流式细胞术测定马蓝基因组大小

目的 采用流式细胞术测定马蓝基因组大小。方法 以马蓝幼嫩叶片为材料,水稻日本晴为参照,mGb裂解液解离细胞后通过流式细胞仪检测荧光强度,计算基因组大小。结果 mGb裂解液对细胞核解离效果较好,马蓝基因组大小为(0.99±0.01)Gb。结论 该方法既丰富了马蓝遗传信息,又为其基因组学研究和流式细胞技术应用提供参考。

福建安溪县新老茶园主要危害性杂草密度调查分析

为了有效控制茶园杂草,于2012—2014年调查了福建省安溪县主要产茶区新、老茶园的杂草密度与种类及其生活型。杂草密度调查结果表明:新茶园的杂草主要有27种,老茶园33种;种类分析结果表明:新、老茶园中的杂草以菊科、大戟科、禾本科占比最高,分别为新茶园中菊科杂草占22.22%、大戟科11.11%、禾本科25.93%;老茶园中菊科杂草占12.12%、大戟科12.12%、禾本科18.18%;生活型分析结果表明:新、老茶园中均以一年生杂草为主,新茶园中一年生杂草占77.78%,老茶园占69.70%。调查结果表明,新茶园的杂草主要组成为狼尾草+狗尾草+马唐,老茶园则为狼尾草+牛筋草+马唐,新、老茶园杂草以禾本科、一年生杂草为主。研究结果为该地茶园杂草多样性分析提供基础数据,为今后茶园杂草的综合防治提供研究基础。

不同年限黄金桂茶树土壤的自毒潜力分析

连作障碍（自毒作用）现象普遍存在于农业、林业、园艺生产中,国外众多学者在连作障碍上已做了大量的研究,而我国对连作障碍的研究起步较晚。连作易导致农作物产量下降,品质降低和病虫害加剧,已成为影响农业生产持续健康发展的重要问题。茶树是多年生作物,是否存在连作障碍？茶园土壤自毒潜力高低还鲜有报道。本研究以不同年限黄金桂茶园土壤为材料,探讨了不同年限茶园土壤的自毒潜力。

铜胁迫下不同茶树的生理响应及亚细胞水平铜分布特性

为了分析不同茶树对Cu胁迫的生理响应及组织亚细胞Cu分布特性,采用水培法,探讨铁观音、肉桂2种茶树在不同浓度Cu胁迫下,茶树根部、叶部生理响应及其亚细胞Cu分布特征,以期为重金属对茶树毒害机制和茶树对重金属的自我防御研究提供理论依据。结果表明,随着Cu胁迫浓度的增加,茶树根部、叶部SOD、POD、CAT活性呈现下降趋势,且肉桂对Cu胁迫的耐受性高于铁观音。相同浓度Cu胁迫下2种茶树不同组织亚细胞中的Cu含量根部大于叶片。正常条件下,2种茶树根部、叶部亚细胞组分中细胞器的Cu含量最高,当胁迫Cu浓度>0 mg/L、≤40 mg/L时,细胞溶质Cu含量最高,当胁迫Cu浓度>40 mg/L时,细胞壁Cu含量最高。Cu胁迫下,铁观音主要采取提高细胞溶质和细胞器中Cu离子含量来降低Cu离子毒害,而肉桂主要以提高细胞壁中Cu离子的结合率来降低Cu离子毒害,可见不同的茶树在Cu胁迫下所表现的解毒模式存在着一定差异。

谈共青联圩现浇砼护坡施工方法与质量控制

介绍了江西省德安县共青联圩共4标现浇筑砼护坡施工方法,以及如何控制施工质量.

水泥混凝土路面早期裂缝的产生原因及预防控制

经过对水泥混凝土路面早期裂缝的成因分析,介绍赣东大堤南昌县段南4、南7标堤顶公路施工所采取的预防和控制措施.

