同时表达多种外源基因的非复制型重组痘苗病毒的构建

利用非复制型痘苗病毒载体，构建了能同时表达乙型肝炎（乙肝）病毒ＳＳ１、麻疹病毒ＨＡ和Ｆ及白细胞介素２（ＩＬ２）的非复制型重组痘苗病毒ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫＳＳ１，及其相应的复制型重组痘苗病毒ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１。这两株重组病毒在ＣＥＦ细胞上连续传至第２５代，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实，两株病毒均在Ａ２４、Ａ２７间稳定整合有ＳＳ１基因，非复制型重组病毒Ｃ、Ｋ间基因稳定缺失。经ＲＩＡ、ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法检测，这两株病毒均可稳定分泌表达ＳＳ１蛋白，其分泌表达的ＳＳ１蛋白与ＣＨＯ细胞表达的ＳＳ１蛋白性质相近，接近于天然。经免疫打点检测，两株病毒均可稳定表达麻疹病毒的ＨＡ与Ｆ蛋白以及ＩＬ２。而且ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫＳＳ１与ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１表达多种外源抗原的水平无显著性差异。ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫＳＳ１经皮内注射免疫家兔，４周后可诱发抗乙肝病毒ＳＳ１、抗麻疹病毒及抗痘苗病毒的特异性ＩｇＧ抗体；加强免疫２周后，特异性抗体滴度可上升４～１６倍，与其初始病毒ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫ诱发的抗体水平相同，比ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１诱发的抗体滴度低０～４倍。非复制型多价重组痘苗病毒的构建，为评价非复制型痘苗病毒载体作为多价疫苗载?

非复制型多价重组痘苗病毒粘膜与细胞免疫效果

对已构建的同时表达乙型肝炎病毒ＳＳ１、麻疹病毒ＨＡ和Ｆ以及ＩＬ２的非复制型重组痘苗病毒ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫＳＳ１，及其相应的复制型重组病毒ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１，进行了兔皮内毒力、粘膜免疫和细胞免疫效果的比较研究。发现ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫＳＳ１在兔皮内的毒力明显低于ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１。ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫＳＳ１经空肠内免疫家兔４周后，可在肠粘膜表面诱发特异性ＩｇＡ抗体，在血液中诱发特异性的ＩｇＧ抗体，其抗ＳＳ１和抗麻疹病毒ＩｇＡ和ＩｇＧ的抗体滴度与ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１免疫组相同，抗痘苗病毒ＩｇＧ抗体比ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１免疫组低１６倍。ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫＳＳ１经腹腔注射免疫４周的小鼠脾细胞，可在体外刺激产生高水平的麻疹病毒及痘苗病毒特异性ＣＴＬ，与ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１无显著性差异。这些结果初步证实了非复制型痘苗病毒载体作为多价疫苗载体的有效性及安全性。

苦味叶下珠抗乙型肝炎病毒作用的研究进展

乙型肝炎是一种世界性传染病,我国是高发区。众所周知,乙型肝炎病毒(HBV)为急性、迁延性和慢性病毒性肝炎的病原,并与肝硬化和原发性肝细胞癌的发生密切相关。但目前有效的抗乙肝病毒的药物尚少,因此,乙型肝炎的治疗是一个急待解决的问题。近年来,国内外学者对天然植物叶下珠的抗HBV作用进行了多方面的研究,现综述如下。

柯萨基B组病毒所致病毒性心肌炎间接ELISA检测方法的建立

利用提纯的Cox B1～6型病毒抗原分别包板、建立了检测临床诊断为病毒性心肌炎患儿血清中特异性IgM的间接ELISA方法。32例患儿血清中有23例检为阳性(71.9％)。利用提纯的兔抗Cox B1～6免疫血清分别包板来捕捉病毒抗原的改进间接ELISA方法检测32例患儿血清,有28例检为阳性(87.5％)。用上述两种方法对30份正常人血清进行检测,均有1份检出阳性(3.3％)。与白求恩医科大学提供的检测药盒比较,本实验方法具有较高特异性,且敏感性不受类风湿因子(RF)的影响。

反义寡核苷酸抑制癌基因的研究进展

目前,人类许多疾病尚无有效的防治方法。本世纪80年代,由于反义技术和DNA合成技术的快速进步,人们可以随心所欲地针对某一段特异的mRNA或DNA合成与其互补的一条寡核苷酸链,即反义寡核苷酸(AS ODN)。这样,AS ODN一旦与其互补的mRNA或DNA相遇,便可发生特异的结合并发挥特异的抑制作用。目前,AS ODN已被用于恶性肿瘤、病毒性疾病、遗传性疾病、寄生虫病、炎性疾病和心血管疾病等的实验研究。本文仅对ASODN抑制恶性肿瘤癌基因的研究进展做一简要概述。

