衣康酸二甲酯对H_(2)O_(2)诱导的AML-12细胞线粒体功能障碍的调节作用及机制研究

[目的]本文主要探究衣康酸二甲酯(dimethyl itaconate,DMI)对小鼠肝细胞线粒体功能障碍的调节作用及其机制,旨在为衣康酸二甲酯作为一种生理调节剂用于防控畜禽因线粒体功能障碍引发的相关疾病提供理论依据。[方法]以小鼠肝细胞系(AML-12细胞)为研究对象,试验分为对照组(NC)、0.5 mmol·L^(-1)DMI处理组、150μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理组和0.5 mmol·L^(-1)DMI+150μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理组。分别检测AML-12细胞中ATP含量、线粒体DNA(mtDNA)拷贝数、线粒体活性氧(mROS)水平和线粒体膜电位(MMP)等生化指标,并用免疫印迹法检测AMP-依赖性蛋白激酶(AMPK)信号通路关键因子蛋白的表达水平。[结果]0~0.5 mmol·L^(-1)DMI和0~150μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)对细胞活力无显著影响。DMI处理显著抑制H_(2)O_(2)诱导的AML-12细胞中mROS水平升高以及MMP的异常下降,以及ATP含量和mtDNA拷贝数的下降(P<0.01)。DMI处理极显著抑制H_(2)O_(2)诱导的小鼠肝细胞中p-AMPK、NAD-依赖性去乙酰化酶1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(Nrf1)和线粒体转录因子A(TFAM)蛋白水平的下降(P<0.01),而AMPK抑制剂Compound C预处理则可逆转这一效应。[结论]DMI通过激活AMPK-SIRT1-PGC1α信号通路缓解H_(2)O_(2)诱导的AML-12细胞线粒体功能障碍。

饲喂大豆黄酮对仔猪肠黏膜二糖膜消化的影响

Experiments to investigate the effects of daidzein on membrane digestion of disaccharide in suckling and weanling piglet were carried in vitro. 12 piglets were randomly assigned two groups, either supplemented with 20mg/kg·BW daidzein or skim milk powder once per two days after birth one week. 14 and 35 days old piglets were killed, jejunum and colon were collected for further study.The result showed that supplemented with daidzein can improve the activities of maltase and lactase in jejunum mucosa and colon mucosa in the lactational period of piglet, the activities of maltase and lactase in jejunum mucosa increased by 63.30%(P<0.01)and 49.98%(P<0.01), and those in the colon increased by 56.78%(P<0.01)and 24.05%(P<0.01)respectively. However, in weanling piglets the activity of lactase was decreased by 41.40%(P<0.05),whereas the activity of maltase increased by 22.31%(P<0.01) in jejunum, the activity of maltase increased by 21.14%(P<0.05)in colon. This result indicates that feeding daidzein can improve the using of disaccharide in piglets.

异黄酮对雄性大鼠芳香化酶活性及骨骼肌生长的影响

研究 3种异黄酮 (Da、IPF和 7HF) 对雄性大鼠芳香化酶活性及骨骼肌生长的影响。试验选用 20只 28日龄雄性SD大鼠, 随机分成 4组, 每组 5只, 其中 1组为对照组, 另外 3组在每千克日粮中分别添加 5mg的Da、IPF和 7HF。实验结果表明, Da、IPF和 7HF均能升高腿肌中RNA/DNA的比值, 分别较对照组升高了 19 09%、9 09%和 15 45%;同时显著增加血清中睾酮的含量, 降低血清中雌二醇的含量, 抑制睾丸组织中芳香化酶的活性。提示异黄酮 (Da、IPF、7HF) 通过抑制芳香化酶活性而降低睾酮向雌二醇的转化, 使体内睾酮含量升高, 有助于促进动物的生长发育。

