干扰RNA沉默HIF-1α在缺氧状态下对骨肉瘤细胞VEGF表达的影响

背景与目的:研究表明H IF-1α是肿瘤适应低氧微环境、诱导血管新生的一个主要调控因子。本研究通过观察体外低氧培养条件下骨肉瘤细胞系SaOS-2中H IF-1α和VEGF的表达,探讨H IF-1α在骨肉瘤缺氧激活血管新生调控途径中的作用。方法:CoCl2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境。半定量RT-PCR和免疫组化法分别检测不同缺氧时相中H IF-1α和VEGF在m RNA和蛋白水平的表达。构建针对H IF-1α的短发夹状小干扰RNA真核表达载体并转染SaOS-2细胞。免疫印迹沉淀观察转染后H IF-1α的基因沉默效果,RT-PCR和ELISA双抗体夹心法检测H IF-1α短基因沉默后SaOS-2细胞中VEGF的变化。结果:低氧条件下,SaOS-2细胞H IF-1αm RNA水平稳定,蛋白表达显著升高;而VEGF m RNA和蛋白的表达均显著升高。构建的H IF-1α短发夹状小干扰RNA表达载体转染SaOS-2细胞后能够显著下调H IF-1α基因的表达,同时VEGF基因的表达也受到明显抑制。结论:缺氧促使SaOS-2细胞H IF-1α在蛋白水平表达升高,H IF-1α通过转录激活VEGF的机制促进骨肉瘤缺氧状态下的血管新生。

鼠胚成骨细胞的原代培养与鉴定

目的探讨经济、高效的原代成骨细胞培养方法,为进一步的实验研究奠定基础。方法孕龄19天的昆明孕鼠(KM),无菌条件下剖腹取出胎鼠,然后取胎鼠的颅盖骨,剔净、漂洗、剪碎。用0.25%胰蛋白酶消化10分钟,终止消化后,将碎骨块接种于培养瓶中培养,通过相差显微镜、透射电镜观察,并用碱性磷酸酶染色、骨钙素免疫组化染色和钙结节茜素红染色等方法对所获得的细胞进行鉴定。结果所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态特征,碱性磷酸酶染色、骨钙素染色和钙结节染色均呈阳性。结论改良的组织块培养法可在较短时间内获得大量成骨细胞,所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态和功能。

骨膜剥离加髓腔破坏建立股骨头坏死模型的可行性研究

目的探讨骨膜剥离加髓腔破坏建立股骨头坏死(ONFH)动物模型的可行性.方法成年杂种狗12只(13～17kg),手术剥离其左侧股骨近端约4cm范围内的全部骨膜及周围组织,并于股骨颈中下1/3处用直径1mm的钻头钻孔,破坏此处髓腔松质骨成分,皮质骨保持完整;右侧做正常对照.采用股动脉数字减影血管造影(DSA)技术检测、比较手术前后股骨头局部的血液循环变化,并分别于术后1、4、8和16周获取股骨头标本,行病理切片检查.结果术后DSA图像显示髋关节局部出现多量新生血管由股骨颈、髓内等处再生进入有坏死改变的股骨头内.四组实验侧股骨头均出现不同程度ONFH表现,第16周股骨头标本示轮廓改变,轻度塌陷外观.结论骨膜剥离加髓腔破坏法能成功建立ONFH模型,可用于ONFH的发生、发展机制及治疗的研究.

应用脱钙骨基质和硫酸钙颗粒治疗骨缺损的初期结果

目的探讨使用骨移植替代物脱钙骨基质（DBM）和硫酸钙颗粒（OSTEOSET）治疗骨缺损的疗效。方法对同期手术治疗的52例骨缺损患者的缺损处,分别于术后第1、4、8周及3、6、12个月进行随访并摄X线片直至骨缺损愈合。统计分析患者的临床资料、X线片辅助分析骨缺损修复程度和并发症。结果随访8-12个月,植骨术后6、12个月分别有95%和99%患者的骨缺损显示有明显的新骨形成,修复水平为60%-100%。并发症为3例（5.77%）,经换药后治愈,未发生骨缺损不愈合。结论DBM和OSTEOSET在骨愈合早期可加速骨缺损的修复,并可作为新鲜自体髂骨的替代物。

