低氧反应基因调控的研究进展

需氧生物对低氧的应激与适应主要通过有关低氧反应基因（ｈｙｐｏｘｉａｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｇｅｎｅｓ，ＨＲＧ）转录水平的调控来实现。低氧诱导因子１（ｈｙｐｏｘｉａｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ１，ＨＩＦ１）及其它元件可能参与低氧的感受及低氧信号的传导、以及对低氧的急、慢相反应。

低氧诱导法培养大鼠肺微血管内皮细胞

目的探讨大鼠肺微血管内皮细胞培养方法 ,并期望发展一种简便、实用的体外培养方法。方法用 7%O2 (4h/d ,3d)诱导培养猪肺动脉内皮细胞 ,然后收集该低氧诱导的培养基后加入大鼠肺边缘组织块 ,再培养微血管内皮细胞。结果加入低氧诱导培养基后 48h ,即有明显细胞增生 ;原代培养 1wk后 ,细胞呈典型的鹅卵石状连片生长 ,继续可以传代 3～ 4次。与对照方法相比 ,采用低氧诱导培养基法培养大鼠肺微血管内皮细胞 ,贴块后细胞增生反应较早出现、繁殖较快 ,细胞老化延迟 ,传代后细胞生长良好 ,3代以内细胞形态无明显退变。结论本文探讨的低氧诱导培养基方法 ,具有简便、实用的特点 ,可用于建立大鼠肺微血管内皮细胞的细胞模型 ,用于高原医学研究。

一氧化氮合酶基因缺陷动物模型的应用研究进展

一氧化氮合酶基因缺陷动物模型的应用研究进展马子敏何子安（军事医学科学院卫生学环境医学研究所，３０００５０天津）关键词一氧化氮一氮化氮合酶一氧化氮合酶（ＮＯＳ）广泛存在于机体。它主要有三个类型：神经型ＮＯＳ（ｎＮＯＳ）、内皮型ＮＯＳ（ｅＮＯＳ）、诱导型...

PC12细胞对急性缺氧耐受的体积调节

采用大鼠嗜铬细胞瘤克隆株PC12细胞研究了高渗(450mOsm)诱导对PC12细胞缺氧耐受的影响及其相关机制,在诱导培养3d后,PC12细胞的醛糖还原酶基因表达水平显著升高,急性缺氧24h后其乳酸脱氢酶(LDH)漏出率为(20.4±6.0)％,与正常对照组(17.5±7.0)％接近,而未诱导细胞的LDH漏出率为(49.6±13.8)％,经过诱导的PC12细胞其细胞体积的变化幅度相对较小,急性缺氧24h后,细胞体积增加为正常对照的3.6倍,而未诱导细胞的体积增大至正常对照的6.6倍,加入0.5mmol/L的奎尼丁阻断醛糖还原酶-山梨醇系统对效应分子山梨醇的释放后,急性缺氧24h其乳酸脱氢酶(LDH)漏出率达(83±2)％。以上结果提示高渗诱导后PC12细胞缺氧耐受能力提高,其保护作用可能与细胞体积调节机制有关,推测醛糖还原酶-山梨醇系统可能通过维持细胞体积的稳定,保护细胞结构的完整从而阻断了进一步细胞死亡发生的启动。

纤维粘连蛋白酶切片段的制备及其对大白鼠血浆中冷凝蛋白形成的抑制作用

冷凝蛋白（ｃｏｌｄｉｎｓｏｌｕｂｌｅｐｒｏｔｅｉｎ，ＣＩＰ）是机体血浆经低温致冷后形成的大分子冷不溶性蛋白，它在机体组织冷损伤起着一定的作用。ＣＩＰ的形成与纤维粘连蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，Ｆｎ）有关。本文观察到猪血浆Ｆｎ的胰蛋白酶酶切片段混合物（Ｆｎｆｒａｇｍｅｎｔｓ，Ｆｎｆ）在５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ浓度时，能明显抑制新鲜大白鼠血浆中ＣＩＰ的形成，血浆中ＣＩＰ的形成量（７９±４６μｇ／ｍｌ）仅为对照血浆组（７８１±２６０μｇ／ｍｌ）的１０％，推测Ｆｎ分子上可能有相应的结构参与了ＣＩＰ的形成。

