ENO1蛋白及其相关活性位点缺失突变蛋白在昆虫杆状病毒表达系统中的表达与鉴定

目的:利用昆虫杆状病毒表达系统(昆虫BEVS)表达糖酵解酶α-烯醇化酶(ENO1)及其3种酶活性位点缺失突变的ENO1蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3,为后续宫颈癌的代谢治疗研究奠定基础。方法:利用分子克隆技术将优化后ENO1序列插入pFastBacTM1载体,获得含有目的基因的重组质粒pFastBac-ENO1。分别缺失ENO1发挥糖酵解酶功能的3个活性位点,进行优化后将其插入pFastBacTM1载体,获得3个活性位点缺失的重组质粒pFastBac-M1、pFastBac-M2和pFastBac-M3。通过转座、转染后获得重组杆状病毒rBV-ENO1、rBV-M1、rBV-M2和rBV-M3,利用WB法对目的蛋白的表达及特异性进行检测。结果:成功扩增重组杆粒rBacmid-ENO1、rBacmid-M1、rBacmid-M2和rBacmid-M3,获得大小约2000 bp的基因片段,与预期大小相符。昆虫BEVS可表达ENO1蛋白及其3个酶活位点缺失的重组蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3,其分子量约为52000,与预期相符。WB法鉴定这些蛋白能与特异性标签His-tag发生反应。结论:通过昆虫BEVS成功表达目的蛋白ENO1及其酶活性位点缺失蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3,这些蛋白具有反应原性,为后续测定这些蛋白与ENO1单抗亲和力创造了条件。

β-葡聚糖的抗肿瘤作用机制及其免疫治疗宫颈癌的研究进展

宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤,其主要病因是高危型人乳头瘤病毒(HPV)持续感染。早期宫颈癌可以通过手术及术后辅助放化疗来治疗,但晚期及复发转移性宫颈癌尚无有效方法。肿瘤免疫治疗是继手术及放化疗后新兴的辅助治疗方法。β-葡聚糖是来源于真菌、细菌和植物体细胞壁中的葡萄糖聚合物,主要影响固有免疫和适应性免疫,被视为天然的生物免疫调节剂而应用于肿瘤免疫治疗中。β-葡聚糖缺乏蛋白质和肽类成分,具有低免疫原性和低毒性。因此,β-葡聚糖的研究及应用为宫颈癌的预防和治疗提供了更多选择。本文对β-葡聚糖的抗肿瘤作用机制及其免疫治疗宫颈癌的研究进展进行综述。

外泌体在卵巢癌微环境中的研究进展

卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,由于其早期症状较隐匿且缺乏特异性的诊断标志物,大多数患者确诊时即为晚期。外泌体是直径为30~150 nm的细胞外泌性囊泡,可由多种细胞释放至细胞外空间,参与细胞间通信和物质交换。众多研究表明,外泌体与卵巢癌的发生发展密切相关,因此本文就外泌体及其在卵巢癌发生发展、侵袭转移、血管生成、免疫逃逸、多药耐药和诊断治疗中的研究进展进行综述,为卵巢癌的临床诊断和治疗提供新思路和靶点。

白细胞介素-17在卵巢癌发生发展中作用及其机制的研究进展

卵巢癌作为女性预后差、易复发的癌症之一,目前很难做到早期筛查与治疗。卵巢癌的发生与卵巢周围炎症密切相关,白细胞介素-17(IL-17)家族成员被认为是炎症反应的启动因子,可诱导抗菌肽和炎症基因的表达,参与抗感染并诱导多种自身免疫性疾病的发生。由此认为,IL-17可通过诱导炎症参与卵巢肿瘤的发生发展过程。目前已有大量研究证明IL-17参与胃癌、肺癌及肝癌等的发生发展,关于其与卵巢癌关系的具体机制尚不明确且缺乏大量研究数据。因此,了解IL-17在卵巢癌发生、增殖、转移及治疗耐药中的作用或可为卵巢癌的筛查、靶向治疗提供新思路。

ENO1 mAb联合谷氨酰胺酶抑制剂CB-839抗宫颈癌细胞作用

目的探究烯醇化酶1(ENO1)单克隆抗体(mAb)纳米颗粒联合谷氨酰胺酶抑制剂CB-839对宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移的协同作用。方法利用癌症基因组图谱分析正常宫颈组织和宫颈癌组织中糖酵解途径和谷氨酰胺代谢关键酶的表达差异。采用四甲基偶氮唑盐法观察叶酸修饰的聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)-ENO1 mAb纳米颗粒和CB-839联合后对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。通过划痕损伤修复实验观察PLGA-ENO1 mAb和CB-839对宫颈癌HeLa迁移能力的影响;通过代谢试剂盒测定方法检测抑制糖酵解途径和谷氨酰胺代谢对HeLa细胞胞内还原型谷胱甘肽、谷氨酸的影响。结果宫颈癌HeLa细胞存在谷氨酰胺依赖现象,并呈时间和剂量依赖性。与对照组比较,谷氨酰胺酶抑制剂CB-839抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖(P<0.05),并具有剂量效应;PLGA-ENO1 mAb和CB-839联合应用,联合指数CI<1,表现出协同作用;CB-839未表现出抑制HeLa细胞迁移作用(P>0.05),而和PLGA-ENO1 mAb联合应用后,可显著抑制迁移能力(P<0.01);两药联用后胞内还原型谷胱甘肽和谷氨酸含量显著降低(P<0.05)。结论PLGA-ENO1mAb和CB-839联合应用可有效抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖和迁移。

磷酸戊糖途径与肿瘤代谢的研究进展

肿瘤是一种代谢性疾病,2010年Warburg教授重新定义了肿瘤细胞代谢的十大特征,其中就包括了异常代谢[1]。随着对肿瘤研究的深入,肿瘤细胞的代谢在肿瘤发生、发展的过程中发挥越来越重要的作用,肿瘤细胞的代谢具有明显的异质性,这可能与肿瘤细胞独特的生存环境有关。

组蛋白乳酸化修饰在非肿瘤疾病中的作用

组蛋白乳酸化修饰是一种由乳酸介导的新型蛋白质翻译后修饰,参与炎症、纤维化和促血管生成等多种病理生理过程,与神经系统、呼吸系统和生殖系统等疾病密切相关,亦是潜在的药物新靶标。本文简要介绍了组蛋白乳酸化修饰的生物学功能及其在非肿瘤性疾病中的作用,为相关疾病的治疗和干预提供新思路,亦有助于了解组蛋白乳酸化修饰的功能和机制。

细胞焦亡调控宫颈癌发生和发展的研究进展

细胞焦亡是一种新型的程序性细胞死亡方式,主要依靠Caspases家族的促炎性细胞死亡,表现为肿瘤细胞不断胀大直至细胞膜破裂,导致细胞内容物释放,进而引起强烈的炎症反应.细胞焦亡主要包括依赖于Caspase-1的经典途径和依赖于Caspase-4、Caspase-5、Caspase-11的非经典途径.越来越多的研究发现,细胞焦亡不仅可调节肿瘤细胞增殖、侵袭和转移,其引发的炎症反应还可促进肿瘤的形成.本文就细胞焦亡调控宫颈癌的发生和发展展开综述,以期为宫颈癌治疗提供新的靶点和策略.