苦参碱对四氯化碳所致小鼠慢性肝纤维化肝组织一氧化氮合酶表达的干预及意义

目的:研究苦参碱对四氯化碳(CCl_4)所致的小鼠慢性肝纤维化肝组织诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达的干预及意义.方法:将健康昆明小鼠50只,随机分为4组:CCl_4组(A组,n=15)、CCl_4+苦参碱治疗组(B组,n=15)、生理盐水对照组(C组,n=10)、苦参碱对照组(D组,n=10).各组分别于造模4 wk、8wk后取材,常规HE染色法观察比较不同组别小鼠肝组织病理变化,免疫组化方法检测各组肝组织内iNOS的表达.结果:A组小鼠4wk肝组织出现脂肪变,随CCl_4给药时间延长,肝组织损伤加重,第8周出现空泡样变及点状坏死,多见于门管区,小叶结构紊乱.B组各时间点肝组织结构较A组有明显改善,肝细胞坏死和脂肪变性程度显著减轻.C组、D组肝小叶结构完整,肝细胞结构清晰.免疫组化结果显示,A组、B组各时间点受损肝细胞均有iNOS表达,A组与B组iNOS表达分值相比差异有显著性(2.20±0.12 vs 1.20±0.02,P<0.01;1.2±0.06 vs 0.60±0.02,P<0.01).C组、D组肝细胞iNOS表达阴性.结论:iNOS参与CCl_4诱导的小鼠肝慢性纤维化损伤.苦参碱可通过干预受损肝细胞iNOS表达,有效降低CCl_4所致肝脏损伤.

“一核多维、数元融动”的基础医学教学模式探索与实践

为全面提升人才培养质量,落实“以人为本”教育理念,构建“一核多维、数元融动”的基础医学教学模式,开启“厚德为先、能力为重、课程为基、素质为本”的教学探索之路。通过近10年的探索与实践,全院教师已将育人目标落实到教学全过程,教学相长取得一定成效。

传统及改良冻存法对人胎肝细胞保护效果的比较

目的:比较传统及改良冻存法对人胎肝细胞保护效果,建立一种适合于人胎肝细胞冷冻保存的方法。方法:实验于2006-07/11在广州医学院进行。①人胎肝组织取自中期终止妊娠胎儿(20周,经胎儿亲属知情同意及医院伦理委员会批准)。冷冻保护液包括A液(DMEM培养液含1.5mol/L乙二醇+体积分数为0.2胎牛血清);B液(A液+0.1mol/L蔗糖)两部分。②传统冻存法:用0.025%Ⅰ型胶原酶消化胎肝组织,分离、收集消化后的胎肝细胞。胎肝细胞在A液、B液中分别渗透平衡20min后,在冷冻保护B液中经液氮蒸汽冷平衡5min后迅速入液氮冻存,1周后复苏培养观察。③改良冻存法:胎肝组织在A液、B液中分别渗透平衡20min后,在冷冻保护液B液中经液氮蒸汽冷平衡5min后迅速入液氮冻存,1周后复苏,入DMEM培养液37℃孵育1h,胶原酶消化胎肝组织,分离、收集消化后的胎肝细胞培养观察。④新鲜分离的胎肝细胞做为对照组。⑤复苏后分离所得胎肝细胞用锥虫兰染色评估细胞活率,并记录贴壁时间,观察集落生长情况。结果:①锥虫兰染色结果显示传统冻存法复温后的胎肝细胞活率为(73.8±2.2)%,明显低于新鲜分离的胎肝细胞活率(89.2±3.6)%及改良冻存法所得胎肝细胞活率(82.5±4.2)%(P<0.01)。②贴壁情况观察发现新鲜胎肝细胞与改良冻存法胎肝细胞于培养24h开始贴壁,而传统冻存法胎肝细胞贴壁时间滞后48h。③新鲜胎肝细胞及改良冻存法胎肝细胞于第3天出现生长集落(细胞数>10为一个集落),传统冻存法胎肝细胞在第5天出现生长集落,集落的数量低于改良冻存法及对照组(P<0.01)。结论:改良冻存法可避免冻存前损伤,提高细胞对冷冻的耐受性和冻存复温后细胞的活率。

