X-射线修复交叉互补蛋白5在脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的分析X-射线修复交叉互补蛋白5(XRCC5)在脑胶质瘤(brain glioma,BG)中的表达水平及其与临床病理特征和预后的关系。方法利用癌症基因图谱(TCGA)数据库的RNA测序数据分析XRCC5在636例BG[468例低分级脑胶质瘤(LGG),168例多形性胶质母细胞瘤(GBM)]与正常脑组织的表达差异,比较XRCC5表达水平与年龄、性别、病理分级、生存期以及肿瘤增殖相关抗原67(MKI67)表达水平的相关性。对BG组织芯片(47例LGG、75例GBM及3例正常脑组织)进行XRCC5免疫组化染色,进一步验证XRCC5表达水平与BG病理分级的关系。结果TCGA分析结果显示,XRCC5在BG组织中的表达水平高于正常脑组织(P<0.001),在GBM组的表达水平高于LGG组(P<0.001);XRCC5表达水平与BG病理分级呈正相关(P<0.001),与MKI67表达水平呈正相关(P<0.001);XRCC5高表达组生存期长于低表达组(P<0.001);不同性别、不同年龄段XRCC5表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05);XRCC5的免疫组化染色结果显示,肿瘤组织中XRCC5表达水平高于正常人脑组织(P<0.05)。结论XRCC5在BG组织中升高,且与恶性肿瘤的生物标记物MKI67呈正相关。XRCC5表达越高,患者的预后越好,生存期越长。

PAAm/CMC-Ag纳米复合水凝胶的制备表征及溶胀动力学研究

以N,N-亚甲基双丙烯酰胺(N,N-MBA)为交联剂,过硫酸钾(KPS)为引发剂,合成了聚丙烯酰胺(AAm)-羧甲基纤维素钠盐(CMC)半互穿网络水凝胶。通过傅里叶红外光谱纳米复合水凝胶PAAm/CMC-Ag的结构。紫外可见光谱研究表明,Ag纳米粒子的表面等离子体吸收峰在450 nm范围。溶胀动力学表明,PAAm/CMC-Ag平衡溶胀率(Qe)取决于CMC的含量,且随着CMC含量的增加而提高。溶胀动力学模拟数据表明,制备的水凝胶理论最大吸水量Smax与实验值基本相一致,而且PAAm/CMC-Ag纳米复合水凝胶为非Fickian扩散模式。

牛蒡子提取物的高效液相分析及其对蛋白质非酶糖基化的作用研究

目的：研究牛蒡子水提物和醇提物对蛋白质糖基化形成晚期糖基化终产物（advanced glycation end—products，AGEs）的作用。方法：1．牛蒡子提取物对AGEs形成的作用：分别采用水提法、醇提法对牛蒡子进行提取，并采用体外蛋白质非酶糖基化反应生成AGEs的模型，予系列浓度的牛蒡子水提物和醇提物孵育，用荧光分光光度计测定AGEs荧光强度的变化。

BMSCs-SCs共培养体系联合异种神经支架修复大鼠坐骨神经缺损的研究

目的探讨骨髓基质细胞(BMSCs)与雪旺细胞(SCs)共同培养联合异种神经移植体(ANX)修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法取SD大鼠左侧坐骨神经分离,培养SCs,4周龄雄性SD大鼠取双侧股骨及胫骨骨髓分离纯化培养BMSCs。将BMSCs与不同浓度的SCs应用Transwell培养皿联合培养,利用CCK-8检测BMSCs增殖活性。将不同分组细胞打入制备的异种神经支架内。动物实验中,选取体重(100±20)g SD雄性大鼠,在无菌条件下制备10 mm坐骨神经缺损的大鼠模型,将种子细胞-ANX移植至大鼠坐骨神经缺损处,分为5组:BMSCs-SCs组(1)、BMSCs-SCs组(2)、BMSCs-SCs组(3)、BMSCs组(4)和空白移植组(5)。术后8周,对各组大鼠行形态学实验检测评价移植神经再生的效果。结果通过CCK-8检测发现共培养体系中的BMSCs细胞增殖活性强于单细胞组,呈典型的极性漩涡状生长。经8周饲养后的动物实验,通过检测大鼠坐骨神经功能指数、热板实验、大鼠患侧/健侧胫骨前肌及腓肠肌湿重比率发现,共培养组坐骨神经功能恢复较好(P<0.05),坐骨神经支配的感觉方面恢复效果显著(P<0.05)。结论共培养组坐骨神经功能恢复优于单细胞组;运用共培养体系联合异种神经支架促进神经感觉恢复效果优于运动恢复。

