农杆菌介导的杜氏盐藻Dscbr基因转化紫花苜蓿的初步研究

利用农杆菌介导法进行紫花苜蓿遗传转化研究.将从盐生杜氏藻(Dunaliellasalina)中克隆到的抗逆基因Dscbr(编码一种早期光诱导蛋白)导入紫花苜蓿栽培种"中苜一号",获得52个转化株系.经过卡那霉素抗性鉴定和PCR分子检测,获得6株阳性苗,PCR阳性率为11.54%.结果表明Dscbr基因已整合到苜蓿的基因组中.

盐生杜氏藻cbr基因的克隆

首先对其他物种cbr/elip基因的同源序列进行相似性分析,设计一对简并引物,利用TR PCR技术获得一250bp的片段,经克隆测序分析发现其同D.bardwail的cbr基因有67.0%的同源性,然后再以此片段为模板设计引物,通过RACE技术构建盐生杜氏藻cbr基因的全长序列.

酿酒酵母GPDH1基因表达载体pPIC3.5K-ScGPD的构建及其在巴斯德毕赤酵母中的表达

将酿酒酵母3 磷酸甘油脱氢酶基因GPDH1的编码序列构建到表达载体pPIC3.5K中,利用电转化法将构建好的表达载体转入巴斯德毕赤酵母中,利用含有G418的YPD平板筛选到两个阳性转化子,通过分子生物学及外源蛋白表达实验证明,酿酒酵母3 磷酸甘油脱氢酶基因GPDH1已经整合到巴斯德毕赤酵母的基因组上,并且得到了预期的表达.