无乳链球菌LIP蛋白的截短表达及免疫保护性研究

为评价罗非鱼源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)BX2012株脂蛋白(lipoprotein)的免疫原性及其对奥利亚罗非鱼(Oreochromis aureus)和大菱鲆(Scophthalmus maximus)的保护效果,以无乳链球菌脂蛋白基因序列(GenBank序列号:CP000114.1,SAK_0321)的B细胞线性抗原表位区设计特异性引物进行扩增,构建重组表达载体,将截短表达的脂蛋白制备成亚单位疫苗,同时制备灭活疫苗进行免疫比对。结果显示:重组表达载体p ET-32a-LIP342在BL21(DE3)中获得了良好的可溶性表达,分子质量约为30 kDa,纯化使LIP342纯度由41.75%提至87.23%;Western blotting分析显示,LIP342可被兔抗无乳链球菌高免血清特异性识别;LIP342在目前已知不同种属来源或不同血清型的无乳链球菌分离株中同源性为90.35%~100%,在罗非鱼源分离株中同源性为100%;无乳链球菌LIP342蛋白和灭活疫苗均可显著提升奥利亚罗非鱼和大菱鲆血清抗体水平,而LIP342诱导的血清抗体水平均显著高于灭活疫苗;经0.1 mL 1×10~9cfu/mL的无乳链球菌攻毒后,LIP342蛋白和灭活疫苗对供试鱼的累积存活率均显著高于PBS对照组。结果表明,高度保守的LIP342具有较好的免疫原性,可作为无乳链球菌亚单位疫苗候选因子。

B型产气荚膜梭菌C58-1株ε毒素基因序列分析与可溶性表达

利用PCR技术从B型产气荚膜梭菌扩增出ε毒素基因,然后用限制性核酸内切酶BamHⅠ和SalⅠ对其进行酶切,回收984bp的ε毒素基因片段,将其定向克隆在载体PET-32a中,获得重组质粒pETε984。将pETε984转化至受体菌BL21(DE3)中。重组菌株经IPTG诱导后,其表达产物经SDS-PACE分析。结果表明,重组目的蛋白在大肠埃希菌成功表达,融合蛋白大小为51ku,存在于细菌培养上清中,可溶性蛋白占菌体总蛋白相对含量的67.8%。序列分析表明C58-1株ε毒素蛋白序列与目前公布的所有B型和D型产气荚膜梭菌同源性均在99.7%以上,但ε毒素蛋白序列第321位出现了S→Y突变。研究结果为ε毒素蛋白的亚单位疫苗研究奠定了基础。

欧洲型和美洲型PRRSV双重PCR检测方法的建立

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)严重危害着养猪业的健康发展,给养猪业造成了巨大的经济损失。按照血清型和遗传性差异,PRRSV可划分为欧洲型和美洲型。欧洲型主要流行于欧洲地区,美洲型主要流行于美洲及亚太地区。我国每年从英国和法国等欧洲国家进口生猪占进口生猪总数的40%左右,但是在我国关于欧洲型PRRSV的报导却很少。为此,论文设计了2对能特异性扩增欧洲型和美洲型PRRSV的引物,建立并优化了可同时检测欧洲型和美洲型PRRSV的双重PCR方法。应用该方法能在3h内对样品进行检测并获得结果,本方法的建立对这两种病毒亚型的快速检测有十分重要的意义。

猪繁殖与呼吸综合征病毒结构和非结构蛋白生物学功能研究进展

猪繁殖与呼吸综合征严重危害着养猪业的健康发展,给养猪业造成了巨大的经济损失。由于猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)介导的特殊的免疫逃避机制以及抗原性基因的异质性等特征,目前疫苗产品不能提供十分有效的保护。作者就PRRSV结构和非结构蛋白生物学功能的最新研究进展进行归纳总结,以期为PRSSV防控,新型疫苗设计等提供参考。