朗格汉斯细胞组织细胞增生症3例临床分析

目的探讨朗格汉斯细胞组织增生症的临床特点及治疗方法。方法回顾分析3例朗格汉斯细胞组织细胞增生症并复习相关文献。结果 2例患者以头部肿物为首发症状,手术切除病灶后经过化疗及免疫治疗存活至今,另1例患者经过颈椎穿刺活检确诊,未行化疗,死于并发症。结论朗格汉斯细胞组织细胞增生症是一组原因不明的罕见疾病,其病理基础是单核巨噬细胞系统中朗格汉斯细胞增殖,由于病变年龄、细胞增生程度、累及组织和器官的不同,其症状表现不一样,预后也不一样。

自固化磷酸钙人工骨(CPC)修复骨肿瘤骨缺损的初步临床应用

目的评价自固化磷酸钙人工骨(CPC)治疗骨肿瘤骨缺损早期临床效果。方法对23例骨肿瘤患者行病灶刮除、国产CPC填塞修补术。患者年龄8～45岁,平均24.3岁。术后血液免疫学及X线检查,随访1～2年。结果CPC固化时间在15～30min,平均20min。临床使用后未见明显局部和全身不良反应,6个月后逐渐出现降解。随访X线片示CPC与宿主骨直接愈合,与原骨界面间接触紧密无间隙,骨缺损处解剖形状完全恢复。结论自固化磷酸钙人工骨(CPC)生物相容性良好,是肿瘤性骨缺损修复的理想材料。

酸性介质作用下水泥混凝土骨料的选择问题

水泥混凝土是非耐酸材料,在酸性介质作用下,水泥石会与酸起化学反应而遭受腐蚀。在多数酸性液体作用下混凝土需要采取表面防护措施,但是在浓度不高和腐蚀性不强的酸性气体或液体作用下,质量优良的混凝土可以不采取表面防护。但不论在何种情况下,都有一个混凝土与酸直接接触的问题。关于在酸性介质作用下对混凝土的要求,国内外比较一致的观点是:重点在提高混凝土的密实性和选择水泥品种,但是在粗骨料的选择上.除了要求致密性而外,对骨料的成分存在着一些不同的观点。一种意见认为必须采用耐酸性好的火成岩骨料,另一种意见认为不必强调骨料的耐酸性能,可以选择致密的花岗岩或石灰岩等骨料。

人工颈椎间盘假体置换治疗颈椎病的早期临床研究

目的探讨初期应用人工颈椎间盘假体治疗颈椎病的疗效。方法应用Bryan人工椎间盘假体置换治疗脊髓型颈椎病和神经根型颈椎病患者18例(22个节断),术前、术后进行JOA评分比较评价早期治疗效果;术后摄置换节段前屈后伸位,左右侧屈位X线片,观察稳定性和植入节段的活动度。结果随访16～36个月,平均20个月。无伤口感染及假体脱位病例,患者JOA评分由术前平均9.0(7～11)分上升至术后平均15.0(13～17)分,术后3个月置换节段前屈后伸活动范围平均4.8°(4.1°～5.5°),左右侧屈活动范围分别为3.7°(3.4°～4.0°)和3.6°(3.3°～3.9°)。X线片显示颈椎稳定性好,运动功能无明显丢失。结论应用人工颈椎间盘假体置换治疗颈椎间盘疾病早期效果良好。

