信号转导与转录激活因子3下调DNAJB6在肺癌生物学行为中的机制

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中信号转导与转录激活因子3(STAT3)与DNA结合蛋白B6(DNAJB6)的关系及铁死亡对NSCLC生物学行为的影响。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖试验和细胞划痕实验对非小细胞肺癌细胞系A549和H1650进行细胞增殖能力检测。通过慢病毒转染A549和H1650细胞系,检测NSCLC细胞的迁移和侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测NSCLC细胞系A549和H1650各项靶蛋白的表达,组间比较采用t检验,多组比较采用方差分析。结果Western blot结果显示在膜上约80 kDa处,肿瘤组织蛋白条带较正常相邻组织颜色更深(P<0.01)。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析结果显示,肿瘤组织中STAT3/DNAJB6 mRNA与GAPDH mRNA的比值高于正常相邻组织(1.184±0.168比0.378±0.136)差异有统计学意义(P<0.01)。CCK-8实验结果,在24、48、72、96 h时,STAT3组的NSCLC细胞系A549增殖率比相应对照组高[(1.000±0.011)%、(2.338±0.021)%、(3.324±0.010)%、(4.270±0.008)%比(1.00±0.012)%、(1.789±0.010)%、(2.891±0.060)%、(3.761±0.017)%],差异有统计学意义(P<0.01);NSCLC细胞系H1650增殖率比相应对照组高[(1.000±0.008)%、(1.706±0.020)%、(2.956±0.096)%、(3.755±0.015)%比(1.000±0.004)%、(1.484±0.004)%、(2.336±0.008)%、(3.074±0.107)%],差异有统计学意义(P<0.01)。细胞划痕实验结果:过表达STAT3后,NSCLC细胞系A549和H1650增殖能力均显著增强(P<0.01)。病毒转染A549和H1650细胞系结果:过表达STAT3后NSCLC细胞的迁移和侵袭能力增强(P<0.01)。Western blot结果:DNAJB6表达减少,铁死亡相关蛋白xCT和GPX4表达增加(表达水平与铁死亡呈负相关,P<0.01)。结论过表达STAT3可抑制癌细胞铁死亡。

基于生物信息学及实验探究八珍汤对食管鳞癌的作用及其机制

目的探究八珍汤治疗食管癌的活性成分及作用机制。方法利用传统中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)、OMIM和GeneCards数据库筛选八珍汤治疗食管鳞癌的活性成分和潜在靶点。GO和KEGG分析上述靶点寻找活性通路及生物学过程。利用活性成分-靶点-草药网络、蛋白质互作网络、分子对接技术筛选出核心靶点和成分。从普诺赛生物科技有限公司购买食管鳞癌细胞系KYSE30和KYSE150细胞系。用浓度为0、10、20、40、60、80μmol/L甘草二黄酮乙处理KYSE30和KYSE150细胞,计算半数抑制浓度(IC_(50))。将两种细胞分为空白组(正常培养基)、con组[0.1%二甲基亚砜(DMSO)]、LICO5组(5μmol/L甘草二黄酮乙)、LICO15组(15μmol/L甘草二黄酮乙)。划痕实验检测迁移作用,流式细胞技术检测凋亡作用。免疫印迹实验检测其对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路的影响。组间两两比较采用SNK-q检验。结果甘草二黄酮乙是核心药效成分,可能通过影响PI3K-Akt信号通路、蛋白磷酸化正向调节,促进细胞凋亡参与治疗。CCK-8结果显示作用48 h于KYSE30的IC_(50)为15.55μmol/L,KYSE150的IC_(50)为7.84μmol/L。空白组和con组细胞迁移率、凋亡率、PAKT、PI3K、MTOR表达均高于LICO5组和LICO15组[KYSE30:迁移率(19.50±2.30)%、(19.26±1.69)%、(14.34±1.97)%和(1.35±0.30)%;凋亡率(11.50±0.38)%、(13.70±0.86)%、(23.10±0.80)%和(48.50±1.50)%;PAKT(1.00±0.08、0.99±0.08、0.74±0.04、0.20±0.02);PI3K(1.00±0.04、1.00±0.03、0.76±0.02、0.67±0.43);MTOR(1.00±0.13、1.01±0.08、0.70±0.05、0.52±0.05),差异有统计学意义(F=71.713、904.942、116.300、62.301、24.600,P<0.05)。KYSE150:迁移率(69.00±6.47)%、(66.21±2.51)%、(54.21±1.41)%和(40.79±4.58)%;凋亡率(9.52±0.45)%、(9.59±0.50)%、(23.30±0.80)%和(37.27±0.70)%;PAKT(1.00±0.07、0.99±0.06、0.57±0.02、0.42±0.02);PI3K(1.00±0.06、0.99±0.06、0.48±0.05、0.45±0.04);MTOR(0.99±0.05、0.99±0.05、0.73±0.01、0.49±0.02)差异有统计学意义(F=27.979、1188.308、104.400、90.993、132.200,P<0.05)。当剂量达到15μmol/L时,PMOTR的表达下降开始有统计学意义(KYSE30:0.74±0.05;KYSE150:0.69±0.01,F=10.766、13.157,P<0.05)]。结论八珍汤治疗食管鳞癌核心成分为甘草二黄酮乙,可以抑制癌细胞增殖、迁移,促进凋亡,抑制Akt/PI3K/mTOR通路活化。