血液系统疾病生物样本库的建立

目的 探讨建立设施完备、信息互通的规范化血液系统疾病样本采集、存储、管理、服务体系,实现全方位血液系统活细胞及相关血液成分的规范化保藏,为临床研究及转化应用提供资源保障。方法 血液系统疾病生物样本库集收集处理、质量控制、基因分析、功能鉴定于一体,另设有独立的存储区,具有与临床诊疗数据、组学信息联通的一体化信息管理系统,以保藏血液系统疾病骨髓活细胞为特色,建立规范化样本接收、处理、存储及使用流程,定期进行质控检测,完善共享机制及运营模式。结果 血液样本资源库已保藏血液系统活细胞等各类样本共计超40万份,实现全部临床诊疗科室与疾病类型的样本全覆盖,并建立疾病来源i PSC七百余株。随机抽取新鲜和冻存样本6例,质量检测全部合格,为所院高质量科研产出提供样本支持。结论 通过全流程管控实现血液病理活细胞及相关组分的规范化收集、制备、存储和使用,建成以整合生物样本、临床诊疗数据、生物信息学等生物医学信息与资源为一体的“干湿”结合升级版生物样本库。

再生障碍性贫血患者T细胞表面VLA-4和CX3CR1的表达

目的:探讨获得性再生障碍性贫血(AA)患者T细胞表面VLA-4、CX3CR1的表达在AA发病机制中的作用。方法:①流式细胞术分析46例AA患者(20例重型AA,26例非重型AA)骨髓和外周血中T淋巴细胞亚群的变化以及VLA-4、CX3CR1在T淋巴细胞亚群上的表达。②ELISA方法测定其骨髓和外周血浆中VCAM-1(VLA-4的配体)、Fractalkine(CX3CR1的配体)的含量。结果:①AA患者外周血中CD3+细胞比例基本正常(P>0.05),CD8+细胞比例明显上升,CD4+细胞比例明显下降(P<0.01);骨髓中CD3+、CD8+细胞比例均明显升高(P<0.01),CD4+细胞比例减低仅在重型AA患者中差异有统计学意义(P<0.05)。②AA患者骨髓和外周血T细胞亚群表面VLA-4的表达与对照组比较均差异无统计学意义(均P>0.05)。然而患者骨髓和外周血中CD3+/CX3CR1+细胞、CD3+/CD4+/CX3CR1+细胞以及CD3+/CD8+/CX3CR1+细胞比例均升高(P<0.05),尤其CD3+/CD8+/CX3CR1+细胞比例升高更为显著(P<0.01)。③AA患者骨髓和外周血浆中VCAM-1水平与对照组比较均无明显变化(P>0.05)。而Fractalkine水平在重型和非重型AA患者骨髓中以及重型AA患者外周血浆中均升高(P<0.05)。结论:获得性AA作为一种T细胞介导的免疫性疾病,存在T细胞亚群失衡。T细胞通过高表达CX3CR1,与Fractalkine相互作用,从外周血迁移到骨髓,并在骨髓中积聚导致造血干/祖细胞的破坏。

小鼠造血细胞移植后早期造血重建的动力学变化

目的:揭示移植后早期(4 w)供体来源的造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cell,HSPC)以及各类分化成熟血细胞的动态变化特点。方法:利用小鼠同种同基因造血干细胞移植模型分别移植供体(B6-Ly5.1)5×10~6全骨髓单个核细胞(wBMMNC)和富集的3×10~5c-Kit^+HSPC到致死剂量照射的同品系受体小鼠(B6-Ly 5.2),然后动态监测移植后早期(4 w内)受体内供体来源细胞的造血重建和谱系分化情况。结果:wBMMNC移植后1 w(5-7 d)供体来源细胞开始出现增殖,在移植后2-3 w达到增殖高峰;c-Kit^+HSPC移植后第1-2 w供体细胞即出现增殖高峰并一直维持到移植后4 w。wBMMNC移植后1 w,骨髓中供体来源细胞主要向髓系细胞分化,伴随有少量B细胞生成,而几乎没有T细胞的生成;在移植后2-4 w,供体来源细胞几乎全部分化为髓系细胞。c-Kit^+HSPC移植后1-3w供体来源细胞几乎全部分化为髓系细胞,移植后4 w时出现B细胞的重建。移植后1-2 w,c-Kit^+细胞移植组供体来源LKS^-和LKS^+细胞的绝对数显著高于wBMMNC移植组(P<0.001)。双光子显微镜观察受体小鼠颅骨发现,cKit^+细胞移植后4-5 d,10~5及10~6细胞移植组即可观察到簇状分布的供体来源细胞的增殖。结论:c-Kit^+细胞移植后供体来源HSPC(LKS^-和LKS^+)重建动力学速率显著快于wBMMNC移植组,c-Kit^+细胞移植后1-3 w主要向髓系细胞分化,4 w才开始出现部分淋系分化。c-Kit^+细胞移植后1 w之内供体来源HSPC迫于造血压力迅速增殖分化,从而维持机体对于应激造血的迫切需求。

血细胞活库支撑血细胞图谱计划和生态研究

生物样本活库相较于传统生物样本库,对“血液生态”具有更高的研究利用价值.通过对血细胞活库的规范化建设,我们构建了“数据+样本+X”的一体化管理模式,为血细胞图谱计划提供坚实的资源支撑.率先建立单细胞水平全套造血细胞分子指纹图谱,并成功创建了精细完整的血细胞单细胞数据共享平台.这些进展不仅为血液生理及相关疾病的研究提供了宝贵的研究资源和公共分析工具,而且为疾病的精准诊断和治疗提供新策略.

p18^(INK4C)缺失通过激活LMO2加快Notch-1诱导的急性T淋巴细胞白血病进展

p18^(INK4C)(CDKN2C)属于细胞周期蛋白激酶抑制剂家族成员,通过阻断细胞周期蛋白激酶4/6使细胞周期处于G1早期.研究提示,p18缺失影响T细胞的正常发育并可能参与急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)的发生,但p18缺失导致T-ALL发生和进展的机制并不清楚.本文利用Notch-1胞内段(ICN-1)过表达诱导的T-ALL模型来研究p18影响T-ALL的发生和进展的可能机制.结果发现,p18-/-骨髓细胞过表达ICN-1可诱发T-ALL,白血病细胞表型为更加原始的CD4/CD8双阴性细胞,且这些细胞主要阻滞在DN3阶段;T-ALL细胞连续移植结果显示,p18缺失能够显著加速T-ALL的进展,且p18-/-T-ALL细胞更多地处于细胞周期的G0期,即静息状态;基因表达结果发现,与T-ALL发生直接相关的原癌基因Lmo2及共结合分子如Sfpi1,Nfe2及Ldb1等以及N-myc的表达水平在p18-/-组显著高于对照组.以上结果提示,p18缺失后可能通过激活Lmo2及N-myc等的表达从而加速T-ALL的进展.本研究对p18缺失如何加速T-ALL的发展进行了阐释,对临床伴随有p18缺失或者LMO2异常激活型突变T-ALL病人的预后提供了理论依据,具有一定的临床指导价值.