大麻素Ⅱ型受体对LPS诱导小鼠黑质区COX-2和iNOS基因表达的影响

目的探索大麻素Ⅱ型(CB2)受体对脂多糖(LPS)诱导小鼠黑质(SN)区炎症反应的作用。方法将18只8周龄雄性野生型(WT)C57BL/6小鼠随机分为WT对照组、WT LPS组和WT LPS+JWH133(CB2受体激动剂)组,12只8周龄雄性CB2受体敲除(CB2-KO)C57BL/6小鼠随机分为CB2-KO对照组和CB2-KO LPS组。对照组小鼠单次双侧SN立体定位注射生理盐水,其余各组小鼠注射等体积的LPS,然后连续腹腔注射JWH133或生理盐水14 d。应用实时荧光定量PCR技术检测各组小鼠SN中环氧化酶2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的表达。结果与WT对照组相比,WT LPS组小鼠SN区COX-2和iNOS基因表达水平升高,差异有统计学意义(F=20.9、21.4,q=5.536、5.518,P<0.01);JWH133能明显抑制LPS诱导的COX-2和iNOS基因表达上调(q=5.170、4.553,P<0.05);与WT LPS组相比,CB2-KO LPS组小鼠COX-2和iNOS基因表达明显上调,差异有统计学意义(q=4.150、5.496,P<0.05)。结论激活CB2受体能够抑制LPS诱导小鼠SN区COX-2和iNOS基因的表达,缺失CB2受体能够促进LPS诱导小鼠SN区COX-2和iNOS基因的表达。

JWH133对右旋糖酐铁过载小鼠脾脏铁代谢影响

目的探讨激活大麻素Ⅱ型受体(CB2受体)对右旋糖酐铁处理的铁过载模型小鼠脾脏铁代谢的影响。方法将18只9周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、右旋糖酐铁组、JWH133(CB2受体激动剂)+右旋糖酐铁组。应用铁检测试剂盒(比色法)检测各组小鼠脾脏铁水平,采用Western blot法检测脾脏转铁蛋白受体1(TFR1)和铁转运蛋白1(FPN1)的表达。结果与对照组相比,右旋糖酐铁组小鼠脾脏总铁含量和Fe 3+含量明显升高(F=12.710、8.352,q=6.980、5.698,P<0.01),Fe 2+含量有增高趋势,但差异无统计学意义;JWH133预处理抑制右旋糖酐铁造成的总铁含量和Fe^(3+)含量的升高(q=4.747、3.687,P<0.05)。与对照组相比,右旋糖酐铁组小鼠脾脏TFR1表达显著升高(F=12.090,q=6.859,P<0.01);JWH133预处理抑制右旋糖酐铁引起的TFR1蛋白表达上调(q=4.419,P<0.05)。3组小鼠脾脏FPN1表达比较差异无显著性(F=1.152,P>0.05)。结论激活CB2受体可以抑制右旋糖酐铁引起的小鼠脾脏铁水平增高以及TFR1蛋白表达上调,CB2受体可能通过调节TFR1蛋白表达介导小鼠脾脏铁的聚集。

玉米须绞股蓝复合提取总黄酮工艺及其降压片的制备

以玉米须(stigma maydis)、绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)(1∶1)为提取原料,总黄酮含量为考察指标,通过提取溶剂、乙醇体积分数、提取温度、提取时间、料液比和提取次数等单因素考察对复合总黄酮含量的影响,再通过正交试验优化总黄酮的提取工艺,最后将优化提取的总黄酮过D101大孔吸附树脂精制后制备成降压片。结果表明,复方总黄酮的最佳提取工艺为乙醇体积分数50%,料液比1∶10,50℃下提取3.5 h。制备的片剂质量(片重差异±5.1%,脆碎度0.83%,崩解时限2.41 min)符合《中华人民共和国药典》(2020版)片剂的有关规定,并且降压片能降低SHR大鼠血压。