脱氢表雄酮对大鼠脂类代谢和抗氧化作用的影响

目的:研究灌胃脱氩表雄酮(DHEA)对大鼠脂类代谢和抗氧化作用的影响。方法:选用健康雄性SD大鼠40只,随机分为4组(n=10)。对照组灌胃给予灭菌生理盐水,实验组灌胃给予20 mg/kg、10 mg/kg、5 mg/kg体重的DHEA受试溶液,灌胃量均为1.5 ml。每天一次,连续35 d。实验结束后采血测定血糖(BG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),血清和肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:DHEA显著降低大鼠血糖、TG、HDL-C及血清和肝脏MDA含量,显著升高血清LDL-C含量和肝脏SOD活性,而对大鼠体重、血清TC含量和SOD活性没有显著影响。结论:DHEA具有降低大鼠血脂和增强抗氧化能力的作用。

脱氢表雄酮对幼年大鼠脂类代谢的影响

选用健康雄性SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只。对照组腹腔注射50%乙醇+50%丙二醇混合液,3个试验组分别经腹腔注射1、5和10 mg.kg-1的脱氢表雄酮(DHEA)溶液。每隔1 d注射1次,连续7次。试验结果表明,DHEA能够降低幼年期大鼠腹脂率、血清甘油三酯(TG)、非酯化脂肪酸(NEFA)的水平,对血清中胆固醇(TC)水平没有显著影响;高剂量的DHEA可显著降低肝脏组织中脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)的活性。不同浓度的DHEA均可显著降低血清中胰岛素和TNF-α的水平,具有增加胰高血糖素的趋势。DHEA能显著降低肝脏中糖原、TC水平,对TG没有影响,但DHEA可显著增加肝脏中Na+-K+-ATP酶活性。提示,DHEA具有降低幼年期大鼠脂肪蓄积的作用。

大豆黄酮及半胱胺对鹅外周血液中胰岛素和胰高血素的影响

试验选用 2 1日龄雄性东北大白鹅 2 7只 ,随机分成 3组 :对照组 ,大豆黄酮 (Da)组和半胱胺 (Cs)组。在第 9周龄时 ,每组随机取 3只 ,装置临时性翅静脉血管插管 ,并于第 6 4,6 6 ,6 8日龄间隔一定时间 ,每天采集血样 4次 ,采用放射免疫法测定血液中胰岛素和胰高血糖素含量。结果表明 ,大豆黄酮组及半胱胺组外周血液中胰岛素含量较对照组分别升高 5 .0 % (P <0 .0 1)和6 .3% (P <0 .0 1) ;胰高血糖素分别升高 13.3% P <0 .0 1)和 18.8% (P <0 .0 1)。

染料木黄酮对幼年大鼠脂代谢和抗氧化作用的影响

目的:染料木横酮是大豆异黄酮的主要成分之一。目前,有关大豆黄酮对脂代谢及抗氧化方面的研究对象主要是成年动物,它对幼年大鼠是否也具有类似效应,实验观察染料木黄酮对幼年大鼠脂类代谢和抗氧化作用的影响。方法:实验于2006-10/12在南京农业大学动物医学院生物化学教研室完成。①实验材料:21日龄清洁级幼年期雄性SD大鼠20只,体质量为(85±5)g;染料木黄酮(Sigma公司),纯度>99%,制成5g/L的受试液备用。②实验分组及过程:将SD大鼠随机平均分为2组,实验组腹腔注射5mg/kg体质量的染料木黄酮,对照组腹腔注射体积分数为0.5的乙醇+体积分数为0.5的丙二醇混合液,隔天注射1次,连续7次。③实验评估:两组幼年期大鼠腹脂率、生化指标及内分泌激素。结果:①腹脂率:染料木黄酮使幼年期大鼠腹脂率降低了6.51%。②生化指标:与对照组相比,试验组大鼠血糖含量升高了60.73%(P<0.01),血清三酰甘油、总胆固醇、非酯化脂肪酸、胰岛素、肿瘤坏死因子α分别降低了35.62%,22.73%,29.08%(P均<0.01)、4.46%(P>0.05),24.12%(P<0.01);肝脏中糖原、三酰甘油、总胆固醇的含量分别降低了70.04%,58.91%,和31.19%(P均<0.01);脂蛋白脂酶、肝脂酶及总脂酶分别升高了46.51%(P<0.05),32.35%和42.08%(P<0.05);琥珀酸脱氢酶、丙酮酸激酶、Na+-K+-ATPase分别升高了54.39%,86.45%,549.50%(P均<0.01)染料木黄酮处理后大鼠肝脏中超氧化物歧化酶、总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶活性分别较对照组升高了7.07%,53.66%(P<0.01)和21.72%,丙二醛含量降低了11.54%(P<0.01)。③内分泌激素:与对照组相比,实验组中胰岛素、肿瘤坏死因子α的含量分别降低了4.46%,24.12%(P<0.01),胰高血糖素的含量升高了12.26%。结论:染料木黄酮具有降低幼年期大鼠血脂和增强抗氧化能力的作用。

