IL-12以及IL-12P40对子宫内异症患者NK细胞功能的免疫调节

目的 :通过观察正常人及子宫内膜异位症 (EM)患者外周血及腹腔液中IL 1 2、IL 1 2P40含量变化 ,分析其分子诱导NK细胞对子宫内膜细胞的细胞毒效应的影响 ,探讨IL 1 2、IL 1 2P40分子与EM患者NK细胞功能低下的相关性。方法 :ELISA酶联免疫检测IL 1 2、IL 1 2P40含量以及MTT释放法检测NK细胞毒活性。结果 :①EM患者腹腔上清液可使正常人外周血NK细胞杀伤活性 ( 1 6 80 %± 3 6 % )明显下降 ( 8 37%± 4 5% ) (P <0 0 5)。②EM患者IL 1 2含量血清为 6 6 38± 1 2 6pg ml,低于对照组 84 97± 1 3 7pg ml( P <0 0 5) ;腹腔液中为 77 76± 1 4 6pg ml ,低于对照组 1 0 6 92± 1 0 7pg ml( P <0 0 5)。③EM患者IL 1 2P40含量血清为 35 6 4± 1 0 6pg ml,与对照组无明显差异 ;腹腔液含量为 79 76± 1 2 6pg ml ,高于对照组 40 54±1 0 0pg ml(P <0 0 5) ,并与疾病的程度呈负相关。④IL 1 2能增强NK细胞对子宫内膜细胞的杀伤 ,并呈剂量依赖。在 1 0ng ml浓度诱导后杀伤率为 31 90 % ,高于对照组的 1 6 80 %。⑤IL 1 2P40能拮抗IL 1 2对NK细胞活性的诱导 ,当加入IL 1 2P40后 ,使IL 1 2诱导的活性 ( 2 9 3% )下降为 1 9 36 %。结论 :子宫内膜异位症患者腹腔液中IL 1

γδT细胞、NK细胞及LAK的部分抗肿瘤生物特性比较

目的 :通过体外分离、增殖培养获取γδT细胞、NK细胞和LAK细胞 ,并比较了 3种细胞的抗肿瘤的生物学特性。方法 :收集用不同单抗分别包装被粘附的细胞 ,然后通过MACS细胞分选仪的分选 ,获取的细胞进行细胞增殖动力学、细胞表型、细胞杀伤活性的测定以单抗阻断效应的分析。结果 :经MACS分离得到的γδT细胞 ,培养 2w后细胞数扩散 6 0 0～ 80 0倍 ,CD3、CD8和γδ细胞表达阳性率分别是 72 2 9%、5 8 0 2 %和 6 5 98%。γδT细胞对NK敏感细胞K5 6 2以及NK不敏感细胞Raji和XG 7这 3种不同靶细胞均有较高的杀伤率 ,分别为 35 98%、42 2 7%和 6 9 0 8% ;NK细胞对此 3种细胞的杀伤率分别是45 12 %、12 34%和 2 9 2 7% ;LAK细胞的杀伤率分别为 44 0 1%、2 9 2 7%和 2 5 6 8%。γδT细胞对经MHC Ⅰ类单抗阻断前后的K5 6 2、Raji和XG 73种靶细胞的杀伤率无明显改变。结论 :γδT细胞、NK细胞和LAK细胞都具有一定的非特异性杀伤肿瘤细胞的作用 ;γδT细胞对MHC Ⅰ类单抗阻断后的肿瘤细胞的杀伤无明显变化 。

一种简单γδT细胞扩增培养方法及其抗肿瘤生物学功能研究

目的 :建立一种特异快速地诱导扩增人外周血γδT细胞的方法 ,并比较了γδT细胞 ,NK和LAK细胞的抗肿瘤的生物学特性。方法 :收集用不同单抗分别包被粘附的细胞 ,然后通过MACS细胞分选仪的分选 ,获取的细胞进行细胞增殖动力学、细胞表型、细胞杀伤活性的测定以及单抗阻断效应的分析。结果 :经MACS分离得到的γδT细胞 ,培养 2周后细胞数扩增 6 0 0～ 80 0倍 ,CD3,CD8和γδ细胞表达阳性率分别是 72 .2 9% ,5 8.0 2 %和 6 5 .98%。γδT细胞对NK敏感细胞K5 6 2以及NK不敏感细胞Raji和XG 7这 3种不同靶细胞均有较高的杀伤率 ,分别为 35 .98% ,5 2 .2 7%和 6 9.0 8% ;NK细胞对此 3种细胞的杀伤率分别是 45 2 1% ,12 .34%和 11.94% ;LAK细胞的杀伤率分别为 44 .0 1% ,2 9.2 7%和 2 5 .6 8%。γδT细胞对经MHC Ⅰ类单抗阻断前后的K5 6 2 ,Raji和XG 73种靶细胞的杀伤率无明显改变。结论 :γδT细胞、NK细胞和LAK细胞都具有一定的非特异性杀伤肿瘤细胞的作用 ;γδT细胞对MHC Ⅰ类单抗阻断后的肿瘤细胞的杀伤无明显变化。

