不同浓度蔗糖诱导马铃薯微型薯形成时α-淀粉酶活性分析

利用不同浓度蔗糖诱导马铃薯微型薯 ,所生成的微型薯的产量不同。α 淀粉酶是马铃薯微型薯生长发育有关的一项重要生理生化指标 ,与块茎形成过程中干物质的积累密切相关。本文对在不同浓度蔗糖下形成的微型薯的α 淀粉酶活性进行分析 ,其结果表明 ,α

CARP抗体制备及表达模式分析

目的:制备心肌锚定重复序列蛋白(CARP)的抗体并分析其表达模式。方法:通过生物信息学对其抗原性进行分析,通过RT-PCR从小鼠的心肌cDNA中扩增了N-端279bp的片段,并克隆到表达载体pET28b中,使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化CARP蛋白,用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。利用制备的抗体,通过Western blot和免疫荧光的方法,分别检测了CARP在各组织和细胞中的表达模式。结果:制备了CARP抗体,进一步验证了CARP表达在蛋白水上呈心肌特异性,在大鼠心肌原代细胞中主要在细胞核中表达。结论:成功制备了CARP抗体,分析了CARP的表达模式,为进一步CARP的功能奠定了基础。

T-载体的构建

以pcDNA3.1/V5-His为骨架载体,利用限制性内切酶EcoR V得到平端化的线性载体,在dTTP和Taq聚合酶作用下,产生3’末端突出一个T碱基的T-载体。目的基因与T-载体连接,大肠杆菌转化,提取质粒进行酶切鉴定,结果表明构建的T-载体成功克隆了目的基因片段,T-载体构建成功。

WSSV ie1的野生型和突变体在昆虫细胞中的表达及其蛋白纯化

对虾白斑综合征（White Spot Syndrome,WSS）是由对虾白斑综合征病毒（White Spot Syndrome Virus,WSSV）引起的,该病毒是目前世界范围内对虾养殖业的主要病原,它感染的宿主种类多,分布范围广,传播速度快。对虾被感染后,3—10d内累积死亡率可达90%—100%[1,2],目前尚无有效的预防和治疗该病的药物，给对虾养殖业造成巨大损失。

Sf9细胞PHB2蛋白的原核表达及其抗血清的制备

为了研究Sf9细胞PHB2蛋白(Sf-PHB2)的功能及其对虾白斑综合症病毒(WSSV)极早期基因ie1的转录调控作用,本研究从昆虫细胞Sf9中扩增sf-phb2基因编码区,克隆至表达载体pET30a中,转化到大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达6His-Sf-PHB2重组蛋白。SDS-PAGE分析表明,表达的重组蛋白以包涵体形式存在。在变性条件下,用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化Sf-PHB2重组蛋白,免疫BALB/c小鼠制备抗体,并用western blot方法检测抗体的反应性。本研究制备了Sf-PHB2抗体,为进一步研究该蛋白的功能奠定基础。

鸡肌肉生长抑制素在机械负荷引起肥大的肌肉中高表达

肌肉生长抑制素(MSTN)基因是TGF-β超家族的一种新基因,仅在骨骼肌特异表达并作为肌肉生长的负调控因子。机械牵拉能够引起完全分化的鸡受累的肌肉肥大,并诱导肌肉生长抑制素在转录水平和蛋白水平表达升高。

miR-146a基因多态性与腔隙性脑梗死的关系

目的探讨miR-146a基因多态性与腔隙性脑梗死(LI)的关系。方法选择LI患者173例(观察组)和与其性别、年龄匹配的非心脑血管疾病体检者298例(对照组),采用SNaPshot法检测血miR-146a rs2910164和rs57095329位点的基因多态性,B型彩色多普勒超声仪检测颈动脉内膜中层厚度(CIMT)。结果观察组miR-146a rs2910164位点GG基因型频率为8.67%、CC+CG基因型频率为91.33%、G等位基因频率为33.24%,对照组分别为17.11%、82.89%、39.93%,P均<0.05。两组miR-146a rs57095329基因型和等位基因频率比较,P均>0.05。观察组70岁以下者miR-146a rs2910164位点G等位基因频率为28.57%,对照组为39.12%,P<0.05。观察组miR-146a rs2910164和rs57095329位点正常和突变基因型患者的CIMT比较,P均>0.05。结论 LI患者miR-146a基因rs2910164位点G等位基因频率降低,G等位基因可能是其发病的一种保护性因素。

