临床HIV感染者血液样本的保藏与利用

当前,艾滋病——获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)仍是人类面临的世界性且极具威胁性的重大公共卫生问题之一,其病原体为人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)。HIV感染会导致CD4+T淋巴细胞的数量发生进行性减少,机体免疫功能遭受严重破坏,从而并发各种机会性感染及肿瘤等疾病[1]。

乙型肝炎病毒X蛋白增强人血管生成因子bFGF基因启动子转录活性

目的检测乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对人血管生成因子bFGF基因转录的激活作用并确定其作用于bFGF基因启动子的区域,分析HBx激活bFGF基因转录可能的分子机制,为揭示HBx促进肝癌发生的分子机制及发现新的治疗靶点。方法运用高保真DNA聚合酶从人肝癌HepG2细胞cDNA文库中扩增出bFGF基因启动子DNA序列;从含完整HBV DNA序列的表达载体中扩增HBx编码序列并克隆入真核表达载体p CDNA3-FLAG中,将HBx表达载体转染人肝癌HepG2细胞中,裂解细胞进行蛋白SDS-PAGE电泳,Western blot检测HBx蛋白的表达;将HBx表达载体和含bFGF基因启动子不同区段的荧光素酶报告载体共转染肝癌HepG2和SMMC-7721细胞,检测HBx对bFGF基因启动子转录活性的影响;运用Western blot检测在肝癌细胞中HBx过表达对ERK磷酸化的影响。结果成功克隆了HBx并使其在肝癌细胞中得到表达;成功克隆了bFGF基因启动子2.2 kb、1.4 kb、720 bp和360 bp的区段;在肝癌细胞SMMC-7721和HepG2细胞中HBx的表达能升高bFGF基因启动子的活性,且对上述4个区段的活性均增加约5倍;HBx以剂量依赖的方式增强bFGF基因启动子的活性;HBx高表达在肝癌HepG2细胞中不能升高ERK1/2的磷酸化水平。结论HBx能够激活bFGF基因启动子的活性,这种激活作用位于HBx启动子转录起始位点上游360 bp片段内,HBx促进bFGF基因转录不依赖于ERK1/2的磷酸化作用,提示HBx可能通过其它信号通路作用于bFGF基因的转录过程。

解放军总医院第五医学中心传染病特色生物样本库的标准化建立

为了建立具有传染病特色的规范化、标准化临床生物样本库,在前期通过文献检索和实地调研等方法,在转化医学理念的指导下,以前瞻性队列为牵引,标准化收集、保存本院艾滋病、肝病等特色临床传染病样本。从2015年7月至今,建立了库容量大于200万份的传染病样本库,制定了完整的各类样本(血液、组织等)收集、处理及保存等标准操作规程,制定了安全管理、样本管理、样本质控等相关管理制度,优化了样本库管理-样本信息-随访信息三位一体的运作流程。收集、保藏了血浆、全血、外周血单核细胞等样本近20万份,可为乙肝、艾滋病等传染病的综合防治与研究提供高质量样本及相关临床信息。