新型防腐蚀地面及其应用现状

介绍了聚合物整体地面、聚合物砂浆地面优点、耐蚀性能及其在国内的应用现状。

超氧化物歧化酶清除自由基对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的 建立小鼠心脏缺血再灌注损伤模型,分别给予两种超氧化物歧化酶（SOD）类似物进行干预治疗,观察心肌组织缺血再灌注以及缺血再灌注后心脏的功能状态.方法 建立小鼠心脏缺血再灌注模型,分别在灌注前5 min给予小鼠SOD类似物及磷酸盐缓冲液（PBS）.通过Evans蓝和氯化三苯基四氮唑（TTC）双染色测定梗死心肌面积,激光多普勒测定心肌缺血再灌注后心肌血流量和心功能变化,观察小鼠缺血再灌注心脏损伤变化.结果 采用小鼠心脏冠状动脉左前降支结扎,成功构建小鼠心肌缺血再灌注损伤模型,模型成功率达96％.采用SOD类似物在缺血再灌注前进行干预,可明显减少小鼠心脏再灌注过程中心功能损伤,其中心肌梗死面积由65％下降至37％,平均动脉血压（MABP）平均变化率由33.3％降低为18.9％,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 氧自由基分子是心肌缺血再灌注损伤的关键分子,SOD类似物可以通过清除氧自由基来发挥对心肌缺血再灌注损伤的保护作用.

Survivin反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞系增殖和凋亡的影响

目的 观察Survivin基因反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法 靶向Survivin基因的反义寡核苷酸经脂质体介导转染骨肉瘤MG 63细胞系,倒置显微镜观察转染后细胞形态学变化、半定量RT PCR检测Survivin基因mRNA的表达,噻唑蓝 (MTT)法检测细胞的增殖情况,吖啶橙荧光染色法观察细胞凋亡情况。结果 转染反义寡核苷酸后,MG 63细胞中Survivin基因mRNA水平表达显著下降;细胞增殖受到显著抑制,抑制率达 61%;倒置显微镜显示细胞变圆,漂浮细胞增多;吖啶橙染色显示转染组细胞出现明显核碎裂等凋亡改变。结论 Survivin基因的反义寡核苷酸可以显著抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡。

血管内皮生长因子基因稳定转染兔骨髓基质干细胞的研究

目的检测人血管内皮生长因子（VEGF）基因稳定转染对兔骨髓基质干细胞（BM—SC）VEGF表达的影响。方法分离并培养兔骨髓基质干细胞，利用脂质体介导pcDNA3．1-VEGF165转染兔BMSC，G418筛选稳定表达pcDNA3．1-VEGF165的细胞克隆，RT—PCR、Westernblot法检测转染前后细胞中VEGFl65mRNA和蛋白的表达。结果通过筛选获得了稳定表达pcDNA3．1-VEGF165的细胞克隆。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot结果显示：稳定转染组BMSC中可检测到VEGF165mRNA和蛋白的表达，空白和空载体组未见VEGF表达。结论pcDNA3．1-VEGF165载体转染的兔BMSC可稳定表达外源性VEGF165mRNA和蛋白，可作为治疗骨缺损和骨缺血性坏死研究的种子细胞。

富血小板血浆和线性高密度聚乙烯支架材料对大鼠脂肪干细胞成骨分化的影响

目的 观察大鼠脂肪干细胞在向成骨细胞分化过程中富血小板血浆（PRP）的作用及其与线性高密度聚乙烯（Medpor）支架材料的生物相容性.方法 酶消化法获得脂肪干细胞,将大鼠脂肪干细胞与经PRP孵育的Medpor支架材料复合培养,观察PRP对大鼠脂肪干细胞向成骨细胞分化的影响.结果 酶消化法能成功获得大鼠脂肪干细胞,PRP干预组脂肪基质细胞（ADSCs）的增殖率达33.3％,对照组为8.9％. PRP可以显著增加ADSCs的分化增殖（P＜0.05）.环境扫描电镜观察,脂肪干细胞能在支架上充分的附着伸展.结论 大鼠脂肪干细胞的成功分离诱导分化,为骨组织工程提供了新的种子细胞来源,PRP是促进该细胞成骨细胞分化的有效的细胞因子组合,Medpor材料可作为骨组织工程的支架材料.

