噬菌体重组蛋白RecT介导的地衣芽孢杆菌重组系统的构建

地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)及其近缘菌株在工业、农业和医药方面具有广泛的应用。当前菌种选育的主要方式为自然筛选和传统诱变,但由于缺乏高效的基因编辑工具,地衣芽孢杆菌应用的进一步拓展受到限制。本研究鉴定的来源于芽孢杆菌噬菌体(Bacillus phage 049ML001)的重组蛋白RecT是具有潜力的重组酶,利用鼠李糖诱导启动子P_(rha)构建了重组酶条件表达的同源重组系统。进一步通过优化重组酶的作用条件提高了该系统的重组效率。结果表明,鼠李糖诱导浓度、时间以及菌株传代次数是影响重组效率的重要因素。野生菌转化重组质粒,生长8 h后添加1.5%的鼠李糖诱导重组酶RecT表达,继续培养24 h、传代3次后重组效率达到16.67%,与之相比,原始菌无法实现重组。本研究基于重组酶RecT条件表达的重组系统显著提高了地衣芽孢杆菌的重组效率,为构建基因工程菌株和细菌生理学研究提供了有效的基因编辑工具。