槲皮素干预肾间质成纤维细胞糖酵解抗肾间质纤维化机制研究

目的:从干预肾间质成纤维细胞的糖酵解角度研究槲皮素(Que)在体内外抗纤维化的作用和机制。方法:体内实验,小鼠分组给药,剖取肾脏,称重并进行组织病理学检查和生化指标检测;体外实验,不同试剂处理大鼠正常肾成纤维细胞(NRK-49F细胞),提取蛋白,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测NRK-49F细胞活化指标α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)等蛋白的表达情况;采用荧光法考查Que对转化生长因子-β(TGF-β1)和表皮细胞生长因子(EGF)诱导的NRK-49F细胞葡萄糖摄取的影响;乳酸检测试剂盒检测不同实验组细胞的乳酸含量;荧光定量PCR法检测Que对TGF-β1和EGF诱导的NRK-49F细胞糖酵解关键酶己糖激酶(HK2)、磷酸果糖激酶1(PFK1)和肌肉丙酮酸激酶同工酶2(PKM2)的mRNA的影响。结果:与UUO组比较,Que给药组肾脏组织形态结构均有不同程度的缓解,与抑制糖酵解有关,且小鼠血清中尿素氮(BUN)水平和血肌酐(Scr)水平呈现明显的下降趋势;NRK-49F细胞中乳酸生成和葡萄糖摄取量逐渐减少,Que对TGF-β1和EGF诱导的RIF的糖酵解关键酶的mRNA水平逐渐降低,并与PKM2有关。结论:Que能够抑制NRK-49F细胞PKM2酶活性和糖酵解,并减少TGF-β1诱导的肌成纤维细胞活化。

参芪扶正注射液干预低糖介导的免疫抑制微环境作用及其机制研究

目的:探讨参芪扶正注射液(Shenqi fuzheng injection,SFI)干预肿瘤免疫作用及初步分子机制研究。方法:采用B16-PKM2-OE建立低糖肿瘤微环境动物模型;采用ELISA试剂盒检测白细胞介素-2(IL-2),干扰素-γ(IFN-γ),CD40L和转化生长因子-β1(TGF-β1)的水平;采用Western blot法检测CD4^(+)T细胞葡萄糖转运蛋白(Glut-1)和糖酵解关键酶(HK、PFK和PK)的表达。结果:试剂盒检测结果显示,SFI可以提高肿瘤组织中IL-2、IFN-γ、CD40L水平,降低TGF-β1的水平。Western blot法检测结果发现,SFI能够促进CD4^(+)T细胞细胞膜表面Glut-1蛋白的表达,同时呈剂量依赖性上调糖酵解关键酶的表达。结论:SFI能够升高肿瘤组织中的IL-2、IFN-γ和CD40L水平并降低TGF-β1水平,同时增加肿瘤组织里活化CD4^(+)T细胞的数量,促进CD4^(+)T细胞的糖酵解,表明SFI能够改善肿瘤免疫微环境。