伊扑拉芬对大鼠生长性能及性激素水平的影响

20只28日龄Sprague-Dawley(SD)大鼠等分成2组,试验组在基础日粮中添加伊扑拉芬5 mg/kg,试验为期5周。结果表明:添喂伊扑拉芬后,雄性大鼠与对照组相比日增重提高38.65%,料重比降低为对照组的38.24%;腿肌的相对重量升高56.84%,脂肪的相对重量降低5.71%;血清尿素氮水平下降10.17%,谷丙转氨酶活性、碱性磷酸酶活性分别较对照组升高33.67%和43.76%,血清睾酮水平较对照组上升773.53%,腿肌RNA/DNA的比率较对照组升高10.40%。雌性大鼠与对照组相比日增重和料重比均无显著差异;腿肌的相对重量升高2.22%,脂肪的相对重量降低16.92%;血清尿素氮、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶及雌二醇分别较对照组降低10.56%、29.05%、11.90%和23.82%,腿肌RNA/DNA较对照组降低5.75%。

大豆异黄酮植物雌激素在大鼠离体小肠中吸收的研究

目的:研究大豆黄酮和染料木素在雄性大鼠离体小肠中的吸收情况。方法:利用翻转的离体小肠囊,通过RP-HPLC检测囊腔内液、囊腔外液、粘膜中大豆黄酮和染料木素的含量,粘膜中总ATP酶活性对异黄酮的吸收进行研究。结果:在外翻的小肠囊腔内大豆黄酮(Da)和染料木素(Gen)吸收达到峰值所需的时间分别为2～3h、3～4h,且最大吸收率随着浓度的增加而呈逐渐降低的趋势;小肠粘膜中Da、Gen的含量呈现出明显的剂量依赖性,在同一浓度下小肠粘膜中Da、Gen的含量也呈现出明显的时间依赖性;Da和Gen对小肠粘膜中总ATP酶活性均有显著的促进作用。结论:上述结果提示,大豆异黄酮在离体小肠中的吸收主要是主动吸收。

大豆异黄酮对大鼠小肠上皮细胞生长及葡萄糖和氨基酸吸收的影响

分离培养了SD大鼠的小肠上皮细胞, 用3H TdR掺入法分别检测了 0、0 1、1、10、100和 1 000ng·mL-1 2种大豆异黄酮 (大豆黄酮和染料木素) 对该细胞生长的影响, 并测定了细胞碱性磷酸酶活性的变化。同时, 利用翻转的离体小肠囊研究了 0、0 1、0 5、1和 5μg·mL-1大豆异黄酮对小肠葡萄糖与氨基酸吸收的影响, 并检测了小肠黏膜总ATP酶活性的变化。结果显示: 100ng·mL-1的大豆异黄酮 (大豆黄酮、染料木素 ) 能够提高该细胞3H TdR的掺入量和碱性磷酸酶的活性, 提示大豆异黄酮可能有促小肠细胞生长的活性; 0 1和 0 5ng·mL-1的大豆黄酮和 0 5和 1 0ng·mL-1的染料木素对离体小肠葡萄糖的吸收具有促进作用, 而对赖氨酸与色氨酸的吸收以及小肠黏膜总ATP酶的活性没有明显影响。