马蓝IGPS基因的克隆、表达分析及原核表达

吲哚-3-甘油磷酸合酶(indole-3-glycerol phosphate synthase,IGPS)是广泛参与生物体内色氨酸、生长素等吲哚化合物合成途径中重要的关键酶之一。为了研究BcIGPS在马蓝吲哚类生物碱合成中的作用,基于马蓝转录组数据,通过RT-PCR技术从马蓝中克隆得到IGPS基因序列,命名为BcIGPS;利用生物信息学分析BcIGPS序列特性;运用qPCR分析BcIGPS在马蓝不同器官及外源诱导处理下的时空表达情况;构建pET-32a-BcIGPS原核表达载体,并优化诱导表达条件。结果表明:BcIGPS(GenBank登录号:MT210517)全长为1176 bp,包含1个开放阅读框(ORF),编码392个氨基酸,具丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr)磷酸化位点31个,无跨膜结构,无信号肽,亚细胞定位于叶绿体中。BcIGPS含有product(indole)活性结构域和IGPS、TrpC特异性位点。qPCR分析结果显示,BcIGPS基因在不同器官的相对表达丰度依次为:叶>茎>花>根;其响应茉莉酸甲酯(MeJA)、脱落酸(ABA)、水杨酸(SA)、乙烯利(ETH)外源诱导信号的诱导,经MeJA和ETH处理后,分别在24 h和36 h最高,为初始水平的5.53、6.87倍;在SA处理下,BcIGPS表达响应最为强烈,呈先骤升后骤降的变化趋势,在12 h最高达初始水平的33.13倍;ABA处理后,其表达量变化不显著。所构建的pET-32a-BcIGPS原核表达载体在大肠杆菌BL21中表达,其最适条件为37℃、0.4 mmol/L IPTG培养3 h,BcIGPS重组蛋白主要以包涵体形式存在,且蛋白分子量与预测相符。

马红彪:在奉献中绽放芬芳

“对柑橘黄龙病病株数的底子掌握不清;对感染黄龙病的病株砍伐力度不够大;柑橘木虱统防统治还不到位;县本级财政安排的柑橘黄龙病防控专项资金偏少。”在永兴县十八届人大常委会会议上,县人大代表、永兴县湘成金属有限公司业务经理马红彪就柑橘黄龙病防治工作实事求是地指出问题。

监督,为了冰糖橙“治病”

产业振兴是乡村振兴的关健,只有产业振兴了,才能留住农村劳动力、增加农民收入、提升老百姓的幸福指数。永兴县人大常委会把助推冰糖橙产业发展作为助推乡村振兴的重点,作为为民办实事的重要举措。

动物源有机肥对茶树根际土壤酸度及微生物的影响

以腐熟发酵过的猪粪、牛粪、羊粪为材料,采用外源添加处理的方法,探讨不同用量动物粪便对茶树根际土壤酸度、微生物生物量及区系影响,以期为研究茶树根际土壤改良提供依据。结果表明,不同动物粪便处理后,能有效调节茶树根际土壤的酸度;随着处理动物粪便用量的增加,茶树根际土壤的微生物生物量碳、微生物呼吸强度、微生物生物量氮及细菌、放线菌、氨化细菌、亚硝酸细菌、反硝化细菌、好气性自生固氮菌、纤维素分解菌的数量呈现先上升后下降的趋势,而真菌数量则相反;不同动物粪以猪粪用量1.5 kg/m2,牛粪、羊粪用量2.0 kg/m2时对土壤微生物环境的改善程度最佳;不同粪便处理对茶树根际酸度的调节作用及对土壤微生物数量影响最强时,以猪粪最高、羊粪次之、牛粪最低。上述结果表明动物粪便的使用能有效调节茶树根际土壤的酸化,改善土壤微生物生存环境,提高土壤微生物活性。

马蓝BcASB基因的克隆、生物信息学及表达分析

目的克隆马蓝邻氨基苯甲酸合成酶(anthranilate synthase,AS)BcASB基因(GenBank登录号QCF61930.1),并对其进行生物信息学分析、时空表达分析以及检测马蓝有效成分靛蓝、靛玉红积累量随时间的变化。方法通过RT-PCR和RACE技术,克隆BcASB基因全长,应用生物信息学的方法对该基因编码的蛋白进行各种理化性质测定,二级结构和三级结构预测分析以及对核苷酸和氨基酸序列进行比对;利用qRT-PCR技术检测BcASB基因在马蓝不同器官(根、茎、叶)中的表达模式以及在外源诱导子茉莉酸甲酯(methyl-jasmonate,MeJA)、脱落酸(abscisic acid,ABA)、水杨酸(salicylic acid,SA)和乙烯利(ethylene,ETH)诱导下的表达情况;同时运用HPLC测定吲哚类生物碱靛蓝、靛玉红含量的变化情况。结果克隆获得BcASB基因,开放阅读框(open reading frame,ORF)长度为765 bp,编码256个氨基酸,生物信息学表明,该蛋白不含信号肽且无跨膜区,亚细胞结构定位于叶绿体;qRT-PCR检测结果表明,BcASB基因在马蓝叶和茎中的表达量较高,在根中表达较低;BcASB基因可响应不同外源诱导处理,而影响其转录;HPLC检测结果显示靛蓝、靛玉红含量有着明显的变化。结论成功克隆马蓝邻氨基苯甲酸合成酶BcASB基因,为进一步阐释该基因在马蓝吲哚类生物碱合成途径的作用及表达调控研究奠定基础。