霍乱毒素对远端视神经损伤后视网膜节细胞再生的影响

目的 探讨霍乱毒素 (CTx)对成年金黄地鼠远端视神经受损后视网膜节细胞 (RGCs)再生的作用。方法 远端切断视神经并对接一段自体坐骨神经 (AG) ,玻璃体内注射CTx及 或植入小段坐骨神经分支 (SN)。动物随机分为对照组Ⅰ (AG组 )与对照组Ⅱ (溶剂组 ) ;AG +SN组 ;AG +CTx组 ;AG +SN +CTx组和量效关系组 ,前五组分别存活 4周～ 6周 ,用粒蓝逆行标记再生的RGCs ,荧光显微镜下观察。 结果 AG +CTx组各时间点再生的视网膜节细胞比对照组Ⅰ与对照组Ⅱ明显增加 ,具统计学意义 (P <0 0 5 ) ;AG +SN组得出相似结果。AG +SN +CTx组与其它几组相比在各时间点上均存在极显著性差异 (P <0 0 1)。 结论 霍乱毒素可明显提高远端视神经受损后视网膜节细胞的再生。

c-fos基因在大鼠缺血视网膜内的表达

实验用 FOS免疫组化方法 (ABC法 )研究了缺血诱导的大鼠视网膜内 c- fos原癌基因的表达情况。实验动物用升高眼压的方法做成视网膜缺血模型 ,依缺血后存活时间不同分 1 5′、 30′、 1 h、 2 h、 4h、 6 h、 1 2 h七个组 ,每只大鼠右眼为缺血眼 ,左眼做自身对照眼 ,另设正常对照组。动物腹腔麻醉 ,4%多聚甲醛灌注固定 ,取双眼做冰冻切片 ,片厚 1 5μm。实验结果显示缺血后 1 5′组大鼠视网膜内核层最先出现少量卵圆型浅棕色的 FOS阳性神经元胞核 ,30分钟至 1 h FOS表达逐渐增强 ,节细胞层也出现 FOS阳性胞核。缺血后 2 h FOS表达达最高峰 ,缺血后 4h FOS阳性胞核逐渐减少 ,1 2 h达正常组水平。自身对照眼及正常对照眼视网膜节细胞层偶见

H89和wortmannin对霍乱毒素促进远端视神经损伤后视网膜节细胞再生的影响

目的:探讨H89和wortamnnin对霍乱毒素(CTx)促进成年金黄地鼠远端视神经受损后视网膜节细胞(RGCs)再生的影响。方法:远端切断视神经并对接一段自体坐骨神经(AG),玻璃体内注射CTx及H89、wortman—nin。动物随机分为AG组;AG+CTx组;AG+CTx+H89组;AG十CTx+wortmannin组,4 w后粒蓝逆行标记再生的RGCs,荧光显微镜下观察计数。结果:AG十CTx组再生的视网膜节细胞平均数(43.2)明显高出AG组(2.6),AG+CTx+H89组平均再生数为3.2,与AG组相近,明显低于AG+CTx组。AG+CTx+W组平均再生数为9.6,明显高于AG组,低于AG+CTx组。结论:H89和wortmannin可部分抑制CTx对视神经远端切断后视网膜节细胞再生的促进作用。

大鼠视网膜缺血后Parvalbumin免疫反应神经元的变化

本文观察了大鼠视网膜缺血后Parvalbumin（PV）免疫反应神经元的变化。动物分为缺血10min组、15min组、30min组及60min组等4组．动物右眼为缺血眼，左眼做自身对照眼．结果表明PV免疫反应神经元主要位于内核层及节细胞层，其突起伸向内网层第1、5亚层，神经纤维层也可见PV免疫反应纤维。缺血10min后PV免疫反应神经元未出现变化，缺血15min后数量开始减少，内网层第5亚层PV免疫反应纤维消失、缺血30min、60min后PV免疫反应神经元比缺血15min后减少明显．表明缺血15min后即出现PV免疫反应神经元的变化，但各缺血时间点上其减少率低于其它类型的神经元，提示它对缺血有一定的耐受性。

霍乱毒素对受损视网膜环磷酸腺苷和节细胞存活及凋亡的影响

目的 研究霍乱毒素 (CTx)对视网膜cAMP水平及视网膜节细胞存活及凋亡的影响。 方法 视神经远端 (颅内 )切断 ,玻璃体内注射CTx,采用荧光逆行示踪技术及原位末端标记 (TUNEL)技术显示存活的视网膜节细胞及节细胞层凋亡的细胞 ,Brown放射免疫法测定各时间点视网膜cAMP的水平。 结果 远端切断视神经后各时间点cAMP水平均低于玻璃体内注射霍乱毒素组。视神经远端切断后视网膜节细胞平均密度明显下降 ,玻璃体内注射霍乱毒素后 ,节细胞平均密度明显提高 ,细胞凋亡数也明显少于单纯视神经切断组。 结论 表明霍乱毒素可提高成年金黄地鼠视网膜cAMP水平并具有促受损视网膜节细胞存活及抗凋亡作用。

