基于双酶辅助双水相提取毕赤酵母酯化酶工艺优化及其酶学特性研究

以高产酯化酶毕赤酵母(Pichia farinosa)为研究对象,利用双水相萃取体系,在单因素试验基础上,选择聚乙二醇(PEG)分子质量、PEG质量分数、磷酸盐质量分数为主体因素,以比酶活力为指标进行结果分析,采用正交设计优化酯化酶提取工艺条件:在25mL 4%毕赤酵母细胞混悬液中添加1∶1(m/m)甘露聚糖酶和β-葡聚糖酶双酶破壁剂,使其用量达1.2mg/g菌体,破壁温度为55℃,双水相体系中NaCl质量分数为1%,PEG分子质量为800,PEG质量分数为29%,磷酸盐质量分数为8%,在此条件下酯化酶比酶活力为3050U/g。酶学特性结果显示,该酯化酶最适反应温度35℃,最适pH 6.0时酯化酶酶活力最高,金属离子Zn^(2+)可提高酯化酶活性,Na^(+)影响较小,Mg^(2+)、Mn^(2+)、Cu^(2+)均有一定的抑制作用,且Cu2+抑制作用最明显。本研究对毕赤酵母功能微生物酯化酶在酿酒领域的开发应用具有重要的参考价值。