大豆异黄酮对大鼠乳腺癌细胞内cAMP/PKA信号途径的影响

本实验研究了大豆异黄酮对SHZ-88大鼠乳腺癌细胞内cAMP/PKA信号途径的影响。实验设3组:空白对照组、50μg/ml大豆黄酮及15μg/ml染料木素组。采用放射免疫测定法(RIA)检测了胞内cAMP的浓度、腺苷酸环化酶(adenylatecyclase,AC)和磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)的活性,用(γ-32P)ATP掺入法测定cAMP依赖性PKA的活性,半定量RT-PCR法分析cAMP反应元件结合蛋白(cAMPresponseelementbindingprotein,CREB)mRNA表达的变化。结果表明:在处理后5min,大豆黄酮组和染料木素组细胞的cAMP浓度分别比对照组升高了9.5%和11.0%(P<0.05);10min时,分别比对照组升高31.0%和40.3%(P<0.01)。3组细胞的AC活性在处理时间内没有明显变化。但在处理后5min,大豆黄酮组和染料木素组细胞的PDE活性分别降至对照组的71.8%和71.6%(P<0.05)。处理后20min,大豆黄酮组和染料木素组细胞PKA活性分别上升到对照组的125.8%和122.3%(P<0.05);到40min时仍维持在高水平。大豆黄酮组和染料木素组细胞CREBmRNA的表达量在处理后3h分别比对照组增加31.6%和51.1%(P<0.05);6h后开始下降。这些结果提示,大豆异黄酮能够激活大鼠乳腺癌细胞内cAMP/PKA信号途径;而且是通过抑制磷酸二酯酶的活性,导致胞内cAMP浓度升高而实现的。

丙酮酸肌酸对肉鸡脂肪代谢和蛋白质代谢的影响

300羽1日龄雄性AA肉鸡随机分为4组,每组3个重复,每个重复25羽。分别于基础日粮中添加质量分数为1%、5%和10%丙酮酸肌酸(CrPyr),以不添加CrPyr为对照,饲喂至42日龄时各组每个重复分别随机宰杀4只,采集血样、肝脏、腹脂、左侧胸肌和腿肌,测定血清葡萄糖(BG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、肌酸激酶(CK)、尿酸(UA)、三碘甲腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、胰高血糖素、胰岛素和瘦素含量,以及肌肉核酸和蛋白质含量。结果表明:与对照组相比,CrPyr显著降低肉鸡腹脂率及肝脏和血清中TG、LDL-C、UA含量,但增加血清FT3含量;CrPyr明显提高胸肌率、腿肌蛋白质含量及RNA/DNA值;同时CrPyr还提高了肌肉胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)和生肌调节因子的mRNA转录水平。提示:CrPyr可通过提高肉鸡体内脂类分解代谢相关酶活性及激素水平,对脂肪代谢起调节作用;同时通过促进蛋白质的沉积,提高肌肉蛋白质含量,促进肌肉生长。

内毒素对山羊乳腺组织中与乳腺炎相关的酶和细胞因子的影响

8只泌乳期的健康睢宁白山羊,产后72 h分别用内毒素和灭菌生理盐水经乳头管灌注左右侧乳房.灌注前及灌注后0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、24 h观察山羊整体及乳房局部变化.灌注24 h后,处死动物,取乳腺组织,部分用Bou in氏液固定,部分用液氮保存.临床症状及病理切片观察均显示,山羊表现典型的急性乳腺炎症状.检测两侧乳腺组织中部分与乳腺炎症相关因子的含量及其基因表达水平的结果表明:与灌注生理盐水对照相比,灌注内毒素侧乳腺组织中N-乙酰-β-D氨-基葡萄糖苷酶(NAGase)、髓过氧化物酶(MPO)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的活性及IL-1β、IL-6的含量极显著升高(P<0.01),TNFα-含量显著升高(P<0.05);相同条件下对2种处理组织样中3种细胞因子mRNA表达水平进行PCR扩增,灌注内毒素侧能检到明显的目的条带,对照侧未见明显的目的条带.