霍乱毒素对视神经远端切断后视网膜节细胞存活的影响

本研究采用荧光逆行示踪技术观察了玻璃体内注射霍乱毒素对视神经远端切断后的视网膜节细胞存活的影响。结果显示 ,正常视网膜节细胞平均密度为 2 192± 66个 / mm2 ;视神经切断 7d、14 d、2 1d后视网膜节细胞平均密度分别为 15 2 0± 116个 /mm2、73 6± 3 9个 / mm2、466± 5 3个 / mm2 ;玻璃体内注射 Na2 EDTA/ Na Cl对照组在各时间点其视网膜节细胞平均密度与视神经切断组结果相似。玻璃体内注射霍乱毒素后 7d、14 d、2 1d视网膜节细胞平均密度均有提高 ,分别为 164 2± 12 2个 / mm2、10 91±10 7个 / mm2 、64 8± 3 5个 / mm2 ,与视神经切断组及 Na2 EDTA/ Na Cl对照组相比 ,在各时间点上均有显著性差异 (P<0 .0 1)。

CTx促进远端视神经切断后视网膜节细胞轴突再生与c-Jun表达的关系

目的探讨霍乱毒素(CTx)促进成年金黄地鼠视神经远端切断后视网膜节细胞(RGCs)轴突再生与c-Jun的表达关系。方法远端切断视神经并对接一段自体坐骨神经,玻璃体内注射CTx及/或植入小段坐骨神经分支(SN)。动物随机分为AG+CTx组;AG+SN组;AG+SN+CTx组,各组动物分别存活4W,用荧光金(FG)逆行标记和c-Jun免疫荧光组织化学双标法观察轴突再生的RGCs内c-Jun表达情况。结果再生RGCs内有c-Jun蛋白表达,玻璃体内给予CTx或植入SN组RGCs表达c-Jun的再生RGCs分别为35·8±9·57和32·2±7·25个,约占其再生总数的94%及90%,两组相比无显著性差异(P>0·05);CTx与SN联用组c-Jun阳性再生的RGCs为150·2±43·92个,占再生总数的97%,与前两组相比,均有显著性差异(P<0·05)。结论视神经远端切断后约90%以上的再生RGCs有c-Jun表达,提示c-Jun表达与视神经远端受损后节细胞轴突再生密切相关,CTx及外周神经对RGCs轴突再生及c-Jun表达有协同促进作用。

视神经远端切断后再生视网膜节细胞Bcl-2的表达

目的 成年金黄地鼠视神经远端切断后再生视网膜节细胞 (RGCs)Bcl 2的表达与再生的关系。方法 远端切断视神经并对接一段自体坐骨神经 ,玻璃体内注射CTx及 /或植入小段坐骨神经分支 (SN)。动物随机分为AG +CTx组 ;AG +SN组 ;AG +SN +CTx组 ,各组动物分别存活 4W ,用粒蓝 (GB)逆行标记和Bcl 2免疫荧光组织化学双标法观察再生的RGCs和Bcl 2表达。结果 再生RGCs胞质内有Bcl 2蛋白表达 ,玻璃体内给予CTx或植入SN组表达Bcl 2的再生RGCs分别为 32 2± 4 71和 2 9 4± 3 75个 ,约占其再生总数的 82 5 0 %及 80 96 % ,两组相比无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;CTx与SN联用组Bcl 2阳性再生的RGCs为 15 1 8± 35 6 9个 ,占再生总数的 91 2 2 % ,与前两组相比 ,均有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论 视神经远端切断后约 80 %的再生RGCs有Bcl 2表达 ,提示Bcl 2表达可能与节细胞再生有密切关系。