腺苷对体外培养的海马缺糖缺氧神经元的保护作用

目的 :观察缺糖缺氧对大鼠海马培养神经元的影响及腺苷的保护作用。方法 :取培养 12d的海马神经元 ,分为对照组和腺苷组 ,同时于缺糖缺氧环境中培养 0 .5 - 4h后取出 ,立即更换原神经元培养液在常氧下继续培养 2 4h。于不同时间取出 ,收集培养液 ,测定培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)含量 ,用图像分析仪测定神经元胞体面积 ,并用 4 %台盼蓝染色 ,计算神经元存活百分率。同时用原位末端标记 (TUNEL)法检测神经元凋亡。结果 :缺糖缺氧后海马神经元胞体肿胀 ,体积变大 ,LDH渗出含量增多 ,神经元存活率减少。恢复糖和氧供应后 2 4h ,海马神经元LDH渗出含量进一步增多 ,细胞存活率进一步减少 ,凋亡神经元百分率明显增多。经腺苷预处理的海马神经元缺糖缺氧后 ,神经元LDH渗出明显少于对照组 ,神经元胞体面积增大程度轻于对照组 ,神经元存活率明显高于对照组。缺糖缺氧 0 .5 - 3h再恢复氧和糖供应后 2 4h ,腺苷组凋亡神经元百分率亦明显低于对照组。结论 :缺糖缺氧可引起海马神经元严重损伤 ,神经元损伤程度与神经元存活率、LDH渗出含量的改变呈对应变化。腺苷能减少缺糖缺氧后神经元的损伤 ,减少缺糖缺氧后神经元凋亡 ,提示腺苷对缺糖缺氧海马神经元具有一定的保护作用。

低氧损伤与离子通道

急性低氧暴露损伤后,细胞通常大部分直接发生裂解、坏死,一部分走上凋亡之路.在慢性、中等程度的低氧暴露损伤条件下,细胞的凋亡发生居多.在低氧性细胞凋亡发生之前,常会有一些种类的K+通道开放,发生K+的外漏,造成细胞体积减小,伴随一系列的细胞凋亡性生化、生理事件,细胞进入不可逆的固缩凋亡.这些是对细胞低氧性死亡广为接受的认识.其中相对凋亡而言,急性低氧下的细胞坏死,被认为是一种非特异的细胞裂解,是一类不可控制的事故性细胞死亡(accidental death).但是目前的一些工作表明,在细胞发生坏死之前,会有细胞的反应性体积增大(RVI)的事件发生,如果及时干预RVI的过程,则随后的细胞低氧性坏死也得到控制.认为RVI的发生可能与一类细胞体积调节有关的K+通道的调控有关,而有其它作者认为也可能与Na+或一类非特异的阳离子通道(NSCCs)的开放有关.逐渐积累的一些工作认为,细胞的坏死发生、发展可能与细胞建立适应能力有关,也可能是一种生理性细胞死亡.……

氯化钴预处理减轻缺氧复氧后大鼠海马神经元的凋亡

目的 研究氯化钴 (CoCl2 )预处理对大鼠海马神经元缺氧 复氧后凋亡的影响及其机制。 方法 用CoCl2 处理原代培养大鼠海马神经元 ,并使其暴露于无氧环境。用TUNEL染色法和激光共聚焦显微镜分别检测缺氧后细胞凋亡率以及细胞线粒体膜电位和胞内游离钙。 结果 CoCl2 预处理明显减少海马神经元在缺氧 复氧后的凋亡数 ,并对急性缺氧期间海马神经元的细胞内Ca2 +浓度和线粒体膜电位具有稳定作用。 结论 CoCl2 预处理对急性缺氧引起的海马神经元凋亡可能具有保护作用 ,其机制可能与其稳定缺氧时细胞内Ca2 +浓度和线粒体膜电位有关。

小鼠胚胎整体原位杂交实用技术的建立

目的 优化小鼠胚胎整体原位杂交及数据分析方法。 方法 小鼠胚胎用 4 %多聚甲醛 4℃固定过夜 ,10mg L蛋白酶K(PK)室温消化 30min ,预杂交 2h后 ,加入探针 6 3℃反应 16～ 18h ,用盐溶液高温洗涤多次 ,RNA酶 37℃消化 1h ,封闭 4h后加入地高辛抗体 4℃过夜。抗体反应后反复洗涤并在水平摇床上振摇 ,NBT和BCIP显色系统避光显色。提取图像灰度值 ,扣除背景、对照等假阳性信号。 结果 KIAA170 8探针在脑、脊髓等 8个区域有杂交信号 ,对图像数据分析结果表明 ,只有 1个区域的信号在 95 %可信限范围内 ,为阳性信号。 结论 通过控制蛋白酶K消化时间、探针和地高辛抗体浓度 ,以及洗涤、显色过程 ,得到了低本底、着色清晰的杂交结果 ,结合图像的数据分析步骤 ,消除假阳性结果。建立了一套实用的小鼠胚胎整体原位杂交方法。

