流感复合多表位疫苗的设计及小鼠免疫研究

鉴于目前出现了多种亚型禽流感病毒共存的局面，研究多价流感疫苗具有重要意义。根据各表位的免疫学特性，结合分子生物学信息软件的模拟功能，以H3、H9亚型流感病毒的HA抗原表位、流感病毒的其他主要抗原（NP、NA、M）表位的基因为基础，再附以Kozak序列和适当的酶切位点，设计并合成大小为765bp的复合多表位基因盒-Epi。将Epi基因克隆入真核表达载体pIRES1neo中，构建DNA重组体pIR—Epi；将H7HA、Epi、H5HA基因以融合表达方式克隆到pIRES1neo中，构建了DNA重组体pIRE—H57一Epi。以上述构建的DNA重组体与鸡痘病毒重组株对BALB／c小鼠进行免疫接种后，检测体液与细胞免疫指标。研究结果表明，流感病毒复合多表位DNA重组体pIRE—H57-Epi、pIRE—Epi免疫组小鼠均能产生针对H3亚型流感病毒的特异性抗体，抗体效价（1：1600～1：64003低于灭活疫苗免疫组（1：12800），但均高于其他对照免疫组（P〈0．01）。pIRE—H57-Epi免疫组抗H5、H7HA抗体效价分别为1：12800和1：6400，均高于其他免疫组（P〈0．05）。pIRE—Epi免疫组抗H5、H7HA抗体效价（1：200，1：100）较低，与其他对照免疫组差异不显著。pIRE—H57-Epi与pIRE—Epi免疫组抗H9亚型AIV的HA抗体效价（1：6400，1：3200）明显高于其他免疫组（P〈0．05）。与PBS对照组及空质粒pIRES1neo对照组比较，用所构建的重组体免疫的各试验组小鼠的T淋巴细胞亚类CD4^＋和CD8^＋的数量显著提高（P〈0．05）。pIRE—H57-Epi与pIRE—Epi试验组的CD4^＋与CD8^＋淋巴细胞的数量较灭活苗显著增多（P〈0．05），而各重组体免疫组之间差异不显著。此外，所有组的CD4^＋／CD8^＋比值均稳定在1．5～2．0，表明无异常免疫应答出现。ELISPOT检测小鼠脾淋巴细胞分泌IFN—γ斑点数实验结果表明，pIRE—H57-Epi、pIRE—Epi试验组的IFN—γ斑点数量（〉70）比灭活苗（〈40）显著增多（P〈0．05），而各重组体免疫组之间差异不显著。上述结果说明，所构建的DNA重组体有良好的免疫原性，为最终获得能同时预防多种亚型流感病毒的多价疫苗奠定了基础。

基于QFD/TRIZ集成理论的便携式食用菌装袋机创新设计

针对目前市场上的食用菌装袋机存在体积大、费用高、运输困难等问题,运用QFD/TRIZ集成理论,设计了一种便携式、自动化的食用菌装袋机,首先对目前食用菌装袋机进行用户需求的分析,确定了故障率、使用寿命、产品噪音、产品大小、价位合理、生产浪费、运输便利、占用空间、操作简单、安全可靠十个重要功能指标。质量屋将用户需求转化为产品设计的技术参数,发现三对技术矛盾分别为承受载荷量与耐久性,承受载荷量越大,耐久性越短;承受载荷量与外观设计规划,承受载荷量越大,外观设计越难;承受载荷量与可拆卸性,承受载荷量越大,可拆卸性越小。然后运用TRIZ理论对食用菌装袋机进行了一种创新设计。食用菌装袋机具备性价比高、体积小的特点。