马蓝色氨酸合成酶基因的克隆及表达分析

目的克隆马蓝Baphicacanthus cusia吲哚类生物碱合成途径的色氨酸合成酶(tryptophan synthase,TSB)基因,命名为BcTSB(GenBank登录号AYM45644.1),对其生物信息学和表达进行分析。方法基于前期马蓝转录组数据库,获得BcTSB基因开放阅读框(ORF),运用生物信息学手段对基因功能做出初步预测,构建pET32a-BcTSB原核表达载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测马蓝不同组织(根、茎、叶)中TSB表达水平。结果克隆的BcTSB基因ORF长度为1452bp,编码483个氨基酸,生物信息学预测为亲水性蛋白,定位于叶绿体,该蛋白相对分子质量为51 665.89,pET-32a载体包含18 000的标签。SDS-PAGE分析在70 000处出现目的蛋白条带,与理论预期值大小一致。qRT-PCR分析显示BcTSB基因在马蓝不同组织中均有表达,且在茎中的表达量最高。结论通过对BcTSB基因的克隆及表达分析,为进一步研究该基因功能及调控奠定了实验基础。

马蓝转录组中SSR位点信息特征分析

本研究利用Illumina HiSeqTM 2000对马蓝转录组进行高通量测序,使用软件MicroSAtellite(MISA)分析转录组中的SSR位点信息。通过组装马蓝转录组数据获得了51381条Unigene,并对获得的Unigene进行SSR检测,共检测到8471个SSR位点,其分布在6782条Unigene中,出现的频率为16.49%。SSR中以二核苷酸和三核苷酸重复类型为主,其中二核苷酸以重复单元AT/TA为主,占18.14%,其余类型的重复单元相对较少。SSR所在序列功能注释结果显示在Nr和SwissProt中分别有5932和4285条序列被注释,同时SSR所在序列还被注释到47个GO分类,25个KOG分类和29个KEGG代谢通路中。通过设计、筛选,共获得5819对引物组合,随机挑选的18对引物中有13对引物扩增出符合预期大小的条带。马蓝SSR出现的频率高,重复种类丰富,为研究马蓝遗传多样性、基因定位和品质改良等提供了科学依据。

人大持续监督,守护“水杯子”安全

永兴县人大常委会通过持续监督,推进县城区引水工程建设,加强水源地环境保护,强化水质安全保障,确保全县人民饮水安全。3月27日,永兴县十七届人大常委会第三次主任会议听取了县人民政府关于县城区饮用水源保护工作情况的报告。针对报告中涉及的水源保护地——青山垅水库库区存在人工养鱼、灯光扑鱼及污水直排等问题。

马蓝邻氨基苯甲酸合成酶基因的克隆及生物信息学分析

邻氨基苯甲酸合成酶(AS)由α亚基和β亚基组成,是存在于植物细胞中催化生成色氨酸的复合酶。本研究采用RT-PCR技术,从野生马蓝中克隆得到一个编码邻氨基苯甲酸合成酶α亚基同源基因的cDNA片段,命名为BcASA(GenBank登录号:MH976794)。序列分析表明,该cDNA片段全长1110 bp,利用NCBI ORF Finder预测显示包含一个915 bp的开放阅读框,预测编码一条含370个氨基酸的多肽,分子量约为41.29 kD,理论等电点为9.38。生物信息学分析表明,BcASA属于定位在叶绿体中的亲水性蛋白,二级结构主要为α螺旋。系统发育分析表明,野生马蓝BcASA蛋白与芝麻的AS在进化上种属关系最近。本研究结果可为研究邻氨基苯甲酸合成酶在催化马蓝有效成分形成过程中的作用及其代谢调控提供实验依据。