共附生微生物抗肿瘤活性菌的筛选与鉴定

对分离自海绵和植物组织的一些微生物进行抗肿瘤活性菌株的筛选。采用SRB法对252株微生物菌株的发酵提取物进行了抗肿瘤活性的筛选。结果显示,28%的测试菌株在提取物浓度为100μg/mL时对HeLa细胞的抑制率在50%以上,经复筛确定有6株细菌和1株真菌具有良好且稳定的抗肿瘤活性,其提取物在100μg/mL时对HeLa细胞的抑制率均在80%以上,其中活性最高的两株菌HMJ-390和YX-5对HeLa细胞的IC50分别为40.56μg/mL和5.33μg/mL。经16S rDNA和ITS rDNA序列分析,鉴定HMJ-390为Cellulophagasp.,YX-5为Aspergillussp.。结果表明,作为抗肿瘤药物的潜在来源共附生微生物值得关注。

海洋细菌抗肿瘤活性菌株的筛选与鉴定

采用MTT法对分离自美国圣璜岛海域的251株海洋细菌进行抗肿瘤活性的筛选,以期从海洋环境中筛选出具有抗肿瘤活性的菌株,为新型抗肿瘤药物开发提供新的天然产物资源。结果表明:54株海洋菌有较好的抗肿瘤活性,在测试浓度为100μg·mL-1时,对HeLa细胞的抑制率均大于50%,占总测试菌株的21.5%,其中有7株菌株对HeLa细胞的抑制率在85%以上。在所有活性菌株中,菌株No.657的活性最强,其液体发酵及固体发酵的提取物,对HeLa细胞的IC50分别为36.53、3.19μg·mL-1,经菌株形态的观察和16SrDNA序列分析鉴定,该菌株为变形斑沙雷氏菌Serratia proteamaculans。这表明,海洋微生物是抗肿瘤活性物质的重要来源,菌株No.657是一株很好的抗肿瘤活性菌,其固体发酵更适宜其活性代谢产物的产生。

1株抗肿瘤银杏内生真菌的发酵条件及活性产物稳定性研究

对前期研究发现的1株分离自银杏树皮组织的具有良好的抗肿瘤活性内生真菌米曲霉菌(Aspergillus oryzae)YX-5菌株的发酵条件及活性产物稳定性进行研究。以发酵后的菌体干质量、粗提物质量和粗提物抗肿瘤活性为指标,对YX-5菌株的发酵温度、pH值、转速和发酵时间等条件进行优化。结果表明,最适宜的发酵条件为温度25℃、pH值7.0、摇床转速110 r/min、发酵时间7 d。以粗提物的抗肿瘤活性为指标,比较发酵液粗提物经热处理、酸碱处理、紫外照射和蛋白酶处理后的稳定性,发现YX-5菌株的活性产物在常温、中性和酸性环境中稳定性较好,对紫外线和蛋白酶有较强的抗性,但在超过100℃高温条件下或pH值超过9.0的碱性环境中稳定性较差。该菌株粗提物在自然条件下总体稳定性较高,不易发生变化,有利于活性成分分离工作的开展。