大鼠海马神经元体外缺糖缺氧模型的建立

目的 :建立体外培养大鼠海马神经元缺糖缺氧模型。方法 :取培养 12d的海马神经元 ,在缺糖缺氧条件下分别培养 0 .5～ 4h后取出 ,换原神经元培养液 ,在常氧下继续培养 2 4h后测定培养液中乳酸脱氢酶活性。测定神经元形态变化 ,并计算神经元存活百分率。同时用原位末端标记 (TUNEL)法检测神经元凋亡。结果 :缺糖缺氧后海马神经元胞体逐渐肿胀 ,培养液中LDH释放量逐渐增多 ,细胞存活率逐渐减少。恢复糖和氧供应后 2 4h ,凋亡神经元百分率明显增多。结论 :用改进的无血清、无糖人工脑脊液成功建立了大鼠海马神经元离体缺糖缺氧模型。

P19细胞向神经元诱导分化的实验研究

目的 探讨P19细胞向神经元定向分化发育的可能性。 方法 经维甲酸 (RA)诱导 4d的P19细胞按神经细胞培养方法培养 12d ,分别用NSE、MAP 2和TH进行免疫组织化学染色 ,用AchE进行组织化学染色 ,鉴定分化细胞的特征。 结果 经RA诱导的P19细胞培养 12d ,大多数细胞转变为类似于神经元的形态 ,长出突起并相互联络成网。经NSE免疫组织化学显示 ,12d培养物中神经元约占 89%。P19诱导的神经元培养 12d ,神经元突起经MAP 2染色呈阳性反应。TH免疫组织化学显示 ,神经元中TH染色阳性神经元约占 0 8%。组织化学显示 ,神经元中AchE染色阳性神经元约占 71 0 9%。

复方党参对高原低氧大鼠脑细胞凋亡相关基因表达谱影响的分析

目的 研究复方党参对模拟高原低氧条件下大鼠脑神经细胞凋亡基因表达谱的作用 ,从中药与生物体基因网络相互作用的角度 ,探讨复方党参的作用机制。方法 将Wistar大鼠置于模拟海拔 70 0 0m的低压氧舱建立高原低氧大鼠脑细胞凋亡模型 ,于上舱前 7d开始以复方党参液灌胃给药。提取空白对照组、低氧 8d对照组、常氧复方党参组及低氧 8d复方党参组大鼠脑组织总RNA ,经逆转录合成cDNA探针 ,用 [α 3 2 P]标记探针 ,各自与AtlascDNAArray膜杂交 ,经严格的冲洗后用磷屏检cDNA表达水平。获得的基因表达谱数据集采用自组图 (SOMs)法分析。结果 结果表明在模拟高原低氧条件下 ,导致神经细胞凋亡的基因 (p5 3、bax、bad、bok、Hsp6 0 )聚为一类 (即表达行为相似 )。而具有抗凋亡功能的基因 (bcl 2、bcl xl、Hsp70、Hsp2 7、Hsp90、Hsc70、Rad)聚为一类。 结论 低氧可以启动细胞凋亡的线粒体途径 ,导致细胞死亡 ;而复方党参以凋亡相关基因网络中的多种成分为靶点 。

合理补充水盐预防热损伤的效果观察

１９９５年８月对某部进行了热环境下不同劳动强度时补充水盐的现场调查。结果表明，当在３５．２℃热环境下从事重体力劳动时，战士平均口温为３７．４０±０．２０℃，达到了生理安全上限；而在２９．９℃热环境下，无论轻、中、重度劳动时平均口温均在生理安全范围之内。热环境下轻、中度劳动日战士膳食钾、钠摄入量已达到军标值，但在重劳动日尚嫌不足。提示军人在热环境下重体力劳动时，要注意水盐补给，劳逸结合，以防中暑的发生。

冷暴露大白鼠血浆中冷凝蛋白的含量测定及其分离鉴定

本文测定了冷暴露条件下离体的、在体的和局部冻伤的大白鼠血浆中冷凝蛋白（ＣＩＰ）的含量，结果表明低温和局部冻伤均可促使血浆中ＣＩＰ含量显著升高（与常温对照组比，Ｐ＜０．０１）。实验结果提示ＣＩＰ为一种冷致性水不溶的大分子蛋白质，可能是一类与纤维粘连蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）有关的蛋白。推想血浆中ＣＩＰ过量形成可能是导致冻伤组织血液循环障碍，形成微血栓的原因之一。

