肺癌中SOX30基因对PKP2基因表达的调控

目的:探讨 SOX 30基因与 PKP 2基因在肺癌中的表达调控关系。方法:利用TCGA数据库数据分析 SOX 30与 PKP 2在肺癌中的相关性,利用JASPAR数据库分析 PKP 2启动子区SOX30蛋白转录结合位点;利用qRT-PCR检测HBE、A549、H460、H520、H358、H1975、SPC-A1、95D、LTEP等细胞中 PKP 2的mRNA表达情况,采用qRT-PCR及Western Blot检测H460及H520细胞转染SOX30表达载体后对PKP2的mRNA与蛋白表达的影响,用qRT-PCR检测 SOX 30基因敲除小鼠肺组织中 PKP 2 mRNA表达情况。结果: TCGA数据库数据分析表明在肺腺癌中 SOX 30与 PKP 2表达呈正相关( n =576, r =0.156, P =0.000), PKP 2启动子区存在多个SOX30转录结合位点;肺癌细胞系中 PKP 2 mRNA表达下调,与 SOX 30基因表达趋势一致;过表达 SOX30 后,H460细胞中PKP2 mRNA及蛋白水平显著上调( P <0.05),而H520细胞中PKP2 mRNA及蛋白水平未见显著变化;敲除 SOX 30后,小鼠肺组织中 PKP 2 mRNA表达水平显著下调。结论: SOX 30是调控 PKP 2表达的关键分子, SOX 30 -PKP 2可能在肺腺癌中发挥重要作用。

SOX30基因调控桥粒基因DSC3抑制肺腺癌的增殖与迁移

目的:探讨SOX30基因对桥粒基因DSC3的表达调控及其在肺腺癌发生中的作用。方法:利用基因功能富集分析(GO分析)获取SOX30调控的重要基因及通路;利用JASPAR数据库预测DSC3启动子区SOX30蛋白结合位点;利用TCGA数据库分析SOX30与DSC3在肺癌中表达的相关性,并用逆转录PCR检测A549细胞高表达SOX30后对DSC3 mRNA表达的影响;同时检测SOX30基因敲除小鼠肺组织中DSC3 mRNA的表达情况;利用平板细胞集落形成实验及细胞划痕愈合实验分析DSC3是否参与SOX30对肺腺癌细胞的增殖与迁移抑制。结果:GO分析显示SOX30基因与黏着斑、锚定连接、黏着连接等细胞连接基因表达显著相关;DSC3启动子区存在多个SOX30蛋白结合位点;SOX30与DSC3在肺腺癌中表达正相关(r=0.154,P=0.000);高表达SOX30后,A549细胞中DSC3 mRNA水平较对照组显著上调(P<0.05);敲除SOX30基因后,纯合子(SOX30-/-)小鼠肺组织中DSC3 mRNA水平显著低于杂合子(SOX30+/-)及野生型(SOX30+/+)小鼠(P均<0.01);在高表达SOX30后的A549细胞中,干扰DSC3的表达后将显著减弱SOX30对A549细胞的增殖和迁移抑制(P均<0.05)。结论:SOX30是调控DSC3表达的关键分子,DSC3是SOX30发挥抑癌功能的重要下游基因,SOX30-DSC3调控可能在肺腺癌发生发展中起重要作用。

草甘膦致生殖细胞毒性效应及机制的初步研究

目的研究草甘膦对小鼠精母细胞(GC-2)毒性效应及机制。方法倒置显微镜和透射电镜观察草甘膦处理后GC-2细胞形态和超微结构;流式细胞仪检测草甘膦处理对GC-2细胞凋亡及细胞周期的影响;Western blot法检测凋亡及周期相关蛋白的表达水平。结果草甘膦能显著抑制GC-2细胞增殖,并导致细胞内质网和线粒体结构损伤;草甘膦对细胞增殖抑制主要与G1期周期阻滞和诱导GC-2细胞凋亡有关。蛋白质表达分析表明,cleaved-caspase3蛋白表达水平明显升高,提示草甘膦通过激活caspase3诱导GC-2细胞凋亡;同时,细胞周期负调控因子p21蛋白的表达上调,正调控因子Cyclin D1以及Cyclin E表达受到抑制,提示相关蛋白参与了细胞G1期阻滞。结论草甘膦对生殖细胞具有明显的毒性效应并与细胞周期和细胞凋亡调控相关。