γδΤ细胞、NK细胞及LAK的生物特性比较

目的通过体外分离、增殖培养获取 γδΤ细胞、NK细胞和 L AK细胞 ,并比较 3种细胞的抗肿瘤的生物学特性。方法收集用不同单抗分别包被粘附的细胞 ,通过 MACS细胞分选仪的分选 ,获取的细胞进行细胞增殖动力学、细胞表型、细胞杀伤活性的测定以及单抗阻断效应的分析。结果经 MACS分离得到的 γδΤ细胞 ,培养 2周后细胞数扩增 6 0 0～ 80 0倍 ,CD3、CD8和 γδ细胞表达阳性率分别是 72 .2 9%、5 8.0 2 %和 6 5 .98%。γδΤ细胞对 NK敏感细胞 K5 6 2以及 NK不敏感细胞 Raji和 XG- 7这 3种不同靶细胞均有较高的杀伤率 ,分别为 35 .98%、5 2 .2 7%和 6 9.0 8;NK细胞对此 3种细胞的杀伤率分别是45 .2 1%、12 .34%和 2 9.2 7% ;L AK细胞的杀伤率分别为 44 .0 1%、2 9.2 7%和 2 5 .6 8%。γδΤ细胞对经 MHC- 类单抗阻断前后的 K5 6 2、Raji和 XG- 73种靶细胞的杀伤率无明显改变。结论γδΤ细胞、NK细胞和 L AK细胞都具有一定非特异性杀伤肿瘤细胞的作用 ;γδΤ细胞对 MHC- 类单抗阻断后的肿瘤细胞的杀伤无明显变化。提示 γδΤ细胞较 NK细胞和 L

抗CD94单抗与NK细胞、γδ^+T细胞及CTL功能的关联

目的探讨抗CD94单抗与NK细胞、γδ+T细胞及CTL的相关性。方法采用荧光检测法,分别分析NK细胞、γδ+T细胞和CTL上CD94分子的表达。采用3HTdR掺入法和MTT释放法,分析抗94单抗对这3种细胞的杀伤活性和细胞增殖的影响。结果NK细胞和γδ+T细胞上CD94分子的表达,明显高于PBL和CTL。抗CD94单抗能激活NK细胞、γδT细胞和CTL的增殖,并能提高γδ+T细胞和CTL的杀伤活性。结论CD94分子在NK细胞和γδ+T细胞表面呈高表达。抗CD94单抗对NK细胞、γδ+T细胞及CTL的增殖具有上调作用;对它们的杀伤活性具有正向调节作用。

子宫内膜异位症患者γδ^+T细胞及NK细胞的功能分析

目的分析子宫内膜异位症患者中γδ+T细胞和天然杀伤细胞(NK)功能的变化,以及探讨患者腹腔液对正常人γδ+T细胞和自然杀伤细胞(NK)功能的影响。方法采用免疫荧光细胞检测及细胞毒活性检测法,分析22例子宫内膜异位症患者外周血、腹腔液中γδ+T细胞及NK细胞的表型与功能。结果子宫内膜异位症(疾病组)患者外周血、腹腔液中CD56+细胞与正常对照组相比较无明显差异,而疾病组腹腔液中γδ+T细胞的百分率高于其外周血和正常对照组。疾病组腹腔液中的γδ+T细胞及NK细胞的功能低于外周血及正常对照组。疾病组的腹腔液对正常人外周血γδ+T细胞及NK细胞的功能具有负调节作用。结论子宫内膜异位症患者的γδ+T细胞及NK细胞的功能低下,处于被抑制状态,提示患者的腹腔液中,可能存在γδ+T细胞及NK细胞的功能抑制因子。

子宫内膜异位症患者腹腔液对子宫内膜细胞MHC—I类分？…

目的 分析了宫内膜异位症（ＥＭ）虱腹腔液对ＩＦＮ－γ诱导异位子宫内膜细胞上ＭＨＣ－Ｉ类抗原表达以及对正常人γδＴ细胞和自然杀伤细胞（ＮＫ）功能的影响。方法 采用免疫荧光细胞检测及细胞毒活性检测８法。结果 ＥＭ患者腹腔液对ＩＦＮ－γ诱导异位子宫内膜细胞上ＭＨＣ－Ｉ类抗原表达具有下调作用，疾病组的腹腔液对正常人外周血γδＴ细胞及ＮＫ细胞的杀伤功能具有负相调节作用。结论