激活CB_(2)受体对MPP+诱导BV2小胶质细胞iNOS和Arg-1表达的影响

目的探讨激活大麻素Ⅱ型受体(CB_(2)受体)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)处理的BV2小胶质细胞M1/M2表型转化的影响。方法培养BV2小胶质细胞,将其分为对照组、MPP+组、JWH133(CB_(2)受体激动剂)+MPP+组、AM630(CB_(2)受体抑制剂)+MPP+组、JWH133+AM630+MPP+组。应用免疫印迹法检测各组诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶-1(Arg-1)蛋白的表达。结果与对照组相比,MPP+组BV2小胶质细胞iNOS蛋白表达明显上升(F=9.825,q=6.346,P<0.01);JWH133预处理抑制MPP+诱导的iNOS蛋白的上调(q=5.714,P<0.01),此抑制作用可被AM630逆转(q=4.154,P<0.05)。与MPP+组相比,JWH133预处理显著上调Arg-1蛋白表达水平(F=5.800,q=5.520,P<0.01),此作用可被AM630所阻断(q=4.155,P<0.05)。结论激活CB 2受体可抑制MPP+处理的BV2小胶质细胞M1极化,并且促进BV2小胶质细胞从M1型转化为M2型。

去亚甲基小檗碱对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞线粒体caspase依赖性凋亡的影响

目的探讨去亚甲基小檗碱(DMB)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞线粒体caspase依赖性凋亡通路的影响。方法培养SH-SY5Y细胞,将其分为对照组、MPP+组、小檗碱(BBR,DMB的前体)+MPP+组、司莱吉兰(selegiline,与DMB同为单胺氧化酶B抑制剂)+MPP+组、DMB+MPP+组。应用免疫印迹法检测各组bcl-2/bax比值以及cleaved caspase-3蛋白的表达。结果与对照组相比,MPP+组bcl-2/bax比值明显降低(F=42.58,q=17.89,P<0.001),DMB、BBR、selegiline处理均可以抑制MPP+诱导的bcl-2/bax比值降低(q=6.71~10.63,P<0.001),且selegiline处理效果强于BBR和DMB(q=3.93、3.59,P<0.05)。与对照组相比,MPP+组cleaved caspase-3蛋白表达明显上调(F=111.60,q=29.44,P<0.001),DMB、BBR、selegiline处理可以降低MPP+诱导的cleaved caspase-3蛋白表达上调(q=10.74~13.53,P<0.001),且3种药物处理效果差异无显著性。结论对于MPP+诱导的SH-SY5Y细胞,DMB可以升高bcl-2/bax比值,降低cleaved caspase-3蛋白的表达。

费约果叶片总黄酮的提取工艺研究

研究费约果叶片总黄酮提取工艺,优选最佳提取条件。以提取率、总黄酮收率和总黄酮纯度为指标,采用单因素试验法,考察提取溶剂、提取温度、提取时间和提取次数对费约果总黄酮收率的影响,再进行正交试验,优选出最佳提取工艺条件。最佳总黄酮提取工艺:90℃条件下,将费约果叶片粉用水回流提取3次,每次2 h,料液比分别为第1次1∶10(g/m L),第2次、第3次料液比为1∶5(g/m L)。提取率、总黄酮收率、总黄酮纯度分别为:16.23%、6.90%、42.51%。

费约果叶片槲皮素的提取工艺研究

[目的]研究费约果叶片槲皮素提取工艺,优选最佳提取条件。[方法]以提取率、槲皮素收率和槲皮素纯度为指标,采用单因素试验法,考察提取溶剂、提取温度、提取时间、料液比和提取次数对费约果叶片槲皮素收率的影响,优选出最佳提取工艺条件。[结果]最佳槲皮素提取工艺是在50℃条件下,将费约果叶片粉末置于10倍90%乙醇中回流提取4次,每次2 h,提取率、槲皮素收率、槲皮素纯度分别为3.486%、0.0334%、0.958%。[结论]此法高效、成本低、操作方便、工艺简单,为费约果叶片槲皮素提取工艺的进一步研究提供了依据。

双导师制在医学研究生培养中的探索与实践

目的探讨医学研究生培养过程中实施双导师制的方法和意义。方法医学科学学位研究生培养过程中实施双导师培养模式,同步建立文献讲读、小组研讨及学术交流制度。结果双导师培养模式可以提高医学研究生的成果产出和培养质量。结论医学科学学位研究生培养过程中实施双导师制对提高医学研究生培养质量具有重要意义。

