吗啡预处理对NGF诱导神经细胞TRPV1通道敏化及ERK蛋白活化的影响

目的探讨吗啡预处理(morphine preconditioning,MPC)对神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导的神经细胞辣椒素受体(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)敏化,以及细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)活化的调控作用。方法原代培养的10日龄SD大鼠T2-T8节段背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)神经元及大鼠嗜铬瘤细胞(pheochromocytoma cell,PC12)神经细胞,分别随机分为对照组(C组)、NGF敏化组(NGF组)、吗啡预处理组(MPC 0.3、1.0、3.0μmol·L^(-1)组)。经抗神经元特异性烯醇化酶(neuronal specific enolase,NSE)抗体鉴定DRG神经元后,用吗啡、NGF及辣椒素对两种细胞进行处理,模拟在体MPC对经历心肌缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,IRI)的T2-T8节段DRG神经元的影响。即刻采用单细胞膜片钳技术检测辣椒素诱发的DRG神经元内向电流;Western blot法检测PC12细胞TRPV1、磷酸化TRPV1(phosphorylated TRPV1,p-TRPV1)及pERK相对表达水平。结果 DRG神经元细胞状态良好,神经元特异性标志物NSE染色阳性;与对照组比较,NGF组的辣椒素诱发内向电流幅度增大(P<0.05),而MPC可以抑制电流幅度增大(P<0.05);NGF孵育可使TRPV1、p-TRPV1及p-ERK蛋白相对表达量上调(P<0.05),而MPC对表达上调的TRPV1、p-TRPV1及p-ERK蛋白具有抑制作用(P<0.05)。结论 MPC可以抑制NGF敏化的神经细胞TRPV1通道电流,其机制可能与降低TRPV1蛋白表达量及TRPV1、ERK蛋白磷酸化水平有关。