环介导等温扩增法快速检测阪崎肠杆菌

目的:研究阪崎肠杆菌的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,简称LAMP)方法,实现对食品中阪崎肠杆菌的快速检测。方法:针对阪崎肠杆菌16S rRNA基因(16S rDNA)及外膜蛋白A(OmpA)基因设计LAMP引物,扩增后通过电泳或加入显色剂SYBR-GREENⅠ检测。结果:LAMP法能有效特异地检测出阪崎肠杆菌;以16S rRNA引物检测阪崎肠杆菌的最低检出限为32CFU/mL,用OmpA引物检测阪崎肠杆菌的最低检出限达3CFU/mL,扩增产物加入SYBR-GREENⅠ在紫外条件下可见荧光,与电泳检测具有同样的灵敏度。结论:LAMP法可实现对阪崎肠杆菌的快速检测,在食品检测中具有广阔的应用前景。

环介导等温扩增法对乙肝病毒的快速检测和分型

目的针对乙肝病毒(HBV)不同亚型,建立环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,实现对HBV的快速检测及基因分型。方法分别设计HBV B、C、D三亚型基因组特征序列的LAMP引物,优化反应条件,建立特异灵敏的HBV亚型LAMP检测方法,并与Real-time PCR方法进行临床样本检测结果比对。结果 LAMP法在数十分钟内有效地检测出HBV的B、C、D三亚型;其中,HBV-B亚型的检出限为17拷贝;C亚型的检出限为25拷贝;D亚型的检出限为10拷贝。与Real-time PCR法相比,灵敏度提高1 000倍左右。结论 LAMP法可实现HBV的快速检测及分型,具有高特异度和高灵敏度,可用于临床检测诊断。

溶血性链球菌LAMP检测方法的建立

目的:研究溶血性链球菌的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,实现对溶血性链球菌的快速检测。方法:针对溶血性链球菌的scpA基因设计4条特异性LAMP内外引物进行LAMP扩增;优化扩增反应条件;采用包括溶血性链球菌在内的6种不同菌株进行LAMP的特异性检测,并酶切鉴定;对溶血性链球菌菌液以无菌水进行10倍系列梯度稀释后,进行LAMP扩增检测其灵敏度;将菌掺入牛奶样本并进行LAMP检测。结果:本法可快速灵敏地检测出溶血性链球菌,反应特异性高,检出限为16.7CFU/mL,而牛奶样本的检出限则达10CFU/mL。结论:LAMP法可用于食品溶血性链球菌的快速检测。

隐性孔雀石绿多克隆抗体的制备及鉴定

研究制备孔雀石绿(MG)代谢物隐性孔雀石绿(LMG)多克隆抗体进而间接鉴定鱼体中孔雀石绿的残留。首先利用化学方法合成含羧基的隐性孔雀石绿衍生物(CLMG),然后采用碳化二亚胺法偶联牛血清白蛋白(BSA)合成免疫抗原隐性孔雀石绿-BSA,按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备抗隐性孔雀石绿多克隆抗体。采用间接酶联免疫吸附实验(iELISA)测定抗血清中抗隐性孔雀石绿多克隆抗体效价。结果表明:抗隐性孔雀石绿的抗体效价为1:32000,可用于隐性孔雀石绿的免疫学检测。

麦角碱的提取与分离纯化

通过大孔树脂D-101吸附法提取雀稗麦角菌发酵液中麦角总碱粗品。采用硅胶薄板层析确定粗品组分及洗脱条件,进行碱性硅胶柱低压层析,单因素实验确定洗脱溶剂的比例及洗脱次数,最终分离纯化得到麦角总碱,计算总回收率。结果表明:总生物碱回收率为77.6%。硅胶层析分离上样量与硅胶质量比为1∶20,去杂洗涤剂为氯仿:甲醇=5∶1(V/V)的混合液,依次洗涤5次。用氯仿-甲醇2∶1(V/V)的洗脱剂洗脱,得到麦角总碱;从雀稗麦角菌发酵液中提纯麦角碱法回收率及纯度较高,具有广阔的应用前景。