的 :探讨肝癌细胞的膜磷脂组分变化。方法 :采用高效薄板层析方法并配合无机磷的测定 ,比较了大鼠正常肝细胞与癌变细胞磷脂的组成及摩尔分数 ,用气相色谱法对其中含量最多的磷脂组分磷脂酰胆碱 (PC)的脂肪酸组成进行了测定。结果与结论 :肝癌细胞的PC含量明显减少 (P <0 .0 5 ) ,PC中长链及不饱和脂肪酸含量显著减少 (P <0 .0 5 )。

GM_3对小鼠腹腔巨噬细胞磷脂代谢转换率的影响

神经节苷脂ＧＭ_３对小鼠腹腔常驻巨噬细胞（Ｒ－Ｍ）和Ｇｅ－１３２体内激活的巨噬细胞（Ｇｅ－１３２－Ｍ）的磷脂代谢转换有显著的影响，当这两种Ｍ在体外用ＧＭ_３处理时，表现出［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ和［￣３Ｈ］肌醇参入ＰＩ降低，参入ＰＩＰ、ＰＩＰ_２增加；但在［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ和［￣３Ｈ］胆碱参入ＰＣ上，Ｒ－Ｍ与Ｇｅ－１３２－Ｍ不同，即ＧＭ_３促进同位素前体参入Ｒ－Ｍ的ＰＣ，抑制它们参入Ｇｅ－１３２－Ｍ的ＰＣ．以上结果表明ＧＭ３可能提高了ＰＩ或ＰＩＰ的磷酸激酶的活性，致使［￣（３２）Ｐ］ＰＩＰ和［￣（３２）Ｐ］ＰＩＰ_２增多，［￣（３２）Ｐ］ＰＩ减少．激活的Ｍ（Ｇｅ－１３２－Ｍ）本身ＰＣ代谢转换率较Ｒ－Ｍ高，当Ｇｅ－１３２－Ｍ再受ＧＭ_３刺激，ＰＣ代谢转换率降低，这提示ＧＭ_３对激活的Ｍ的ＰＣ代谢转换有调节作用．

GM＿3对小鼠巨噬细胞介导的肿瘤细胞毒的激活及其对Ge－132的协同作用

神经节苷脂ＧＭ＿３在体外能激活小鼠腹腔巨噬细胞介导的肿瘤细胞毒（ＭＴＣ）效应，所用的肿瘤细胞为Ｊ６－２和Ｈｃａ－１６Ａ＿３。有机锗化合物Ｇｅ－１３２（１００ｍｇ／ｋｇ，ｐ，ｏ，）于体内也能激活小鼠的ＭＴＣ。将经Ｇｅ－１３２在体内激活的Ｍ，再于体外以ＧＭ＿３处理，其Ｍ介导的ＭＴＣ比ＧＭ＿３与Ｇｅ－１３２单独激活效应之和要大，表现出协同作用，ＧＭ＿３浓度需≥３０μｍｏｌ／Ｌ。

窖蛋白的结构与功能及其在肺部疾病中作用的研究进展

胞膜窖（caveolae）是二十世纪五十年代通过电镜发现并命名的50～100nm烧瓶状的质膜内陷，是富含胆固醇、鞘磷脂和鞘糖脂，以窖蛋白（caveolin）为标志性蛋白，去污剂不溶性的质膜微区。绝大多数组织细胞质膜上都存在caveolae，在多种生理和病理过程中发挥着重要作用，本文将对caveolin在肺部疾病中的研究进展加以综述。

医学生化教学中创新素质培养的探讨与实践

文章阐述了培养医学生创新素质的重要性,就生物化学教学中如何培养医学生的创新素质进行了探讨。

鞘糖脂与信息传递

鞘糖脂与信息传递崔肇春，马克里（大连医学院生化教研室，大连１１６０２３）关键词鞘糖脂，信息传递鞘糖脂（ＧＳＬ）几乎存在于所有真核细胞质膜上，由疏水的神经酰胺（Ｃｅｒ）与亲水的寡糖链组成，Ｃｅｒ部分插入质膜，寡糖链则伸向质膜外。由于它和信息传递的许多因...