卡介菌多糖核酸对内毒素诱发的实验性山羊乳腺炎乳腺组织的保护研究

目的本试验通过卡介菌多糖核酸对内毒素诱发的实验性山羊乳腺炎乳腺组织的保护研究,探讨灌注免疫增强剂BCG-PSN对乳腺组织的影响,研究调动乳腺自身的防御功能,以防治乳腺炎的发生。方法选取泌乳初期健康睢宁白山羊6只,左乳区经过乳头管灌注卡介菌多糖核酸5 ml,右乳区灌入5 ml注射用生理盐水作为对照,连灌6 d。第7天按50μg.kg-1体重分别向左、右乳区灌注大肠杆菌内毒素。灌注前及灌注后0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、24 h观察山羊整体及乳房局部变化。灌注24 h后,处死动物,取乳腺组织,部分Bouin氏液固定、部分液氮保存。结果临床症状及病理切片观察均显示,山羊表现典型的急性乳腺炎症状。与灌注生理盐水对照相比,乳腺灌注卡介菌多糖核酸能显著降低乳腺组织中部分炎症相关因子的含量及其基因表达水平。其中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)、髓过氧化物酶(MPO)、碱性磷酸酶(AKP)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)活性显著降低(P<0.05);IL-1β、TNF-α的含量及其mRNA表达水平均显著降低(P<0.05),IL-6的含量显著降低(P<0.05),其mRNA表达水平有所降低但差异不显著(P>0.05)。结论灌注卡介菌多糖核酸可以抑制乳腺组织内IL-1β、TNF-α等炎性细胞因子及和炎症相关酶的过度释放、减轻炎症因子对乳腺上皮细胞的损伤,对内毒素诱发的山羊实验性乳腺炎有较强的保护作用。

丙酮酸肌酸对大鼠胴体组成及机体氨基酸谱的影响

以大鼠为实验对象,灌胃丙酮酸肌酸(CrPyr),通过观测其对机体胴体组成及其血清与组织中氨基酸谱的影响,探讨丙酮酸肌酸对机体中营养物质的代谢流向及其胴体品质的影响。实验选用40只雄性清洁级SD大鼠,随机分为对照组(C)、低剂量组(L)、中剂量组(M)和高剂量组(H)4个处理组,每个处理组按体质量分别灌胃0、750、1500、3000mg/(kgbw·d)的CrPyr。实验为期7周,第49天宰杀大鼠,借助反相高效液相色谱(RP-HPLC)方法测定血清、组织中氨基酸含量的变化。结果表明:与对照组相比,在不影响饲料转化率的情况下,灌胃CrPyr可显著(P<0.05)地提高其腿肌的相对质量;灌胃CrPyr可显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)升高大鼠血清和骨骼肌中主要生糖氨基酸的含量,但对肝脏组织的氨基酸谱则没有明显影响。提示,灌胃CrPyr可能通过升高生糖氨基酸的含量,从而促进大鼠体蛋白的合成。