富血小板血浆通过调节细胞周期抑制蛋白p27促进大鼠脂肪干细胞成骨分化

目的 观察富血小板血浆（PRP）通过调节细胞周期蛋白p27表达,促进脂肪干细胞（ADSCs）向成骨细胞分化过程中的具体机制.方法 酶消化法获得大鼠ADSCs,观察PRP对大鼠ADSCs向成骨细胞分化的影响.流式细胞仪检测PRP作用与ADSCs对细胞周期和细胞周期蛋白表达的影响,Western blot法检测细胞周期蛋白表达的变化.结果 PRP干预组ADSCs增殖率为41.0％,空白对照组增殖率为7.4％.S期ADSCs的比例由诱导前的26.5％提高到67.9％.结论 PRP通过下调细胞周期抑制蛋白,提高ADSCs的增殖和分化率,促进ADSCs的成骨分化.

前后联合入路切开复位内固定治疗Ruedi-Allg（o）werⅢ型pilon骨折

目的 探讨外移前内侧入路联合后外侧入路延期切开复位胫骨远端锁定加压钢板固定治疗Ruedi-Allg（o）werⅢ型pilon骨折的手术时机及近期临床疗效.方法 回顾性分析2008年3月至2013年5月采用外移前内侧入路联合后外侧入路切开复位内固定治疗27例Ruedi-Allg（o）werⅢ型新鲜闭合性pilon骨折并获得随访的患者资料,男21例,女6例;年龄22～64岁,平均39.5岁;坠落伤14例,车祸伤8例,重物砸伤5例;受伤至手术时间11～19d,平均14.3 d.采用美国足踝外科协会（American Orthopaedics Foot and Ankle Society,AOFAS）踝与后足的主观评分标准评价踝关节功能.结果 27例患者手术时间120～150 min,平均140 min;出血量100～300 ml,平均210 ml;术后3例患者前内侧切口发生延迟愈合,愈合时间分别为18d、20 d和21d,其余切口愈合时间12～14 d.27例患者随访时间12～26个月,平均18.6个月.末次随访时,骨折均愈合,愈合时间16～24周,平均18.2周;其中2例因高龄、骨折块粉碎移位严重而发生延迟愈合,经延长下地负重时间后,分别于术后20、24周获得骨性愈合;6例X线片示创伤性骨关节炎,其中4例较长距离行走后出现踝关节中度疼痛,未予处理;2例行走后出现踝关节明显疼痛者口服非甾体类消炎镇痛药后症状明显缓解;无一例发生深部感染.AOFAS踝与后足评分为46～96分,平均（84.3±15.7）分,其中优9例,良12例,可4例,差2例,优良率为78％（21/27）.结论 外移前内侧入路可同时暴露胫骨内侧柱和外侧柱骨折,避免术中对切口软组织过度牵拉和剥离,利于术中复位固定骨折块;延期切开复位Ruedi-Allg（o）werⅢ型pilon骨折可大幅降低术后切口皮瓣坏死、伤口愈合困难或感染等严重并发症的发生.

淫羊藿苷促进入骨髓间充质干细胞成软骨分化的研究

目的探讨应用淫羊藿苷促进人骨髓间充质干细胞（hMSCs）成软骨分化的可行性及效果。方法体外分离培养hMSCs，取第3代细胞实验。将hMSCs分别用无血清高糖培养基（H．DMEM）和含1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5mol／L淫羊藿苷的软骨诱导液（CM）诱导，显微镜下观察细胞形态变化，噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞的增殖。以5×10 9/L的细胞密度离心构建微团，诱导培养3周。逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测各组蛋白多糖和Ⅱ型胶原mRNA的表达。免疫组织化学、甲苯胺蓝染色检测Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达。结果5组微团分别由无血清H．DMEM、含1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5mol／L淫羊藿苷的CM诱导3周后，除H—DMEM组无Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达外，其他各组Ⅱ型胶原蛋白和蛋白多糖的表达呈浓度依赖性增加，ImageProPlus6．0软件测得各组Ⅱ型胶原平均吸光度（A）值分别为0．0214±0．0035、0．1182±0．0105、0．1886±0．0184、0．2903±0．0261、0．3476±0．0287，各组差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论淫羊藿苷能促进hMSCs成软骨分化，软骨分化程度呈浓度依赖性增加。