去整合素金属蛋白酶10基因启动子区多态性变化与腔隙性脑梗死发病风险的关系

目的观察腔隙性脑梗死患者去整合素金属蛋白酶(ADAM)10基因启动子区多态性变化,分析此多态性变化与腔隙性脑梗死发病风险的关系。方法研究对象为173例腔隙性脑梗死患者(梗死组)和297例非脑血管病体检者(对照组),采用Snapshot分型技术检测ADAM10基因启动子区rs653765和rs514049位点多态性,采用B型彩色多普勒超声仪测量颈动脉内膜中层厚度(CIMT);比较两组位点多态性及其与梗死组性别、年龄、CIMT的关系。结果梗死组ADAM10基因rs653765位点CC基因型频率显著低于对照组(P=0.008 0)、隐性模型CT+TT基因型频率显著高于对照组(OR=0.54,95%CI为0.36~0.81,P=0.002 9),T等位基因频率显著高于对照组(OR=1.95,95%CI为1.37~2.79,P=0.000 2);两组ADAM10基因rs514049位点的基因型频率和等位基因频率无显著差异(P>0.05)。携带ADAM10基因rs653765位点T等位基因的男性发生腔隙性脑梗死的风险显著升高(OR=1.51,95%CI为1.00~2.28,P=0.048),而≥70岁人群中携带CT基因型或T等位基因者发生腔隙性脑梗死的风险显著升高(OR=1.69,95%CI为1.00~2.85,P=0.046);ADAM10基因rs653765和rs514049位点的多态性与腔隙性脑梗死患者CIMT无明显相关。结论 ADAM10基因rs653765位点T等位基因可能与腔隙性脑梗死的发病有关。

应用组培脱毒苗微型薯体系鉴定马铃薯不同品种的PSTV抗性研究

应用人工接种PSTV ,侵染健康脱毒组培扦插苗 ,建立了以微型薯产量为依据鉴定PSTV抗性的系统。该系统具有简便、快速。

赤霉素(GA)对马铃薯微型薯形成影响的研究

在马铃薯微型薯诱导实验中添加不同浓度的赤霉素,考察它对结薯的影响,实验证明赤霉素能显著降低微型薯的产量。通过对微型薯α-淀粉酶活性分析表明:赤霉素能显著提高α-淀粉酶活性。微型薯的产量与α-淀粉酶活性之间存在极显著的负相关的关系,赤霉素的浓度与α-淀粉酶活性之间存在极显著的正相关关系。

生物技术专业“落地人才”培养模式的探索与实践

为适应生物技术产业对人才的需求,结合黑龙江八一农垦大学的实际,对生物技术专业落地人才培养模式进行探索和实践,以期提高教学质量和学生的综合素质,构建以实践能力培养为核心、有利于学生就业为导向的生物技术人才培养模式。

浅谈生物化学综合性实验体系的构建

生物化学是一门基于实验科学的生物学基础课程。随着社会的进步和自然科学的发展,生物化学实验在整个教学体系中的地位越来越重要。现阶段生物化学的实验体系存在着实验设置零散、关联度不够以及内容陈旧等问题。本文针对以上问题,提出了开展综合性实验的思路,并对如何构建生物化学综合性实验体系进行了讨论,得出了一套切实可行的方案。

牛体外受精卵培养方法的研究

以CRLaa为基础培养基,分别采用三种方法对牛体外受精卵进行培养。方法一:预先制备卵丘细胞单层,随后将已培养48h的受精卵转入;方法二:用胶原预先处理培养皿,随后将受精刚结束的受精卵转入;方法三:将方法二中的血清培养改为无血清培养。结果表明,三种方法卵裂率无显著差异(82.7%、85.7%、84.2%,P>0.05);方法二(32.1%)的囊胚率明显高于方法一(21.6%),P<0.01;但与方法三(32.8%)相当,P>0.05。

含心脏阿霉素反应蛋白基因的重组慢病毒过表达和RNA干扰载体的构建及鉴定

目的:构建心脏阿霉素反应蛋白(CARP)基因重组慢病毒过表达和RNA干扰载体并进一步包装慢病毒,为研究CARP在阿霉素(ADR)心肌病中的作用及机制奠定基础。方法:将PCR扩增的大鼠CARP基因序列和设计合成的短发夹RNA(shRNA)序列分别插入GV-358和GV-248表达载体,行DNA测序鉴定。采用重组CARP过表达和shRNA表达穿梭载体与Helper 1.0和Helper 2.0辅助包装质粒共转染人胚肾细胞HEK293T,进行病毒包装和扩增,采用终点稀释法测定病毒滴度。采用重组慢病毒感染HEK293T细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度。采用重组慢病毒感染H9C2细胞,分为对照组、Scramble RNA组、CARP过表达组和shRNA CARP组,Western blotting法检测各组细胞中CARP蛋白表达水平。结果:基因测序,CARP过表达及shRNA载体序列与原设计序列完全相符。载体转染HEK293T细胞后,在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达。包装的CARP过表达及shRNA病毒感染H9C2细胞后,与对照组比较,CARP过表达组细胞中CARP蛋白表达水平升高5.3倍(P=0.01),shRNA CARP组细胞中CARP蛋白表达水平降低53%(P=0.02)。结论:成功构建了CARP过表达和特异性shRNA慢病毒表达载体并获得高感染效率的过表达和RNA干扰慢病毒,后者在H9C2细胞中能够干预CARP表达。

