D3胚胎卵裂球数目与胚胎发育潜能和整倍性的相关性研究

目的通过高通量测序技术(NGS)探讨D3胚胎卵裂球数目与胚胎发育潜能和整倍性之间的关系。方法回顾性分析2018年1月至2021年12月于本院生殖中心行胚胎植入前非整倍体遗传学检测(PGT-A)助孕的261个治疗周期共920枚活检囊胚的数据资料,根据D3胚胎卵裂球数目不同进行分组(4细胞组、5细胞组、6细胞组、7细胞组、8细胞组、9细胞组、10细胞组及≥11细胞组),评估各组后续获得优质囊胚和整倍体囊胚的机会,并统计分析各组间临床结局的差异。结果(1)与8细胞组相比,5细胞、6细胞、7细胞及10细胞组优质囊胚率显著降低(P=0.00),调整女方年龄因素以后,差异仍有显著性(P=0.00);卵裂球数目合并分组后,≤7细胞组、9~10细胞组的优质囊胚率显著低于8细胞组,调整年龄因素以后,差异仍有显著性(P<0.05);≥11细胞组优质囊胚率与8细胞组间无显著性差异(P=0.51),调整女方年龄后,仍无显著性差异(P=0.45)。(2)与8细胞组相比,其他各组囊胚的整倍体率均无显著性差异(P>0.05);调整年龄后,各组间囊胚整倍体率仍无显著性差异(P>0.05);卵裂球数目合并分组后,各组间随着卵裂球发育速度增快,囊胚整倍体率增加,但差异尚无统计学意义(P>0.05);调整年龄混杂因素后,各组间的囊胚整倍体率仍无显著性差异(P>0.05)。(3)随着卵裂球数目增加,各组临床妊娠率、活产率呈上升趋势;卵裂球数目合并分组后,≥11细胞组的临床妊娠率和活产率最高,≤7细胞组的临床妊娠率和活产率最低,但差异均尚无统计学意义(P>0.05)。结论D3卵裂期胚胎的发育潜能随着卵裂球数目的增加而增加,≥11细胞的D3快速分裂胚胎具有同8细胞胚胎相似的整倍体率和活产率,为临床单胚胎移植胚胎选择策略提供一定的参考。

反相高效液相色谱法同时测定黄连花薹及黄连花茶中6种生物碱的含量

目的采用反相高效液相色谱法,建立盐酸药根碱、非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱共6种生物碱的同时测定方法,并测定其在黄连花薹和黄连花茶中的含量。方法采用反相高效液相色谱法。Xtimate^(TM)C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm、);流动相A相30 mmol/L碳酸氢铵水溶液(含有0.7%氨水、0.1%三乙胺),B相乙腈,体积比为72:28,流速为1 mL/min;检测波长345 nm;柱温为25℃;进样体积为20μL。结果在一定的浓度范围内,6种生物碱浓度与峰面积之间的线性关系良好,其检测精密度、稳定性、重复性及加样回收率的RSD值均在3%以内。测得两个品牌黄连花茶中6种生物碱含量差异不大,对4个不同来源的黄连花薹样本而言,其中盐酸黄连碱和盐酸巴马汀的含量差异也不大,但盐酸药根碱、非洲防己碱、盐酸表小檗碱和盐酸小檗碱的含量却有较大差异。结论该方法具有分析速度快、灵敏度高、重现性好等特点,该方法的普及和应用将会为黄连花茶等系列深加工产品提供一个从原料到产品的质量控制方法。

高效液相色谱法同时测定荷叶中6种黄酮类成分

为了探索同时测定荷叶茶及饮片中6种黄酮类成分（芦丁、金丝桃苷、紫云英苷、槲皮素、山奈素和异鼠李素）含量的方法,本研究以8种不同的荷叶样本为材料,采用高效液相色谱分析法对6种黄酮类成分进行了同时测定。样品经过前处理,以0.5%甲酸-水（A）和0.1%甲酸-乙腈（B）作为流动相进行梯度洗脱,流速为1mL/min,柱温为25℃,进样量为20μL,经Agilent TC-C18（2）（150mm×4.6mm,5μm）色谱柱分离,于360nm波长处检测,结果显示,芦丁、金丝桃苷、紫云英苷、槲皮素、山奈酚、异鼠李素6种黄酮类成分分别在1.6~160、1.8~180、2.16~216、1.4~140、2.12~212、1.6~160μg/mL浓度范围内有良好的线性关系（R2〉0.9992）,其检测稳定性、重复性、日内精密度、日间精密度以及加样回收率的RSD均小于2%。进一步用该方法对不同来源的8个荷叶样本进行检测,结果显示荷叶样本中6种黄酮类成分含量以槲皮素最高,并且以样本G荷叶茶（购自G公司,批号为130802）的槲皮素含量最高。本研究建立的同时测定6种荷叶黄酮类成分含量的方法快速、准确,可为荷叶有效成分的检测和质量控制提供技术支撑。

