实时荧光定量RT-PCR检测急性白血病中Bmi-1基因mRNA的表达及意义

[目的]建立荧光实时定量RT—PCR（FQRT—PCR）检测Bmi—1基因mRNA的方法并研究该基因在急性白血病细胞中表达的意义。[方法]根据Genbank提供的序列，设计目的基因Bmi-1及内参基因GAPDH的扩增引物，将Bmi-1及GAPDHRT—PCR扩增片段克隆入载体pMDl8-Tsimple，经测序鉴定正确后，进行纯化、定量及系列稀释，应用SYBRGreenI荧光染料，建立检测Bmi-1mRNA的FQRT—PCR方法，并对其线性及特异性进行评价。应用此方法检测21例急性白血病及10例健康人外周抗凝血中Bmi-1mRNA的表达水平。【结果]该方法的线性范围为1．0×10^3-1．0×10^8eopies／txL，相关系数为-1．00，熔解曲线分析扩增产物显示单-的峰，熔解温度（Tm）为80．4℃。急性白血病患者的相对表达量为0．56±0．12，健康对照组中Bmi-1mRNA的相对表达量为0．19±0．08，两者的表达差异有统计学意义（P〈0．05）。[结论]实时荧光定量RT—PCR方法检测Bmi-1基因表达，具有高敏感性和高特异性等优点，可作为进-步研究Bmi-1基因的方法。Bmi-1基因参与急性白血病的发生，可能是一种新的肿瘤标志物。

补骨脂素加长波紫外线诱导K562细胞凋亡时对FasL表达的影响

目的探讨补骨脂素(PSO)加长波紫外线(UVA)光化学疗法(PUVA)诱导人白血病细胞K562凋亡时对FasL表达的影响。方法以K562细胞为研究对象,以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞FasL基因表达水平、蛋白表达水平为检测指标,观察中药补骨脂中提取的PSO加波长为360nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径,并采用多因素方差分析法进行统计学处理。结果单纯PSO、单纯UVA照射及PUVA均可诱导K562细胞发生凋亡,PUVA的作用显著强于前两者;电镜下观察经PUVA处理后的K562细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变;单纯PSO、单纯UVA照射及PUVA均可下调FasL基因表达水平,PUVA的作用显著强于前两者;单纯PSO、单纯UVA照射及PUVA均可下调FasL蛋白表达水平,PUVA的作用显著强于前两者。结论PUVA可诱导白血病细胞K562发生凋亡,作用强于单纯PSO及单纯UVA照射。PUVA诱导K562凋亡的途径之一为下调FasL基因表达水平。