γσ-T细胞在免疫性疾病患者中的表达分析

目的观察γσＴ细胞在正常人群、自身免疫性疾病以及恶性肿瘤病人中的分布表达。方法γσＴＣＲ单克隆抗体荧光标记细胞检测法。结果γσＴ细胞在系统性红斑狼疮和恶性肿瘤病人中分别表达为２１．３５％±６．６４％和１０．４７％±６．０１％高于正常组（６．６２１±２．１０％）。ＣＤ４＋γσ细胞与ＣＤ８＋γσ＋的细胞在疾病组的表达均高于正常组。结论γσＴ细胞有可能是一群具有ＣＤ４＋和ＣＤ８＋双重功能的淋巴细胞。

子宫内膜异位症患者γδT细胞及NK细胞的功能分析

目的 :分析子宫内膜异位症患者中γδT细胞和天然杀伤 (NK)细胞功能的变化 ,并探讨患者腹腔液对正常人γδT细胞和NK细胞功能的影响。方法 :采用免疫荧光细胞检测及细胞毒活性检测法分析 2 2例子宫内膜异位症患者外周血、腹腔液中的γδT细胞及NK细胞的表型与功能。结果 :子宫内膜异位症 (疾病组 )患者外周血、腹腔液中CD56+细胞与正常对照组无明显差异 ,而疾病组腹腔液中γδ+T细胞分别高于外周血和正常对照组。疾病组腹腔液中的γδT细胞及NK细胞的功能低于外周血及正常对照组。疾病组的腹腔液对正常人外周血γδT细胞及NK细胞的功能具有负相调节作用。结论 :子宫内膜异位症患者的γδT细胞及NK细胞的功能低下 ,处于被抑制状态 ,提示子宫内膜异位症患者的腹腔中存在γδT细胞及NK细胞功能的抑制因子。

IL-14受体与免疫性疾病及白血病关联性的研究

ＩＬ－１４受体与免疫性疾病及白血病关联性的研究马安伦张冬青王树军周光炎邱潮林许荣作者单位：２０００２５上海市免疫学研究所（马安伦、张冬青、王树军、周光炎）；上海第二医科大学附属宝钢医院（邱潮林）；上海市光华医院（许荣）白细胞介素－１４（ＩＬ－１４），...

牡蛎提取物抗肿瘤作用的实验研究

以每天0.2ml(20mg)剂量的牡蛎提取物连续10d胃饲荷HAC鼠肝癌的Balb/c小鼠,发现宿主因荷瘤而下降的免疫指标明显回升,包括总T细胞数,T辅助细胞百分比,丝裂原诱发的淋巴细胞转化强度,和NK细胞的杀伤活性。瘤重亦较对照组明显减轻(P<0.01),宿主成活期延长。用相同剂量的牡蛎提取物胃饲长有人结肠癌的裸鼠共15d,发现肿瘤体积明显减少为对照的44.6％,(P<0.01)。结果提示牡蛎提取物可能通过增强宿主免疫功能,特别是其中天然杀伤细胞活性而抑制肿瘤生长。

用荧光定量法检测Caspase-3的活性

目的通过检测Caspase3的活性反映Jurkat细胞凋亡。方法用放线菌素D诱导Jurkat细胞8h,裂解细胞,荧光分光光度计测定Caspase3的活性。同时,用Hoechst法进行检测,并进行平行的方法学比较。结果Ju-rkat细胞经不同浓度50μmol/L和100μmol/L的放线菌素D诱导后,Caspase3的活性显著增高,倍增值分别为10.091和10.818,相应的Caspase3活性单位为0.641和0.659;而未经诱导的Jurkat细胞仅为0.061。加入Cas-pase3抑制剂后,倍增值分别为0.101和0.119,Caspase3的活性单位为0.006和0.007。而用Hoechst法染色时,可见Jurkat细胞仅出现早期凋亡的形态学改变。结论荧光定量法是一种良好的定量检测Caspase3的方法,可用于检测早期的细胞凋亡。