新鲜ICSI移植周期D3胚胎卵裂球数目与助孕结局相关性研究

目的观察新鲜卵胞浆内单精子注射(ICSI)移植周期D3胚胎卵裂球数目不同对妊娠结局和新生儿结局的影响,以期优化单胚胎选择策略。方法回顾性分析2018年1月至2020年12月在本中心行ICSI治疗的2618个新鲜移植周期的临床资料,按照第三天(D3)胚胎卵裂球数目分为6组:≤6细胞组(78例)、7细胞组(199例)、8细胞组(1936例)、9细胞组(178例)、10细胞组(163例)和≥11细胞组(64例),比较组间妊娠结局和新生儿结局。结果妊娠结局的比较:8细胞组的临床妊娠率(52.8%)显著高于≤6细胞组(20.5%)、7细胞组(34.2%)和9细胞组(34.3%),活产率(44.5%)也显著高于≤6细胞组(11.5%)、7细胞组(27.6%)和9细胞组(28.7%),差异均有统计学意义(P<0.001);10细胞组和≥11细胞组的临床妊娠率和活产率略低于8细胞组,差异尚无统计学意义(P>0.05)。新生儿结局的比较:7细胞组的低出生体重儿占比显著高于8细胞组(10.9%vs.2.7%,P<0.001),组间其他新生儿结局指标差异均无统计学意义(P>0.05);≤6细胞组获得9例健康活产儿。结论新鲜ICSI移植周期中,优先考虑移植D3的8细胞胚胎,其次为10个及以上细胞的胚胎;9细胞胚胎和7细胞胚胎具有相似的临床结局,但7细胞胚胎低出生体重儿风险增加;当没有优质胚胎可供移植时,≤6细胞胚胎依然有健康活产的机会。

黄连花薹及其生物碱的急性与亚急性毒性研究

为调查黄连花薹作为可食用资源的安全性,开展了黄连花薹及其主要生物碱的急性毒性和亚急性毒性试验。在急性毒性试验中,用20000 mg/kg黄连花薹提取物和743.2 mg/kg生物碱混合物分别灌胃KM小鼠,14 d内未发现任何毒性反应且无动物死亡现象。在亚急性毒性试验中,以500、1000、2000 mg/kg 3个剂量的黄连花薹提取物及37.16 mg/kg的生物碱混合物分别灌胃SD大鼠28 d,对照组和各处理组的动物体重和器官相对质量没有显著性差异,生化、血液和尿液指标检查均在正常范围内,主要脏器无病变,而且未观察到动物死亡现象。上述实验结果证明了黄连花薹作为药食同源原料的安全性。

不同来源黄连花薹的自由基清除活性及其物质基础

为了研究不同来源黄连花薹的自由基清除活性及其物质基础,对不同来源黄连花薹(湖北省利川市味连、重庆市石柱县味连、四川省洪雅县雅连和云南省福贡县云连)乙醇提取物中总酚、总花青素、总生物碱、总黄酮及蒙花苷的含量进行检测,对其清除DPPH自由基(DPPH^(•))、ABTS自由基(ABTS^(•+))和超氧阴离子自由基(O_(2)^(•-))的活性进行分析。结果表明:总酚与总黄酮含量以雅连花薹乙醇提取物中最高,分别为118.26±7.07 mg/g(以没食子酸计)和78.39±4.92 mg/g(以芦丁计);总花青素与总生物碱含量以云连花薹乙醇提取物中最高,分别为9.83±2.00 mg/g(以儿茶素计)和86.46±0.38 mg/g(以盐酸小檗碱计);利川味连与石柱味连花薹中总生物碱含量间无显著性差异(P>0.05)。不同来源黄连花薹乙醇提取物对DPPH^(•)、ABTS^(•+)和O_(2)^(•-)的清除活性由强到弱依次为:雅连花薹、石柱味连花薹、利川味连花薹及云连花薹。蒙花苷对DPPH^(•)、ABTS^(•+)和O_(2)^(•-)的清除活性均较低,分别为4.88%~5.54%、12.17%~16.82%和11.37%~12.21%。分子对接结果表明,影响蒙花苷清除自由基活性的主要原因是蒙花苷给电子能力较弱,推测这是蒙花苷对3种自由基的清除活性贡献率较低的内在原因。