骨孤立性浆细胞瘤18例临床分析

目的通过总结分析骨孤立性浆细胞瘤（SBP）的临床特点及治疗方法来提高其诊治水平。方法回顾分析5家医院1999年至2009年收治的18例SBP的临床资料，对其临床特点及治疗疗效进行总结。结果18例SBP患者年龄35～78岁，平均年龄54．2岁，男女比2．6：1。通过随访治疗1一10年，采用化放疗治疗的10例患者有8例生存，2例死于进展为多发性骨髓瘤（MM），单纯化疗或单纯放疗的8例患者中有1例因化疗相关并发症死亡，2例死于进展为MM。全部患者目前共有11例处于持续缓解状态（CCS），2例因进展为MM在积极治疗中，平均CCS时间为47-3个月。结论SBP是低度恶性肿瘤，化疗和放疗是其治疗的主要手段，化放疗相结合预后满意，部分患者可转化为MM。

后路经单侧椎弓根椎体次全切减压植骨融合内固定治疗严重胸腰段椎体骨折

目的探讨采用后路经单侧椎弓根椎体次全切减压植骨融合内固定治疗严重胸腰段椎体骨折的临床疗效。方法对自2009年3月至2012年6月采用后路经单侧椎弓根椎体次全切、椎管减压、椎间植骨融合内固定治疗的11例严重胸腰段椎体骨折患者资料进行回顾性分析，男10例，女1例；年龄20-42岁，平均31．1岁；骨折AO分型：B1型2例，B2型3例，c2型6例，Gaines前柱稳定性评分〉6分；所有患者均有不同程度的神经功能障碍。术后随访骨折复位、植骨愈合和神经功能恢复情况。结果本组患者手术时间200～330min，平均243．2min；出血量800～1600mL，平均1023．3mL。无术后神经症状加重或出现新的神经症状，3例患者术后出现脑脊液漏，经拔管后加压包扎、床尾抬高自愈。所有患者术后随访12～30个月，平均18．3个月。1例患者术后6个月出现尾端一侧固定螺栓脱落，无不适，未做特殊处理。术后X线片示骨折复位满意，植骨位置良好，CT片示椎管内无骨块占位；植骨融合时间3～6个月，平均4．3个月。末次随访时伤椎椎体高度无丢失。术后脊髓完全性损伤患者脊髓功能无恢复，Frankel分级仍为A级；1例脊髓不完全损伤患者由Frankel分级B级恢复至D级；8例圆锥损伤患者7例恢复至E级，1例恢复至D级；1例单纯马尾神经损伤者，症状有所恢复。结论采用后路经单侧椎弓根椎体次全切、椎管减压、锥间植骨融合内固定治疗严重胸腰段椎体骨折可满意复位骨折，彻底解除椎管内压迫，很好的重建脊柱稳定性，是一种可选择的有效方法。

基于三维CT的模拟手术重建高位脱位髋关节全髋置换髋臼

目的探讨通过模拟手术，准确重建髋臼。方法收集28例高位脱位来我院行全髋父节置换的患者资料，共32髋。通过MIMICS软件对患者的CT扫描数据进行三维重建，进行模拟手术重建髋臼臼杯。记录臼杯位于满意位置时旋转中心的坐标，计算不同前倾角时臼杯的骨性覆盖率。结果为了获得更好的髋臼方位，在重建髋臼臼杯时需要向内挫磨（4．18±2．59）mm，向后（4．61±2．59）mm，向上（2．58±2．08）mm。臼杯前倾角为5。时覆盖率为（84±7）％；前倾角为15。时覆盖率为（88±4）％；25。时为（92±7）％；35。时为（93±8）％。每一个臼杯均可以获得大于70％的覆盖率。髋臼的骨性覆盖率随臼杯的前倾增加而增加。结论我们发现高位脱位臼杯重建时可以适当内移、后移并轻微上移旋转中心。根据患者的个体情况进行精确的术前设计，术中准确地实施，所有的臼杯均可以获得满意的位置、方向和覆盖率。