大鼠视网膜缺血后一氧化氮合酶阳性神经元的变化

本文用前房加压灌注视网膜缺血模型、β－ＮＡＤＰＨ脱氢酶组化方法研究了ＳＤ大鼠视网膜内含一氧化氮合酶（ＮＯＳ）神经元的分布及其变化。实验动物依缺血时间分四组，分别为缺血１０ｍｉｎ、１５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ及６０ｍｉｎ组。将ＮＯＳ阳性细胞进行计数统计，做自身配对ｔ检验及方差分析。实验结果表明正常及缺血视网膜ＮＯＳ阳性神经元。大多数位于内核层，少数位于节细胞层；ＮＯＳ阳性细胞在视网膜中央区密度高于周边区，而各象限的平均密度分布无明显差别。缺血１５ｍｉｎ后内核层的ＮＯＳ阳性细胞开始减少，随缺血时间的延长细胞减少更为明显。各组均以视网膜中央区变化较为显著，提示视网膜缺血１５ｍｉｎ后即可出现神经生物学变化，视网膜中央区对缺血比周围区更为敏感。

蛋白激酶A抑制剂H-89及PI3-羟基激酶抑制剂对促进远端视神经损伤后视网膜神经节细胞轴突再生的影响(英文)

背景:近年的研究显示中枢神经受损后在适宜的条件下如提高神经元内cAMP水平受损神经元的突起可以再生,但其确切的机制仍不清楚。目的:探讨蛋白激酶A抑制剂H-89及PI3-羟基激酶抑制剂wortman-nin对霍乱毒素促进成年金黄地鼠远端视神经受损后视网膜神经节细胞再生的影响。设计:随机对照动物实验。单位:广州医学院组胚教研室和中山医科大学组胚教研室。材料:实验于2000-01/2001-12在广州医学院和中山医科大学完成。实验动物选择健康成年雄性金黄地鼠25只。随机分为5组,手术模型组;实验对照组;霍乱毒素组;霍乱毒素+蛋白激酶A抑制剂组;霍乱毒素+PI3-羟基激酶抑制剂组,每组5只。方法:取自体坐骨神经2cm,剥去近端的神经外膜,接于视神经断端(近侧端),明胶海绵封闭窗口,坐骨神经另一端置颅骨外缝合固定于颅顶肌肉上。手术模型组视神经近侧残端对接一段自体坐骨神经。实验对照组在对照组基础上玻璃体内注射霍乱毒素溶剂Na2EDTA/NaCl;霍乱毒素组:对照组基础上玻璃体内注射霍乱毒素(1000pg/眼);霍乱毒素+蛋白激酶A抑制剂组:手术前30min玻璃体内注射3μL蛋白激酶A抑制剂H-89(60μmol/L),其余同霍乱毒素组;霍乱毒素+PI3-羟基激酶抑制剂组手术前30min玻璃体内注射3μLPI3-羟基激酶抑制剂wortmannin(1μmol/L),其余同霍乱毒素组。各组动物术后存活4周。术后每隔5天重复给药,蛋白激酶A抑制剂H89及PI3-羟基激酶抑制剂wortmannin与霍乱毒素CTx之间相隔30min注射,共4次。于取材前3d,将沾有30g/L粒蓝的明胶海绵放置在视神经断端,逆行标记再生的视网膜神经节细胞。荧光显微镜下观察,记录视网膜有轴突再生的视网膜神经节细胞数。主要观察指标:各组视网膜有轴突再生的视网膜神经节细胞数。结果:手术模型组及实验对照组有极少数视网膜神经节细胞再生(2.6±0.87,2.4±0.95),霍乱毒素组明显高出对照组和实验对照组[(43.2±1.36),q=73.294及73.655,P<0.001)。霍乱毒素+蛋白激酶A抑制剂H-89组平均再生数与手术模型组及实验对照组比较无明显差别[(3.2±0.16),q=1.083及1.444,P>0.05];显著低于霍乱毒素组,差异有显著性(q=72.211,P<0.001)。霍乱毒素+PI3-羟基激酶抑制剂组视网膜神经节细胞平均再生数(9.6±1.85)均高于手术模型组及实验对照组(q=12.637及12.998,P<0.05);明显低于霍乱毒素组(q=60.657,P<0.001)。结论:蛋白激酶A抑制剂H-89和PI3-羟基激酶抑制剂wortmannin可抑制霍乱毒素对视神经远端切断后视网膜神经节细胞轴突再生的促进作用。