从卵巢癌cDNA表达文库筛选肿瘤抗原基因的研究

目的利用肿瘤患者自体血清筛选患者肿瘤cDNA表达文库SEREX,寻找肿瘤特异性抗原是肿瘤免疫学研究的新策略,由此方法所获B细胞抗原肽可为进一步寻找T细胞抗原肽,开展肿瘤免疫治疗和诊断提供线索。方法采用SEREX方法,筛选中国人卵巢癌cDNA表达文库。对获得的阳性克隆片段测序鉴定和进行BLAST同源性比较。采用RTPCR,分析正常组织和肿瘤组织及肿瘤细胞株中6个新的EST片段的表达。结果所获基因片段大多数为已知抗原基因20/27。根据其来源又可归类为结构基因、线粒体基因和调控基因。另外,获得6个未知的EST片段。RTPCR的结果表明,4个ESTEST8788、1750、1754和3533片段在肿瘤和正常组织中均有表达,2个EST在正常组织中未见表达,而在肿瘤组织中有表达,可能是与肿瘤相关或特异的EST片段。结论SEREX方法不失为一种有效筛选卵巢癌肿瘤抗原的新方法,所获肿瘤抗原候选基因,可进一步进行结构和功能的研究。

sFas、sFasL及细胞因子在类风湿关节炎疾病中的意义

目的研究sFas,sFasL,细胞因子及抗单链DNA抗体与类风湿关节炎rheumatoidarthritisRA致病的关系及意义。方法采用ELISA法检测32名RA患者的血清标本。结果RA患者血清sFassFasLIL6及IL8的水平均高于正常对照组。活动期sFasL,IL6及IL8的水平显著高于非活动期P0.01,而sFas的水平未见显著差异。在32例RA患者中,有8例sFas和sFasL的水平同时升高,9例抗单链DNA抗体和sFasL同时升高。结论IL6和IL8的水平与RA的炎症程度有关。高浓度的sFas和sFasL可抑制Ts细胞对TH细胞的负向调节。由Fas/FasL启动淋巴细胞凋亡产生的核抗原,可致机体产生抗单链DNA抗体。检测sFassFasLIL6及IL8有助于对RA的诊断,并可为RA的免疫生物治疗提供依据。

人卵巢癌细胞HLA分子与其相关基因表达的研究

目的:探讨人卵巢癌细胞中HLA分子及其相关基因的表达与IFN-γ诱导HLA分子表达的相互关系。方法:采用Westernblot、免疫组化和流式细胞术,检测卵巢癌细胞中HLA分子表达,以RT-PCR技术,分析卵巢癌细胞TAP、LMP和MHC Ⅱ类分子反式激活蛋白(CIITA)基因表达。结果:被检测的11株卵巢癌细胞中,HLA-Ⅰ类分子异常的表达率达为45％。而HLA-I类分子表达的异常与TAP1、TAP2、LMP2和LMP7 4种基因表达的异常有关。卵巢癌细胞或其他肿瘤细胞HLA-Ⅱ类分子的表达与CIITA基因的表达一致。组成性或诱导性表达CIITA基因的肿瘤细胞,经IFN-γ作用后,其HLA-Ⅰ、-Ⅱ类分子的表达增强;而诱导后仍不表达CIITA基因的肿瘤细胞,其HLA分子的表达无增强作用。结论:卵巢癌细胞中TAP和LMP基因表达的缺陷,是引起HLA-I类分子表达异常的重要因素,提示CIITA基因参与了调控肿瘤细胞HLA-Ⅰ、-Ⅱ类分子的表达。

人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型、细胞系建立及其生物学特性研究

目的 建立人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型和相应体外细胞系。方法 将病理证实的人卵巢浆液性乳头状腺癌手术切除标本移植于SCID小鼠皮下 ,成瘤后行鼠间传代 ,取移植瘤细胞体外分离培养、传代和建系 ,并应用细胞、分子生物学手段对移植瘤和建系细胞进行一系列生物学特性检测。结果 历时 14个月传至 5代 ,皮下移植瘤存活率为 90 % ,持续 6个月 ,体外建系 (OVA 319)细胞生长稳定。镜下观察组织形态学和超微结构符合原肿瘤组织基本特征 ;染色体分布在 12～ 46条之间 ,多为异倍体 ,显示人类肿瘤异常染色体 ;流式细胞术和RT PCR技术分析原代、体内移植瘤和OVA 319细胞结果一致 ,表现为瘤细胞生长活跃、细胞周期分布相仿 ,MAGE 2基因在mRNA水平异常表达。结论 人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型和OVA