大脑中动脉缺血对脑表面血管密度的影响

目的研究大脑中动脉缺血性损伤对脑表面血管密度变化的影响。方法雄性Wistar大鼠 41只 ,随机分为空白对照组 (n =3)、假手术组 (n =3)、缺血损伤再灌注组 (n=35)。采用线栓模型造成右大脑中动脉血供阻断 2h ,缺血损伤再灌注组的再灌注时间点为 1d、2d、3d、7d和 1 4d。测定局部脑血流量 ,观察大脑表面的血管形态 ,测定右大脑半球单位面积的血管数目和总长度。结果随再灌注时间延长 ,右侧半球的血管数目、长度显著增加。

缺糖缺氧对体外培养海马神经元的影响

目的 :观察缺糖缺氧诱导的培养海马神经元损伤。方法 :取培养 12d的海马神经元 ,在缺糖缺氧条件下分别培养 0 .5～ 4h后取出 ,换原神经元培养液在常氧条件下继续培养 2 4h。用 0 .4%台盼蓝染色 ,检测神经元坏死 ,并用TUNEL法检测神经元凋亡 ,计算存活、坏死和凋亡神经元所占百分率。同时用图像分析仪测定存活、坏死和凋亡神经元的胞体面积、周长和等园直径。结果 :培养的海马神经元急性缺糖缺氧后 0 .5～ 4h ,随缺糖缺氧时间的延长 ,坏死神经元逐渐增多 ,缺糖缺氧后 0 .5～ 2h再恢复糖和氧供应后 2 4h ,凋亡神经元明显增多。图像分析的结果表明 ,坏死神经元的胞体面积、周长和等园直径均明显大于凋亡神经元。结论 :缺糖缺氧可引起海马神经元严重损伤 ,在急性缺糖缺氧后 0 .5～ 4h引起的神经元死亡以坏死为多见 ,但在缺糖缺氧后 0 .5～ 2h再恢复糖和氧供应后2 4。

低氧对大鼠脑、肺组织NO、NOS变化的影响

目的：探讨低氧时一氧化氮（ＮＯ）、一氧化氮合酶（ＮＯＳ）变化及发生变化的机理。方法：大鼠分为常氧对照组、间断低氧习服组和急性低氧组。分别测定脑、肺组织 ＮＯ、ＮＯＳ及 ＮＯＳ催化反应平衡常数（Ｋｅｑ）。结果：与常氧对照组比较．低氧大鼠（急性低氧组，低氧习服组）脑、肺组织ＮＯ水平明显下降（Ｐ＜０．０１）；急性低氧组ＮＯＳ活力明显下降（Ｐ＜０．０１），而间断低氧习服组ＮＯＳ活力下降不明显（Ｐ＞０．０５）。急性低氧组与低氧习服组比较，前者ＮＯＳ活力明显低于后者（Ｐ＜０．０１）。低氧时ＮＯＳ催化反应平衡常数出现左移。结论：低氧时ＮＯ水平及ＮＯＳ活力下降，经低氧习服后，ＮＯ水平及ＮＯＳ活力明显改善；ＮＯＳ催化反应平衡常数发生变化是ＮＯ水平及ＮＯＳ活力下降的原因之一。

增值税领域“减税降费”成效及制约因素分析——以临夏州为例

文章介绍了增值税的改革政策,从税率下调、小微企业普惠性减税、税收体制改革三个方面分析了减税对临夏州经济的影响,指出地方财力现状制约减税政策有效落实、抵扣链条不完整制约减税效应的有效发挥、政策传导不畅制约纳税人主动减税的动力等问题。提出了发展特色优势产业、畅通政策传导机制、改进税收分配制度等政策建议。

缺氧/复氧对培养的大鼠海马神经元Fos、Jun表达和神经元凋亡的影响

目的 :观察缺氧 /复氧对体外培养的海马神经元Fos和Jun表达和神经元凋亡的影响。方法 :取培养 12d的海马神经元 ,置于 2 0 0 0cm3 的恒温 (36℃ )密闭容器内 ,连续充以无氧气体 (90 %N2 、10 %CO2 ) ,在缺氧条件下继续培养 2、4h后取出 ,置含 10 %CO2 和空气的培养箱内复氧培养 2 4h和 72h。于不同时间取出 ,观察神经元存活数 ,分别用抗Fos和抗Jun抗血清进行免疫组织化学染色 ,计数Fos和Jun表达阳性神经元百分率 ,并用原位末端标记 (TUNEL)法和流式细胞术分别观察和测定缺氧 /复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响。结果 :缺氧 /复氧后Fos和Jun表达阳性神经元百分率和凋亡神经元百分率均显著增加。结论 :缺氧 /复氧后即早反应基因fos在神经元中的持续表达可引起神经元凋亡 。