青年教师完成好生理学教学的几点体会

生理学是医学的基础学科之一,是医学生必修的一门基础医学科学。只有在学好生理学的基础上才能理解疾病时身体的变化,为后续学习病理生理学、病理学及临床医学等相关学科打好基础。我院生理学是山东省精品课程和国家级双语教学示范课程,多年来在生理学的教学方面积累了丰富的知识和经验。

绞股蓝总皂苷及其不同提取物对实验性高血压大鼠的降压作用

目的研究绞股蓝总皂苷和绞股蓝不同提取物对大鼠血压的影响。方法将大鼠分为9组,除空白对照组外,高血压模型组、绞股蓝总皂苷对照组、绞股蓝总皂苷干预组(绞股蓝总皂苷180 mg/kg、360 mg/kg、720 mg/kg,低、中、高剂量组)、总提取物组、乙酸乙酯提取物组和正丁醇提取物组的大鼠均被喂养高脂高糖饲料和饮用糖盐水(糖4%、盐1%)和果糖水(6%)。绞股蓝总皂苷对照组、绞股蓝总皂苷干预组、总提取物组、乙酸乙酯提取物组和正丁醇提取物组的大鼠均给予相应剂量的药物灌胃。给药8周后处死大鼠,测定大鼠血清中一氧化氮(NO)、内皮素(ET)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量。结果与空白对照组相比,高糖高脂饮食能明显使大鼠血压的增高[收缩压增高(34.9±9.8)%,舒张压增高(17.9±8.5)%],差异有统计学意义(P<0.05)。与高血压模型组相比,绞股蓝总皂苷对照组收缩压降低(39.7±6.9)%、舒张压降低(36.7±7.3)%,血压显著性降低(P<0.05)。与空白对照组相比,绞股蓝总皂苷对照组、乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组收缩压、舒张压相差不大(P>0.05)。绞股蓝总皂苷明显降低大鼠的血压,同时能显著增加大鼠血清NO含量,降低大鼠血清ET和AngⅡ的含量。结论绞股蓝总皂苷及其乙酸乙酯、正丁醇提取物可预防高糖高脂诱导的大鼠血压的增高。绞股蓝总皂苷可能通过降低ET、AngⅡ含量和升高NO含量来发挥对大鼠的降压作用。

乌鸡白凤丸有效成分抑制C31引起的电压门控型Ca^(2+)通道电流增强的作用

目的:研究C31对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞(PC12)电压门控性钙通道(VGCC)电流的影响,以及乌鸡白凤丸有效成分(BFP)对此效应的干预作用。方法:将PC12细胞分成空白对照组、C31组、C31+BFP组、BFP组、β-雌二醇组和C31+β-雌二醇组,分别孵育12 h。在全细胞膜片钳记录模式下,记录各组细胞VGCC电流的电流峰值,求得细胞的电流密度(电流值/膜电容),作为Ca2+内流的指标。结果:对照组平均VGCC电流密度为(16.01±9.75)pA/pF,C31组为(26.47±14.55)pA/pF,两组相比,差别具有显著性(P<0.05);C31+BFP组的平均电流密度为(17.68±10.52)pA/pF,C31+β-雌二醇组的电流密度为(13.41±4.21)pA/pF,与C31组(26.47±14.55pA/pF)比较,差别具有显著性(P<0.05)。结论:C31能够促进VGCC开放,Ca2+内流增多,引起细胞损伤;BFP和β-雌二醇能有效抑制C31所引起的VGCC电流增强效应,在一定程度上避免了细胞内Ca2+超载;BFP的这些作用可能是通过类雌激素样作用实现的。

费约果营养、生物活性成分及应用研究进展

费约果(Acca sellowiana(O.Berg)Burret.)是起源于南美的一种桃金娘科南美稔属的多年生亚热带常绿灌木类植物,该果实集食用、保健、药用价值为一体,在食品、保健品、药品、化妆品等诸多领域应用前景广阔。作者对各国发表的有关费约果果实(包括果肉、果皮及果实废弃物等)营养、活性成分及其功效、应用现状和发展前景情况进行了文献综述,并在此基础上提出了开发应用建议。