视网膜血供与缺血的实验研究现状

视网膜缺血是引起视觉丧失最常见的一种病理生理过程，其病因复杂，发病人数多，临床上尚无有效的治疗手段。本文对其动物实验研究包括视网膜缺血膜型，缺血耐受时间、缺血后视网膜组织病理学改变、缺血后视功能检测及其治疗等方面进行综述．以期对视网腹缺血有一全面的认识，为进一步研究视网膜缺血提供信息。

霍乱毒素及外周神经对视神经远端切断后视网膜谷氨酸能节细胞再生的作用

目的 :探讨霍乱毒素 (CTx)及外周神经对成年金黄地鼠远端视神经受损后视网膜谷氨酸 (Glu)能节细胞(RGCs)再生的作用。方法 :远端切断视神经并缝接自体坐骨神经 (AG) ,玻璃体内注射CTx及 /或植入小段坐骨神经分支 (SN)。动物分为AG +CTx组 ;AG +SN组 ;AG +SN +CTx组 ,分别存活 4W、5W ,荧光金和免疫荧光组织化学双标法标记再生的RGCs。结果 :术后 5W ,AG +CTx组 ;AG +SN组 ;AG +SN +CTx组Glu免疫反应阳性RGCs再生数分别占再生总数的 4.2 5 %、2 .5 0 %及 6.0 0 % ,AG +SN组与AG +SN +CTx组间差异显著。结论 :CTx与SN能协同促进视神经远端切断后Glu能节细胞的再生 .

狗视网膜内一氧化氮合酶的表达

目的:探索狗视网膜内NOS阳性细胞的分布和类型。方法:应用NADPH-黄递酶组化方法。结果:视网膜内含两种NOS阳性细胞,一种胞体较大,圆形或三角形,着色深,直径为12～15μm,大部分位于节细胞层,由胞体发出2～3支突起伸向内网层;另一种胞体较小,圆形或卵圆形,着色浅,直径为6～8μm,胞突短,伸向内网层,胞体主要位于内核层近内网层处,少数位于内核层中部。两种NOS阳性细胞分布和反应强度均不同。结论:大NOS阳性细胞可能为节细胞,小NOS阳性细胞可能为无长突细胞、网间细胞或双极细胞。

NADPH黄递酶阳性神经元在出生后大鼠视网膜内的发育

本实验用NADPH黄递酶（NDP）组化方法观察了不同年龄的SD大鼠视网膜内NDP阳性神经元的发育情况。研究结果显示NDP神经元最早出现于P5（出生后第5天），数量较少，着色浅，随着年龄增长，NDP神经元数量明显增加，胞体位于内核层，突起伸向内网层，至P13～P15时，NDP神经元数量及突起分枝均达峰值，P23时NDP神经元密度下降，以周边视网膜较为明显，神经元突起分枝减少，突起主干可见串珠样膨大。视网膜内NDP神经元的密度及突起分枝的变化，提示NDP可能在视网膜内网层的突触形成过程中有一定作用。

Bcl-2在视网膜内的表达及意义

原癌基因Ｂｃｌ－２的表达产物Ｂｃｌ－２蛋白与细胞凋亡密切相关，其分布广泛。近年来研究证明发育及成年时期中枢神经系统Ｂｃｌ－２表达及分布不同。正常视网膜内Ｂｃｌ－２仅见于Ｍüｌｌｅｒ细胞突起内，当视网膜受损后Ｂｃｌ－２的表达增强，但不同类型的损伤诱导不同的细胞表达Ｂｃｌ－２。切断视神经后表达Ｂｃｌ－２的细胞为Ｍüｌｌｅｒ细胞，而视网膜缺血诱导节细胞、移位与无长突细胞表达Ｂｃｌ-２。正常及病理状态下视网膜内Ｂｃｌ－２的表达情况提示Ｂｃｌ－２不仅与视网膜神经元的分化发育、正常功能及自动平衡的维持有关，而且与视网膜神经元突起的生长及延缓受损细胞的死亡有关。

组织学教学中多种媒体的优化组合

科学技术的飞速发展有力地促进了教育的进步和发展。日趋多样化的教学媒体在教学中应用越来越广泛,促使教师不断更新教学方法,重新设计教学和组织教学过程,从而提高教学总体效果。教学媒体是教学过程中用以显示教学信息的手段或载体,如传统的教学媒体有黑板、图片、模型;现代教学媒体有投影、幻灯、电视录像、计算机等。不同的媒体其功能、对象、条件、效果各不相同,巧妙组合和利用各种媒体进行教学可达到扬长避短、优化教学效果的目的。