两株抗鸡CARP单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的:制备抗鸡CARP单克隆抗体(McAb)。方法:克隆并原核表达鸡CARPN端110个氨基酸,纯化CARP蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆;并利用ELISA、Western blot方法测定其效价和特异性。结果:获得2株能够稳定分泌抗鸡CARP的McAb杂交瘤细胞株,命名为4A8和4E6,亚型都属于IgG1,轻链为κ链;抗体腹水效价分别为3.2×104、1.28×105。Western blot检测到这两株抗体能够识别鸡CARP蛋白。结论:成功获得了2株能识别鸡CARP的杂交瘤及其分泌的特异性McAb。

利用CRISPR/Cas9系统构建SIRT1基因敲除的K562细胞株

目的构建去乙酰化酶SIRT1基因敲除的K562单克隆细胞株,研究SIRT1基因对细胞增殖的影响。方法设计靶向SIRT1酶活性中的sgRNA编码序列,构建CRISPR/Cas9载体并转染K562细胞,嘌呤霉素筛选后单克隆化并扩增;采用基因组测序、PCR和免疫印迹的方法进行基因敲除效果鉴定;对选定的SIRT1基因敲除的单克隆做生长曲线检测。结果目标质粒测序符合,质粒转染细胞后检测到基因组靶序列位置杂合峰,获得SIRT1基因敲除的单克隆3个,SIRT1基因敲除导致细胞增殖明显减缓。结论成功构建了SIRT1基因敲除的细胞株,该细胞可作为血液系统疾病研究的有力工具。

奶牛布氏杆菌病的检测及疫苗使用

大约2500年前,希波克拉底时期在地中海地区的绵羊和山羊中首次发现布氏杆菌。英国外科医生大卫布鲁斯博士于1887年首次从马耳他的感染者身上分离出梅利特布氏杆菌,布氏杆菌是以他的名字命名的。伯纳德.邦(丹麦)博士于1897年首次从牛身上分离出流产型布氏杆菌,家畜布氏杆菌病被广泛称为Bang病。约翰巴克博士(美国农业部)重新检查了他在办公桌上放了一年的流产型布氏杆菌培养物,看发生了什么,他观察到第19个培养皿中有一个突变株,其毒性较小,这成为了S19疫苗,S19于1941年首次使用。S19布氏杆菌最初是从一头名叫“马蒂尔达”的娟珊牛身上分离出来的。从那以后,疫苗接种(S19和RB51主要用于牛)和检测是全世界控制和根除布氏杆菌病程序的关键。很少有国家能在动物种群中彻底消灭这种疾病,每年全世界大约有50万新感染的人类感染病例。尽管全球关注控制和预防,但该病仍在许多国家和地区流行。

奶牛繁殖项目的有效管理

中国奶业协会第五次会员代表大会的主题是构建中国的现代奶业,与会代表就现代奶业的内涵、评价标准以及如何实现中国奶业的现代化等问题展开了热烈而深入地讨论。本刊编辑部对各位代表的发言进行了整理,现分养殖篇、加工与市场篇、技术篇三个部分予以刊登,以飨读者。

miR-137过表达慢病毒的包装和鉴定

目的:构建miR-137过表达慢病毒载体并进一步包装慢病毒,探讨miR-137在HEK293T细胞中的感染效率和表达水平。方法:化学合成miR-137序列并克隆到慢病毒载体GV209,得到并鉴定含有目的片段的重组质粒,采用Lipofectamine 2000共转miR-137重组质粒与慢病毒辅助包装质粒到HEK293T细胞中生产慢病毒。以感染复数(MOI)值为40感染HEK293T细胞48h后,荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达,采用荧光定量PCR法检测HEK293T细胞中miR-137的表达水平。结果:测序结果,目的基因序列与GenBank公布的miR-137基因序列完全一致。在感染的HEK293T细胞中观察到GFP的表达。过表达慢病毒感染细胞中miR-137表达水平是对照细胞的12.74倍。结论:成功包装miR-137过表达慢病毒,并可高效感染HEK293T细胞。

特发性基底节钙化的遗传学研究进展

特发性基底节钙化(IBGC)是一种以基底节及大脑其他部位的自发性对称性钙化为特征的神经系统遗传疾病,患者可出现运动障碍及认知障碍、精神异常、癫痫发作等,目前尚无有效治疗药物。该病具有遗传异质性,迄今为止发现5个该病的致病基因:溶质载体家族20成员2(SLC20A2)、血小板衍生生长因子受体β(PDGFRB)、血小板衍生生长因子亚基B(PDGFB)、泛素样修饰剂5(ISG15)、放射性和多变性逆转录病毒受体1(XPR1),将IBGC的发生机制分别与大脑局部无机磷稳态失衡、血脑屏障功能障碍及IFN-α/β免疫信号过度放大联系起来。本文综述IBGC的遗传学研究进展,初步探讨5个致病基因导致IBGC的相关机制。