2012年中国生理学会“生理学实验和研究技术培训班”圆满结束

由中国生理学会继续教育工作委员会主办、山东生理学会和青岛大学承办的2012年中国生理学会“生理学实验和研究技术培训班”于2012年8月16-22日在山东省青岛市青岛大学国家生理学重点（培育）学科举行。来自全国14所高等院校的34位学员参加了此次培训。此外，青岛大学医学院一些相关专业的教师、研究生和本科生也参加了此次培训。本次培训包括：在体伏安法技术、膜片钳技术、在体电生理技术、常用分子生物学技术、激光扫描共聚焦显微镜及流式细胞技术、动物行为学技术等，内容涵盖了电生理、电化学、分子生物学及细胞形态及功能学等多个领域。培训由理论授课和实验操作两部分组成。首先由青岛大学生理学科的部分老师根据自己的研究专长向学员们介绍了各种实验技术的应用范围、实验原理及相关技术参数，并结合自身的科研内容具体讲解了实验的操作流程。随后，学员们根据自己的兴趣爱好和科研需要，分别选择不同的实验技术进行了动手操作。经过几天紧张、充分的学习交流和实践，学员们对各种常用的生理学实验和研究技术有了一定的了解并能初步运用到自身的科学研究中。

基于协同创新的“基础-临床相结合、培养学术兼应用型创新人才的医学研究生培养模式”的探索与实践

如何加强医学相关学科专业研究生协同创新能力的建设,已经成为现代医学研究生教育面临的新挑战。青岛大学生理学国家重点(培育)学科以协同创新中心为载体,打破学科的壁垒,建立协同创新环境下的研究生导师遴选模式和课程体系,通过加强培养过程管理和临床实践环节,探索出了一种兼具专业特点,同时又有基础和临床专长的研究生培养模式。

JWH133对MPP^(+)诱导SH-SY5Y细胞铁水平和DMT1表达影响

目的探讨大麻素Ⅱ型受体(CB2R)激活对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用机制。方法培养SH-SY5Y细胞,根据药物处理不同将其分为对照组、MPP+组、CB2R激动剂JWH133+MPP+组、CB2R抑制剂AM630+JWH133+MPP+组。应用激光扫描共聚焦显微镜分析技术检测SH-SY5Y细胞铁水平变化,应用免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞二价金属离子转运蛋白1(DMT1)的表达。结果与对照组相比,MPP+组细胞荧光强度明显降低,差异有显著性(F=26.620,q=10.410,P<0.05);用JWH133预处理后,JWH133+MPP+组细胞荧光淬灭程度低于MPP+组,差异有显著性(q=4.868,P<0.05);而且应用AM630可以逆转JWH133的这种作用,AM630+JWH133+MPP+组和JWH133+MPP+组荧光强度相比差异具有显著性(q=5.619,P<0.05)。与对照组相比,MPP+组细胞的DMT1蛋白表达量显著升高(F=9.493,q=4.109,P<0.05);JWH133+MPP+组细胞DMT1蛋白表达量下降,与MPP+组相比差异具有显著性(q=4.771,P<0.05);而AM630可阻断JWH133的作用,AM630+JWH133+MPP+组细胞DMT1蛋白表达量较JWH133+MPP+组显著升高(q=6.240,P<0.05)。结论激活CB2R可以抑制MPP+对DMT1蛋白表达的诱导从而调节SH-SY5Y细胞铁水平降低。

铜离子对MES23.5细胞的毒性作用机制与线粒体功能障碍有关(英文)

目的探讨铜离子对MES23.5多巴胺能细胞的毒性作用及可能机制。方法用MTT法检测铜离子对细胞存活率的影响;用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),Western blotting以及高效液相色谱电化学检测法(HPLC-ECD)检测细胞内酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxlase,TH)mRNA、蛋白的表达以及多巴胺含量的改变;用流式细胞仪检测线粒体跨膜电位的改变。结果100μmol/L和200μmol/L铜离子对细胞存活率没有影响,400μmol/L和800μmol/L铜离子可以造成细胞存活率降低(P<0.01)。200μmol/L铜离子孵育细胞24h,TH mRNA、蛋白表达量以及多巴胺含量较正常对照组降低(P<0.01,P<0.01,P<0.05)。200μmol/L铜离子孵育细胞24h,线粒体跨膜电位较正常对照组明显降低(P<0.01)。结论铜离子对MES23.5多巴胺能细胞具有毒性作用,降低细胞功能的表达,其机制可能与线粒体功能障碍有关。