酵母菌表达倍菲隆发酵工艺研究

目的 :为了探索用酵母菌表达乙型干扰素 (倍菲隆 )的大批生产的发酵工艺流程及优化的重要参数。选用 1 5L不锈钢发酵罐作为乙型干扰素发酵工艺研究系统。方法 :探索了种细胞密度对初始发酵期 (甘油利用期 )的影响 ,启动甘油补充期的溶解氧浓度 ,诱导目的蛋白表达时添加甲醇的速率条件控制 ,pH对酵母菌生长与蛋白表达的影响以及发酵时间对乙型干扰素表达量影响等重要发酵工艺参数。结果 :接种高密度的种菌 (OD60 0为 9)时酵母菌增殖快 ,湿细胞重量于1 8h即达到 1 5 7g L。当DO恢复至 67%时即开始补充甘油可使酵母菌在 5h内增殖达到 2 1 9g L。添加甲醇速率从 2 %(甲醇终浓度为 0 0 3%)开始 ,逐步增加 ,在 2 4h内达到 33%的添加速率 (甲醇终浓度为 0 5 %)。甲醇诱导前pH为 6时最有利于酵母菌生长 ,在蛋白表达时期 ,控制发酵罐内pH值在 3 0 ,可得最高蛋白表达量。发酵 70h乙型干扰素表达量达到高峰。结论 :接种高密度种菌可促进工程菌生长 ,当DO恢复至 67%时开始补充甘油可加快酵母菌生长 ,在诱导期中缓慢添加甲醇并维持发酵罐pH为 3 0 ,发酵 70h可获得最佳蛋白生产量。

黄芪和药饼灸对5-Fu治疗中所致荷结肠癌小鼠免疫功能低下的正向调节作用

目的 研究黄芪、药饼灸对经 5 FU抗瘤治疗引起免疫功能低下小鼠的正向调节作用。方法C2 6小鼠结肠癌细胞株 5× 10 5于BALB c小鼠皮下注射建立小鼠结肠癌实验模型。接种肿瘤细胞后 2 4h开始治疗实验。实验共分 5组 ,分别为生理盐水组 (A组 ) :即穴位 (足三里 )注射生理盐水 0 .1mL ,隔d 1次 ,共 2wk ;5 FU治疗组 (B组 ) :腹腔注射 5 FU 0 .2 5mg 0 .1mL(12 .5mg kg) ,每隔 2d 1次 ,共2wk ;5 FU联合黄芪组 (C组 ) :腹腔注射 5 FU 0 .2 5mg 0 .1mL(12 .5mg kg) ,每隔 2d 1次 ,同时隔d穴位 (足三里 )注射黄芪注射液 0 .1mL(2 g mL) ,共 2wk ;5 FU联合药饼灸组(D组 ) :腹腔注射 5 FU 0 .2 5mg 0 .1mL(12 .5mg kg) ,每隔 2d 1次 ,同时中腕、神阙、关云穴位用药饼灸 ,每穴灸 3壮 ,隔d 1次 ,共 2wk ;5 FU联合黄芪加药饼灸组 (E组 ) ;治疗方法同上。治疗结束后 ,获取小鼠脾脏单个细胞 ,分别采用流式细胞术 (FACS)测定脾淋巴细胞中T细胞亚群及NK细胞表面标志。采用 4hLDH释放法 ,检测小鼠淋巴细胞 (NK、CTL)的杀伤功能。结果本实验结果表明 ,药饼灸加黄芪联合 5 FU组的上述免疫指标 (包括CTL、NK细胞的杀伤活性 )与 5 FU治疗组相比较具有统计学意义。结论黄芪注射液加药饼灸联合 5 FU ,对单经 5 FU?

子宫内膜异位症患者NK细胞和γδT淋巴细胞分析

目的 :探讨子宫内膜异位症患者外周血、腹腔液中NK细胞和γδT淋巴细胞的数量和杀伤功能。方法 :取 15例子宫内膜异位症患者的外周血和腹腔液 ,用荧光染色法、流式细胞术和酶标法等测定NK和γδT细胞的数量和杀伤功能。取 10例非内异症者外周血和腹腔液作为对照。结果 :1 与对照组相比 ,病例组外周血和腹腔液中的NK细胞数量无明显改变 ,γδT细胞数量在外周血中无明显差异 ,但在腹腔液中明显增加 (P <0 0 5 )。病例组中外周血和腹腔液之间NK和γδT细胞数量均有差异 ,表现为腹腔液中两种细胞所占的百分比明显增高 (P <0 0 5 )。 2 病例组与对照组相比 ,除外周血的γδT细胞外 ,外周血的NK细胞及腹腔液的NK和γδT细胞的功能均明显下降 (P <0 0 5 )。同一个体中 ,病例组腹腔液中的NK和γδT细胞的功能比外周血中的明显降低 (P 均 <0 0 5 )。结论 :内异症患者NK和γδT细胞杀伤功能的下降可导致机体清除异位子宫内膜细胞的功能下降 。