产气荚膜梭菌B型C58-1株β1毒素基因的克隆表达

利用PCR技术,从B型产气荚膜梭菌中国标准株C58-1株扩增出β1毒素基因,连接pMD18-T载体筛选阳性克隆,然后用限制性核酸内切酶BamHⅠ和SalⅠ对其进行酶切,回收927bp的β1毒素基因片段,将其定向克隆到载体pET-32a中,获得重组质粒pETβ927。将pETβ927转化至受体菌BL21(DE3)中,其表达产物经His-Trap FF预装柱纯化、SDS-PAGE检测目的蛋白大小和分布及Western blotting检测其反应原性。结果表明,完整的β1毒素基因大小为1 011bp,与GenBank发表的B型和C型产气荚膜梭菌β1毒素蛋白序列同源性达99.4%以上;SDS-PAGE结果显示重组目的蛋白在大肠杆菌中成功表达,融合蛋白大小为54ku,在超声波裂解上清和包涵体中均有分布,但以包涵体为主。Western blotting检测结果显示表达的重组蛋白可与特异性血清抗体发生免疫反应,表明β1毒素蛋白具有较好的反应原性。

猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp4抗体ELISA检测方法的建立

克隆、表达了猪繁殖与呼吸综合征病毒DY株(GenBank:JN864948)的Nsp4蛋白,并利用Nsp4作为包被蛋白建立了ELISA检测方法。优化的Nsp4抗体ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为1μg/mL,血清最佳稀释度为1∶40,最佳封闭液为100mL/L牛血清,酶标二抗的最佳工作稀释度为1∶4000,最佳显色时间为37℃反应15min。用建立的ELISA检测方法和IDEXX ELISA检测试剂盒检测血清样品130份,总符合率为93.19%。Nsp4抗体ELISA检测方法的建立,可为PRRSV的抗体监测提供技术支持。

桃园生草覆盖可控制桃树流胶病

桃树流胶病又称树脂病，除危害桃树外，还危害李、杏、梅等核果类果树，是一种极为普遍的病害。流胶病在桃树的枝干、新梢、叶片、果实等部位均可发生，以枝干最严重。发病枝干树皮粗糙、龟裂、伤口不易愈合，流出黄褐色透明胶状物。流胶严重时，可造成树势衰弱，果品质量下降，甚至会引起死枝、死树。

新生儿败血症诊治的研究进展

新生儿败血症是指新生儿感染致病菌,且可培养出多种致病菌而诱发的炎症反应综合征。新生儿人群具有一定特殊性,虽然人们环境卫生、医疗条件逐步改善,此疾病仍然是威胁新生儿身体健康和生命安全的主要疾病之一,所以,早期及时准确、有效的诊断并实施治疗非常重要。但目前认为新生儿败血症缺乏特异性,且在诊断此疾病时采用的“金标准”血培养具有阳性率低、耗费时间长等特征,临床诊断难度较大。所以,本文旨在叙述新生儿败血症诊治状况,以期为临床诊治该病提供一定依据。

发展节水农业需要解决的几个问题

农七师垦区干旱少雨,多年平均降水量167.9毫米,年蒸发量为2151毫米,蒸发量是降水量的12.8倍.近年来农七师在继续搞好骨干水利工程和渠道防渗的基础上,积极发展滴灌等节水灌溉农业.

猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp7α抗体ELISA检测方法的建立

本研究克隆、表达了猪繁殖与呼吸综合征病毒DY株(GenBank:JN864948)的Nsp7α蛋白,并利用Nsp7α作为包被蛋白建立了ELISA检测方法,并对检测条件进行了优化。结果显示,ELISA最佳条件:抗原包被浓度为1μg/mL,血清稀释度为1∶40,封闭液为10%牛血清,酶标二抗工作稀释度为1∶4000,显色时间为37℃反应15 min。用建立的ELISA检测方法和IDEXX ELISA检测试剂盒检测血清样品115份,总符合率为93.91%。本研究中Nsp7α抗体ELISA检测方法的建立,为PRRSV的抗体监测提供了新的技术支持。

葡萄早熟优质丰产栽培技术

近年来，我们对以巨峰为代表的欧美葡萄的栽培技术进行了研究，摸索出了几个关键问题的解决方法。通过几个关键时期的管理，再配合氮、磷、钾三大要素及钙、镁、锌、硒、铁、锰、铝等中微量元素全方位施肥，667m。可产优质葡萄2000kg以上，而且比传统方法提早成熟1周以上。

小学语文教学中学生预习习惯培养策略研究

语文是学生基础教育的核心科目之一,它不仅是传授知识和技能的工具,更是培养学生综合素养和语言表达能力的重要途径。然而,在当前的小学语文教学中,很多学生存在着对课前预习的缺乏习惯和意识,导致课堂学习效果不尽如人意。因此,如何有效地培养小学生的语文预习习惯成了一个迫切需要解决的问题。通过本研究的开展,期望能够为小学语文教学中学生预习习惯的培养提供一定的理论指导和实践参考,促进学生自主学习能力的培养,提高课堂学习的效果和质量,使语文教育更好地服务于学生的全面发展和成长。