Ghrelin慢性给药对小鼠新物体和新位置识别的影响

目的探讨慢性腹腔注射Ghrelin对C57Bl6J小黑鼠新位置和新物体识别的影响。方法将小鼠随机分为Ghrelin组和对照组,Ghrelin组小鼠腹腔注射Ghrelin 80μg/kg,对照组腹腔注射等体积的生理盐水,每天一次,连续注射8d。采用高架十字迷宫、旷场实验、新位置和新物体识别实验进行行为学测试。结果连续腹腔注射Ghrelin 8d后,小鼠不能识别物体位置的改变,但可以清楚地区分出新旧物体。而对照组小鼠可明确地分辨出新旧物体及物体位置的改变。Ghrelin组与对照组小鼠在测试时对物体总的探究时间相同。腹腔慢性注射Gh-relin不改变小鼠的自发活动和焦虑状态。结论慢性腹腔注射Ghrelin选择性抑制小鼠对物体新位置的识别和记忆能力,表明慢性腹腔注射Ghrelin对海马依赖的空间学习及记忆可能有抑制作用。

CA1区注射ghrelin对小鼠海马依赖记忆获取影响

目的研究海马CA1区微量注射ghrelin对C57Bl6J小鼠海马依赖的记忆获取的影响。方法小鼠背侧海马CA1区微量注射5μmol/L的ghrelin 0.5μL,30min后进行旷场实验、高架十字迷宫实验及Morris水迷宫、条件恐惧测试。结果与对照组相比,背侧海马CA1区微量注射ghrelin可抑制小鼠空间记忆和场景恐惧记忆的获取（t=2.8～7.1,t′=9.8,P〈0.05）。与对照组相比,CA1区微量注射ghrelin不影响小鼠的自发活动和焦虑状态。结论背侧海马CA1区微量注射ghrelin对海马依赖的记忆获取产生抑制作用。

硝苯地平对急性铁负载大鼠黑质DA能神经元的作用

目的探讨L型电压门控型Ca2+通道阻断剂硝苯地平对急性铁负载大鼠黑质多巴胺(DA)能神经元的作用。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、急性铁负载组以及硝苯地平干预组。应用逆转录-聚合酶链反应、铁含量测定等技术,检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)mRNA的表达水平及铁含量。结果急性铁负载组大鼠黑质TH mRNA的表达水平较对照组明显降低,铁含量较对照组明显增高,硝苯地平预处理可逆转上述改变(F=100.293、56.202,P<0.01)。结论硝苯地平对急性铁负载大鼠黑质DA能神经元具有保护作用。

JWH133对MPP^+诱导的原代星形胶质细胞COX-2和iNOS表达的影响

目的探讨大麻素Ⅱ型受体(CB2受体)激活对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导原代星形胶质细胞炎症反应的影响。方法培养原代星形胶质细胞,生长状态良好时将其分为Control组、MPP+组、JWH133(CB2受体激动剂)+MPP+组、AM630(CB2受体抑制剂)+JWH133+MPP+组。应用免疫印迹法(Western Blot)检测Control组和MPP+组细胞CB2受体蛋白的表达。应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组环氧化酶2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的表达。结果与Control组相比,MPP+组的CB2受体蛋白表达上升(F=29.78,P<0.01)。与Control组比较,MPP+组COX-2和iNOS基因的表达明显上调(F=22.59、11.27,q=10.13、5.57,P<0.01);JWH133预处理抑制MPP+诱导的COX-2和iNOS基因表达的上调(q=6.26、4.16,P<0.05);此抑制作用可被AM630所阻断(q=5.34、5.67,P<0.01)。结论激活CB2受体可抑制MPP+诱导的原代星形胶质细胞炎症反应。