浅析病毒疫苗发展中的科学与技术

浅析病毒疫苗发展中的科学与技术天津医科大学微生物学教研室博士生（３０００７０）马海伦，曹传海导师任中原公元１６世纪，天花被人们称为瘟疫，接触者无不遭受天花感染，感染者大多死亡。开始人们对其束手无策，但是在生活实践中人们逐渐地发现，感染天花的幸存者再次...

苦味叶下珠抗乙型肝炎病毒的研究

利用我国长江流域产天然植物苦味叶下珠全草进行了体外、2.2.15细胞、慢性乙型肝炎患者体内三方面抗乙肝病毒(HBV)的作用研究。将该药水及其无水乙醇提取物,分别在体外与HBsAg、HBeAg阳性血清在不同浓度、温度、时间作用后,用ELISA药盒检测HBsAg、HBeAg滴度改变,计算抑制率,结果分别为47.62％和49.09％。该药水提取物可抑制HBV-DNA转染的2.2.15细胞,在培养液中对HBsAg、HBeAg的抑制率分别为64.58％和39.17％。慢性乙肝患者口服其干粉制剂8～12周,60％HBeAg转阴及抗-HBe转阳,作用明显,但有反跳现象。研究结果表明该药可望成为有潜力的抗HBV药物。

IL-5在非复制重组痘苗病毒中的表达及其对重组病毒免疫效果的影响

利用非复制型痘苗病毒表达载体 pNEOCK11β75IL5和重组病毒RVJ12 3,通过两步重组构建了能同时表达IL 5和乙型肝炎病毒HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ12 3Δ11β75IL5。Southern blot证实 ,痘苗病毒C K片段间基因缺失的同时伴有IL 5基因的插入。鼻腔吸入分别免疫Balb/c小鼠和新西兰白兔 ,ELISPOT实验证实 ,免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgA抗体分泌细胞 (ASC)数比对照组 (RVJ12 3Δ11β75 )增加约 2倍 ,而同时小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgG抗体分泌细胞 (ASC)数与对照组无差别。可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其它分泌液样品中检测到抗乙型肝炎病毒HBsAg的特异性的IgA、IgG抗体 ,与对照组相比 ,IgA抗体阳转率及抗体滴度提高 ,而IgG则无差异。本实验说明 :IL 5可在体内选择性地增强机体的粘膜IgA反应。提示非复制载体疫苗中 ,表达的该细胞因子可有效的增强疫苗的粘膜免疫反应 。

汽车前照大灯应用发展探讨

人工光源的发展、先进控制技术的应用、新能源汽车的普及促进了汽车前照大灯系统的快速发展,为汽车制造商实现前照大灯系统设计提供了无限的空间。文章总结了汽车前照大灯使用光源类型的发展变化,分析了汽车前照大灯系统控制技术的应用与发展,并讨论未来发展的可能性。

非钳位感性开关测试下双沟槽4H-SiC功率MOSFET失效机理研究

本文对非钳位感性开关(unclamped inductive switching,UIS)下4H-SiC双沟槽功率MOSFET失效机理进行实验和理论研究.结果表明,不同于平面功率MOSFET器件失效机理,在单脉冲UIS测试下双沟槽功率MOSFET器件的栅极沟槽底角处的氧化层会发生损坏,导致了器件失效.测量失效器件的栅泄漏电流和电阻,发现栅泄漏电流急剧增大,电阻仅为25Ω;失效器件的阈值电压稳定不变.使用TCAD软件对雪崩状态下的器件电场分布进行仿真计算发现,最大电场位于栅极沟槽底拐角处,器件内部最大结温未超过电极金属熔点,同时也达到了理论与仿真的吻合.