现代信息技术与小学语文教学深度融合的有效性分析

二十一世纪是一个科技发展迅猛的新时代,互联网也随之越来越发达,而处在社会基层的教育事业更不能落后。新世纪要求教师们能把现代信息发展带来的影响融入到教育中去,也就是说,老师在教学过程中能够把现代信息和学科内容完美的结合到一起,创造一种新型的教学方式。

以NoteExpress软件为基础的科技查新档案管理系统的构建

科技查新主要为用户提供公众性信息咨询服务,其检索方式为手工和计算机等多种,通过综合性的对比分析得出有效结果,为此为事实依据进行科研立项评价等。

提高小学语文课堂教学的有效性

课堂教学质量的核心是课堂教学的有效性。在小学语文课堂教学中，教师要紧紧抓住课堂教学这一核心环节，切实采取行之有效的教学方法和手段，提高课堂教学的有效性来提高教学质量。

北冰红葡萄引种试验

北冰红葡萄是优良的酿酒葡萄品种,在永清县以巨峰葡萄为对照进行了引种栽培试验。试验结果表明:北冰红葡萄抗寒性优于巨峰葡萄,冬季不下架的情况下植株仍能生长正常,可节约大量生产成本;北冰红葡萄果粒附着果梗牢固,果实成熟后落粒较少,适宜用于酿酒用冰冻葡萄的生产。

经颈静脉肝内门体分流术治疗门静脉高压症急性上消化道出血的临床研究

目的:探讨急诊行经颈静脉肝内门体分流术(TIPS)治疗门静脉高压症急性上消化道出血的可行性、有效性及安全性,评估其临床应用价值。方法:选择2015-04—2017-03期间潍坊市人民医院收治的肝硬化门脉高压症合并上消化道出血的患者共78例,使用随机数字表法将病例随机分为观察组及对照组,每组39例。观察组接受TIPS手术治疗,对照组行脾切除、贲门周围血管离断术。随访1年,观察并比较两组手术前后的血流动力学指标、肝功能、凝血功能指标,比较两组患者术后1年内再出血率、围手术期及术后并发症发生率。结果:两组患者均顺利接受相应手术,观察组无围手术期死亡病例,对照组围手术期死亡1例,为术后门静脉血栓形成导致小肠大面积坏死;观察组患者较对照组术后门静脉内径(PVD)显著变细,门静脉压力(PVP)明显下降,门静脉血流量(PVF)明显减少,而门静脉流速(PVV)较对照组明显加快,差异均具有统计学意义(P<0.05);观察组术后AST、ALT、TBIL水平均低于对照组(P<0.05),而PT、APTT指标较对照组差异无统计学意义(P>0.05)。观察组术后1年内再出血病例3例,分别为术后第4、6、11个月出现再出血,其中1例行内镜下套扎术,另2例行内科保守治疗后治愈;6例患者术后1年内出现Ⅱ级以上的肝性脑病,2例患者出现肝功能衰竭而死亡,分别为术后第3、8个月。对照组术后1年内再出血病例2例,分别为术后2、5个月,均行内镜下套扎术后治愈;5例患者术后1年内出现Ⅱ级以上的肝性脑病,1例患者出现肝功能衰竭而死亡,为术后第5个月。两组在术后1年内再出血率、围手术期及术后并发症发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:TIPS可明显改善患者的血流动力学指标及肝功能,治疗门静脉高压症上消化道出血与传统手术方式相比,创伤小,效果显著,安全性高,值得临床进一步推广应用。

解剖性精准脾脏部分切除术37例临床分析

我院从2001年开始开展解剖性脾脏部分切除术.至2012年,共对37例外伤性脾破裂及病理性脾脏疾病患者进行了解剖性脾脏部分切除术,取得了良好的效果.现报告如下.临床资料1.一般资料：本组患者共37例.其中,男21例,女16例,年龄29 ～ 62岁,平均38.5岁.37例中外伤性脾脏破裂29例,其中脾外伤分级（天津分级）Ⅱ级18例,Ⅲ级11例;脾血管瘤5例;脾囊肿2例;脾纤维瘤1例.择期手术患者常规行上腹部强化CT检查,脾破裂急诊手术患者术前行腹腔彩超检查.所有患者术前均获得明确诊断.