磁性纳米颗粒在小鼠巨噬细胞体外MRI中的应用

目的探讨应用超微超顺磁性氧化铁纳米颗粒(ultra-micro superparamagnetic iron oxide nanoparticle,USPIO)标记小鼠巨噬细胞株RAW264.7的最适浓度以及比较MRI中不同扫描序列在细胞吞噬功能评价中的敏感度差别。材料与方法用终浓度为0、25、50、75、100、125μg/mL的USPIO分别与小鼠巨噬细胞共培养24 h后,细胞计数试剂法(CCK-8)计算细胞存活率以及USPIO对该细胞的半数抑制浓度(IC;);光学显微镜下观察细胞形态学变化;普鲁士蓝染色确认细胞对USPIO的吞噬效应;3.0 T MRI扫描细胞-琼脂糖凝胶模型,记录T1WI和T2WI序列的弛豫时间和弛豫率并计算弛豫时间降低率。结果当USPIO浓度为25μg/mL时,对细胞的存活率无影响,差异无统计学意义(P>0.05);当USPIO浓度≥50μg/mL时,细胞存活率随USPIO浓度增加显著降低(P均<0.05);USPIO对细胞的半数抑制浓度IC;为(186.5±7.2)μg/mL;当USPIO浓度为50μg/mL时,细胞形态开始皱缩、透光度减低;当USPIO浓度为25μg/mL时,普鲁士蓝染色呈显著阳性;MRI显示,与对照组相比,当USPIO浓度为25μg/mL时,细胞即见显著信号改变;随USPIO浓度增加,T1、T2弛豫时间显著缩短(P均<0.01),对应弛豫率R1、R2逐渐升高;相同USPIO浓度下,各组T2弛豫时间降低率显著高于T1弛豫时间降低率(P均<0.001)。结论浓度为25μg/mL的USPIO对细胞没有明显毒性作用,而且标记效率高、MRI即见显著信号改变与较好的成像效果,为标记巨噬细胞的最适浓度;MRI能用于细胞标记后的体外成像,T2WI序列在检测细胞吞噬USPIO后的信号变化优于T1WI序列。

激活态雪旺细胞干预骨髓间充质干细胞对大鼠坐骨神经损伤的实验研究

目的探讨激活态雪旺细胞(activated schwann cells,ASCs)干预骨髓间基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)联合异种神经移植体(acellular nerve xenograft,ANX)修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法取大鼠骨髓腔内BMSCs,另取大鼠的ASCs和普通SCs,行原代培养。将两种细胞置于Transwell培养皿中培养并分成三组:BMSCs组,SCs-BMSCs组及ASCs-BMSCs组。在培养皿中培养后第2、4、6和8天,用CCK-8法检测各组BMSCs生物学活性,通过q-PCR检测各组脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的mRNA表达水平。在无菌条件下制备10 mm坐骨神经缺损的大鼠模型,制作异种神经支架复合体(兔源胫神经)。将SD大鼠分为三组(n=10):ANX+BMSCs组,ANX+SCs-BMSCs组及ANX+ASCs-BMSCs组。将各组细胞打入支架,复合支架培养3 d,移植到大鼠模型中。术后8周通过神经电生理检测各组患肢感觉神经传导速度(sensory nerve conduction velocity,SCV),使用q-PCR检测神经移植体内神经营养因子(BDNF、NGF和bFGF)表达水平,另比较三组模型的下肢患侧/健侧腓肠肌细胞横截面积比恢复率。结果CCK-8测定发现共培养系统中BMSCs组细胞增殖活性强于单细胞组,第2天和第4天,三组的活性差异无统计学意义(P>0.05),第6天ASCs-BMSCs组增殖活性强于BMSCs组与SCs-BMSCs组,差异有统计学意义(P<0.05),BMSCs组与SCs-BMSCs组之间差异无统计学意义(P>0.05)。通过q-PCR检测BMSCs组中BDNF、NGF及bFGF的mRNA表达最低,ASCs-BMSCs组含量最高(P<0.05)。经8周饲养后的动物实验,通过检测发现,ANX-ASCs-BMSCs组的SCV,ANX内相关神经因子表达量以及ANX-ASCs-BMSCs组的大鼠患侧/健侧腓肠肌肌细胞横截面积均最大。结论ASCs能够促进BMSCs的分化增殖;运用ANX-ASCs-BMSCs促进周围神经功能再生。