一种能够改善鲁棒性的新型4H-SiC ESD防护器件

2020年,韩国学者以4H-SiC材料为基底提出了一种新型ESD防护器件HHFGNMOS(high holding voltage floating gate NMOSFET),此结构显著改善了4H-SiC GGNMOS(grounded-gate NMOSFET)因SiC材料特性导致的剧烈回滞现象.但是在HHFGNMOS结构中仍存在电流分布过于密集的问题.在本文中首次将comb-like结构用于HHFGNMOS防护器件,将器件的漏区底部进行梳型改造,充分利用电流集边效应使电流分布变得均匀,并通过TCAD仿真给出了Comb-like结构的设计变量对结构性能的影响.基于4H-SiC的GGNMOS,HHFGNMOS,Comb-like HHFGNMOS在TLP脉冲下的瞬态仿真结果显示,comb-like HHFGNMOS的二次失效电流I相比GGNMOS以及HHFGNMOS由17 A提高到22 A,提高了29%;此外comb-like HHFGNMOS回滞相比GGNMOS及HHFGNMOS减小了55.2%和5%.因此在面积不变、工艺相兼容的情况下较大程度改善了器件的鲁棒性,减小了回滞效应.

间接ELISA法检测柯萨奇B组病毒感染的特异性IgM抗体诊断试剂盒的研制

用抗原纯化和吸收剂处理患儿血清的方式，对已建立的间接酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）检测柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＢＶ）－ＩｇＭ方法进行了改进，在确定其特异性、敏感性和可靠性的基础上，做了主要试剂的稳定性和抗破坏性试验证实符合商品试剂盒要求。２３７例病毒性心肌炎和４１例Ｉ型糖尿病患者血清经检测阳性率分别为３３．３％和５６．１％。本方法的阳性预测值为８０％，阴性预测值为１００％，变异系数小于１１．１％。主要试剂４℃保存半年或３７℃保存一周均对标本的检测结果无显著影响。

天然药物在体外抗HBV的研究

以乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ转染细胞株２．２．１５细胞培养上清液中ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ滴度作为天然药物抗ＨＢＶ效果的评价指标，对板蓝根、苦味叶下株和４种中药混合物的抗ＨＢＶ作用进行了比较。同时，应用四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色分析法检测药物的细胞毒性。结果显示，苦味叶下株与４种中药的混合物抗ＨＢＶ的作用较强，可望成为有潜力的抗ＨＢＶ药物。

非复制重组痘苗病毒中白细胞介素6的表达及其对重组病毒免疫效果的影响

目的 研究白细胞介素 6(IL 6)在非复制型痘苗病毒中的表达及其对重组痘苗病毒免疫效果的影响。方法 利用非复制型痘苗病毒表达载体pNEOCK1 1 β75IL6和重组病毒RVJ1 2 3 ,通过两步重组构建能同时表达IL 6和乙型肝炎病毒 (HBV)HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ1 2 3ΔCK1 1 β75IL6。免疫动物并观察其免疫效果。 结果 Southernblot证实痘苗病毒C、K片段间基因缺失的同时伴有IL 6基因的插入 ,IL 6和HBsAg可同时表达。鼻腔吸入分别免疫BALB c小鼠和新西兰白兔 ,ELISPOT实验证实免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗 HBsAgIgA、IgG抗体分泌细胞 (ASC)数比对照组 (RVJ1 2 3ΔCK1 1 β75)显著增加 ,并可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其他分泌液样品中检测到抗 HBsAg的特异性的IgA、IgG抗体。与对照组相比 ,IgA、IgG抗体阳转率及抗体滴度提高。结论 非复制型痘苗病毒载体中表达的IL 6可增强其诱导的免疫反应 ,为细胞因子IL

用间接ELISA法检测柯萨奇B组病毒特异性IgM抗体

用间接ＥＬＩＳＡ法检测柯萨奇Ｂ组病毒特异性ＩｇＭ抗体李晓眠，刘民，罗世春，马海伦，任中原（天津医学院微生物学教研室，天津３０００７０）特异性ＩｇＭ抗体的检测是早期诊断传染病的可靠方法之一。在病毒感染疾病中已广泛应用直接、间接和抗体捕捉ＥＬＩＳＡ法作早...

美术课堂中的合作学习与美育的“知行合一”

在中共中央、国务院颁布的《关于深化教育改革,全面推进素质教育的决定》中强调:“美术不仅能陶冶情操,提高素养,而且有助于开发智力有着不可替代的作用”。培养学生的合作精神、合作能力是小学美术基础教育的重要目标,而合作学习的方法恰恰顺应了这一需求。美术教学中学生的合作学习能展示其综合性、趣味性以及人文性的特点,同时对学生创新实践有着深刻的影响。健康的审美观,以及学生的鉴赏和创作美的能力都离不开合作学习。在合作学习中不同生审美经验与文化相互碰撞,从而获得多维度的“养分”,这与美育的理念“知行合一”本文着重阐述培养合作学习对美育教育的重要影响。