C57BL/6小鼠感染猪链球菌2型后脾脏消减cDNA文库的构建及差异基因分析

探讨C57BL/6品系小鼠体内猪链球菌2型感染后的差异表达基因,以期为进一步研究猪链球菌的致病机制和抗病性研究提供重要的参考依据。利用抑制性消减杂交技术构建了8周龄C57BL/6小鼠感染猪链球菌2型后的脾脏消减cDNA文库。对获得的237个阳性克隆进行测序,利用GenBank BLAST分析核酸和蛋白质同源性,共获得159条差异表达序列标签(ESTs)。试验结果证实,正向文库有34个、反向文库有30个不同的基因与ESTs具有高度的同源性,它们分别是免疫性能、细胞组分、细胞信号分子、转录因子等的重要功能基因产物。经抑制消减杂交筛选出的差异表达基因主要有免疫球蛋白IgM重链-6、胸腺素4-beta、磷酸酶张力结合蛋白、转磷酸胆碱酶、肽酰-脯氨酰-顺反式异构酶、磷脂酰丝氨酸脱羧酶、胰岛素样生长因子结合蛋白-3等基因。筛选到较多EST与抗病性相关的重要基因具有很高的同源性,且这些基因在猪链球菌2型感染后的表达具有显著差异,提示这些基因在猪链球菌2型感染过程中发挥着重要功能。

肉种鸡饲养方式对子代胚肝蛋白表达谱的影响

挑选40周龄体况良好的产蛋三黄肉种鸡200只,随机分为对照组(笼养)和试验组(平养),饲喂相同的肉种鸡日粮。收集受精种蛋各300枚并孵化,分别取9、14、19胚龄和出壳时的肝脏,经2D-PAGE分离后,对经胶体考马斯亮蓝G-250染色的图像用PDquest7.3软件进行差异表达分析,取差异表达的蛋白质斑点进行胶内酶切和MALDI-TOF-MS分析。结果表明,试验组和对照组在9、14和19胚龄时,胚质量和肝质量均无显著差异;出壳时,试验组胚质量、肝质量均显著小于对照组(P<0.05)。蛋白表达谱分析发现29个在试验组和对照组间表达量存在两倍以上差异的蛋白斑点,其中22个得到鉴定。在这些被鉴定的蛋白中,大多涉及到机体内基础代谢的酶、能量产生及信号传导等。

卡介菌多糖核酸缓解内毒素诱发大鼠乳腺炎的机制研究

【目的】为探讨卡介菌多糖核酸(polysaccharide nucleic acid fraction of Bacillus Calmette Guerin,BCG-PSN)对内毒素(endotoxin or lipopolysaccharide,LPS)诱发实验性动物乳腺炎的保护机制,【方法】72只清洁级SD大鼠被随机分成实验组和对照组(n=36)。确定怀孕14d起,隔日左后腿胫骨前肌肌内注射BCG-PSN(实验组)或灭菌生理盐水(对照组)0.33mL/只,连续5次;产后72h经乳头管灌注LPS10μg/侧到第4对乳腺(两侧)内。分别于灌注前(定义为0h)及灌注后3、6、9、12和24h(n=6)颈静脉放血处死动物,采集样品。【结果】组织病理学观察显示,BCG-PSN加快了LPS诱发炎症的组织修复进程,促进了炎症后期泌乳量的恢复。定量RT-PCR结果显示,BCG-PSN能降低乳腺组织中Toll样受体-4(toll-like receptor-4,TLR-4)mRNA表达水平,实验组与对照组相比,第6、9、24h差异显著。酶活性检测结果显示,诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOs)活性在乳腺组织中和血清中变化规律相反;组织中酶活性,实验组和对照组分别在6、9h达到最高,血清中活性分别在6、3h最低。放射免疫检测结果显示,同对照组相比,BCG-PSN使乳腺组织中炎症相关细胞因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌极值降低,极值出现时间提前,而血清中未表现出明显的变化。【结论】BCG-PSN可能通过降低TLR-4的表达,抑制炎性细胞因子及酶的过度分泌,缓解LPS及相关因子(TNF-α、iNOs)对乳腺组织的损伤。

一种改良的鸡胚原代肝细胞的分离培养方法

剪切9日龄三黄肉鸡鸡胚肝组织,胰酶消化分离肝细胞,用改良的M199培养液进行培养。结果显示,分离的肝细胞即时存活率为93.7%±2.6%;过碘酸席夫试剂染色后,胞质中布满粉红色糖原颗粒;肝细胞活力和白蛋白分泌功能在第3天达到最高水平,这是体外研究禽类肝脏功能和代谢的最佳时机。