神经节苷脂GM_3对人白血病J6-2细胞PKC转位及DAG含量的影响

应用SDS PAGE及Western印迹技术检测神经节苷脂GM3 处理前后人白血病J6 2细胞不同类型PKC在细胞内的转位情况 ,同时利用高效薄板层析技术观察了细胞内DAG含量的变化 ,从而探讨GM3 抑制PKC活性的机制 .实验发现 ,GM3 处理后胞液PKCα明显增加 ,而颗粒结合PKCα则相对减少 ;GM3 对其它亚型PKC在细胞内分布无显著影响 .同时还发现 ,GM3 处理后细胞内DAG含量降低 (P <0 0 5 ) .结果表明 ,GM3 抑制PKCα由胞浆向质膜转位 ,对其它亚型PKC在细胞内转位无影响 .提示GM3 抑制的PKC亚型可能是PKCα .同时GM3 降低细胞内DAG含量 。

神经节苷脂GM_3对J6－2细胞蛋白质磷酸化的影响

通过研究神经节苷脂ＧＭ＿３对国人单核样白血病细胞系Ｊ６－２细胞蛋白质磷酸化的影响，在［γ－￣３２Ｐ］ＡＴＰ，ＧＭ＿３，ＡＴＰ，Ｍｇ￣（２＋）与Ｊ６－２细胞液及颗粒两部分共同反应，１Ｏｍｉｎ（３０℃）体系中，观察到ＧＭ＿３对两部分蛋白质磷酸化的调节作用。ＧＭ＿３（１００μｍｏｌ／Ｌ）促进颗粒部分分子量为１８００００，８７０００，７８０００，６７０００，４３０００及３１０００的蛋白质磷酸化，促进胞液部分分子量为８７０００及５６０００的蛋白质磷酸化，而且能抑制７００００及４３０００蛋白质磷酸化。由于ＧＭ＿３已被前人证实能对Ｊ６－２细胞起分化作用，其作用时间长达４－６ｄ，很可能ＧＭ＿３对蛋白质磷酸化作用的调节是ＧＭ＿３促分化作用的早期信号。

一氧化氮是GM_3激活巨噬细胞介导细胞毒的效应分子

已报道了神经节苷脂ＧＭ３在体外能激活小鼠腹腔巨噬细胞介导的细胞毒效应（ＭＴＣ），在此基础上发现ＧＭ３又同时可诱导巨噬细胞合成一氧化氮。后者的合成与巨噬细胞的细胞毒效应呈正相关关系（ｒ＝０．９６４，Ｐ＜０．００１）。ＮＯ合酶的抑制剂氨基胍，能显著地减弱ＭＴＣ。上述结果提示，在ＧＭ３激活的ＭＴＣ中。

磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2过表达对大鼠肝癌细胞不同亚型蛋白激酶C表达及转位的影响

目的探讨转染磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2(PEMT2)基因抑制大鼠肝癌CBRH-7919细胞增殖的机制。方法采用免疫细胞化学和蛋白质印迹法观察pemt2过表达对肝癌细胞不同亚型蛋白激酶C(PKC)表达及在细胞内转位的影响,同时采用高效薄板层析技术对细胞内二脂酰甘油(DAG)的水平进行检测。结果转染PEMT2使细胞CPKC α表达降低,CPKC β2表达增加,并由胞浆向质膜转位。同时细胞内DAG水平下降。转染PEMT2对其它PKC亚型的表达及细胞内转位无显著影响。结论转染PEMT2 对不同亚型PKC表达及细胞内转位的影响可能与其抑制细胞增殖,诱导凋亡的机制有关。