小鼠肝枯否细胞和肝星状细胞分离提取方法的比较及优化

目的 探讨小鼠肝枯否细胞和肝星状细胞的提取及纯化方法,为小鼠原代肝非实质细胞分离提取方法学提供参考和建议。方法 以体内胶原酶灌注消化为基础,使用Percoll、OptiPrep等不同的试剂和浓度梯度分别提取C57BL/6小鼠的肝枯否细胞和肝星状细胞,并通过流式细胞仪、免疫荧光等方法验证纯化细胞的纯度。结果 两层Percoll法提取枯否细胞和两层OptiPrep法提取肝星状细胞可行,纯度可达90%以上,细胞得率为1~2×10~7/肝,细胞存活率在90%以上。细胞原代培养48 h后,枯否细胞F4/80阳性细胞、肝星状细胞α-SMA阳性细胞均达90%以上。结论 小鼠肝中枯否细胞和肝星状细胞的分离提取方法完善可靠且具有成本效益和可重复性。