卵巢上皮癌组织中survivin的表达及其与Fas、FasL表达的关系

背景与目的:近期研究表明,凋亡抑制蛋白survivin在细胞凋亡和有丝分裂中起重要作用,于多种常见的恶性肿瘤有表达。本研究拟探讨survivin在卵巢上皮癌中的表达,及其与Fas、FasL表达的相互关系。方法:用免疫组织化学SP法检测84例卵巢上皮癌组织、39例卵巢良性肿瘤组织和20例正常卵巢组织中survivin、Fas、FasL的表达。结果:63.1%的卵巢上皮癌组织表达survivin基因,良性肿瘤组织表达率为30.8%,而正常卵巢组织中无表达,差异有显著性(P<0.01)。Survivin表达的高低与临床分期、组织学分级等密切相关。Fas在卵巢上皮癌组织中的表达(23.8%)显著低于卵巢良性肿瘤组织(53.8%)(P<0.01);而FasL在卵巢上皮癌组织中的表达(44.0%)则显著高于卵巢良性肿瘤组织(23.1%)(P<0.05)。survivin的表达与Fas、FasL的表达密切相关。结论:(1)Survivin基因在卵巢上皮癌组织中表达上调;(2)Fas与FasL在卵巢上皮癌中的异常表达及其与survivin基因的表达密切相关,说明它们在卵巢上皮癌的发生发展过程中可能通过共同的机制参与卵巢上皮癌的发生。

雷帕霉素联合紫杉醇诱导卵巢癌细胞A2780和SKOV3凋亡及其分子机制

背景与目的:研究表明,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)在恶性肿瘤发生发展中起重要作用,本研究观察特异性mTOR抑制剂雷帕霉素联合紫杉醇对卵巢癌细胞A2780和SKOV3的作用,并探讨其内在的分子机制。方法:A2780、SKOV3细胞经雷帕霉素和紫杉醇处理后,以MTT法检测细胞的增殖情况,金正均法计算q值判断两药的相互作用。以流式细胞仪检测细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测survivin的表达。结果:雷帕霉素联合紫杉醇可抑制A2780和SKOV3细胞增殖,且随时间延长抑制作用越显著,当两药合用72h时抑制率分别达到34.9%(A2780)和37.1%(SKOV3),与单独用药组相比差异有显著性(P<0.01),金正均法显示各时间点q值均>1.15,显示二者有协同作用。雷帕霉素和紫杉醇可使A2780和SKOV3细胞发生凋亡,并且在两者联用时凋亡率达到最高。经雷帕霉素和紫杉醇作用后的A2780和SKOV3细胞表达survivin较处理前明显下降。结论:体外雷帕霉素和紫杉醇可抑制A2780和SKOV3细胞增殖并诱导其发生凋亡,并可使survivin基因的表达下调,且两者联合应用时可显著增加其抑制作用,具有协同作用。

紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡及对survivin基因表达的影响

目的 :观察紫杉醇对人卵巢癌细胞系A2 780凋亡的作用 ,探讨其对卵巢癌细胞survivin基因表达的影响。方法 :应用MTT、流式细胞仪等方法研究紫杉醇对卵巢癌细胞系A2 780凋亡的诱导作用 ,运用RT- PCR分析紫杉醇对卵巢癌细胞survivin表达的影响。结果 :紫杉醇可诱导卵巢癌细胞系A2 780凋亡 ,不同浓度的紫杉醇引起的凋亡率不同 ,在紫杉醇浓度≥ 10 - 7mol.L- 1时 ,凋亡率显著升高。经紫杉醇作用后的卵巢癌细胞表达sur vivin较用药前明显下降。结论 :紫杉醇可能通过抑制survivin的表达 ,促进肿瘤细胞凋亡。

PBL联合LBL双轨双向同步教学法在八年制医学生妇产科临床实习中的应用与体会

目的:探讨(Problem-Based Learning,PBL)PBL病案分析法与采用LBL教学法在妇产科临床实习教学中的应用效果。方法:采用PBL联合LBL教学法组40人,采用以授课为基础的LBL教学法组40人为对照组,统计学分析比较两组实习成绩。结果:采用PBL联合LBL双轨双向同步教学法组的成绩明显优于对照组,统计分析具有显著性。结论:在妇产科临床教学中,PBL联合LBL双轨双向同步教学法较LBL教学法更有效,具有积极意义。

卵巢癌药物敏感基因治疗研究进展

卵巢癌 (OC)是妇产科死亡率最高的恶性肿瘤 ,临床上多采用手术切除和联合化疗等传统方法治疗 ,效果有限。近年来 ,药物敏感基因治疗 (DSGT)已逐渐成为卵巢癌基因治疗的一种重要方法 ,显示出较好的应用前景。现介绍药物敏感基因的作用机制并对目前肿瘤靶向治疗的现状和进展作一综述。

survivin与妇科恶性肿瘤

survivin是近年来发现的凋亡抑制蛋白(IAP)家族的新成员,具有双重功能:既能抑制细胞凋亡,又可以调节有丝分裂。它选择性表达于常见的多种恶性肿瘤,而在正常组织和成人分化组织中并不表达,因此可作为一个潜在的药物靶向,同时又与肿瘤的发病机制、化疗及预后密切相关,有着极为广阔的应用前景。

紫杉醇对卵巢癌细胞作用的浓度依赖性及其机制探讨

目的探讨不同浓度紫杉醇对卵巢癌细胞发挥抗癌效应的内在机制。方法以0．01、0．1、1、10、50μmol／L紫杉醇作用于人卵巢癌细胞系A2780，采用碘化丙啶（PI）单染法流式细胞术检测不同浓度紫杉醇作用下细胞周期的变化情况。进而对细胞进行同步化处理，采用PI单染法流式细胞术分析低浓度（0．01μmol／L）紫杉醇对细胞周期的影响；Annexin V／PI双染法流式细胞术分析高浓度（50μmol／L）紫杉醇对A2780细胞坏死的影响。结果①紫杉醇浓度为0．1、1、10μmol／L时，G2／M期细胞比例明显高于0．01μmol／L组（P〈0．01）和50μmol／L组（P〈0．01）。②A2780细胞经同步化处理后给予0．01μmol／L紫杉醇，经过一个细胞倍增时间未观察到G0／G1期阻滞。③0．01μmol／L组，1μmol／L组坏死细胞比例明显低于50μmol／L组（P〈0．01）。结论在0．1～10μmol／L的浓度范围内，紫杉醇可能通过诱导G2／M期阻滞使卵巢癌细胞发生凋亡，浓度为0．01μmol／L时紫杉醇诱导凋亡与G0／G1期或G2／M期阻滞均无关，浓度为50μmol／L时紫杉醇可能主要通过诱导细胞坏死发挥抗癌效应。

VEGF-C和VEGF-R3在乳腺癌中的表达及与淋巴结转移的关系

目的探讨VEGF-C及其受体VEGF-R3在乳腺导管癌中的表达及与淋巴结转移等临床病理指标的相关性。方法采用免疫组化方法,检测60例乳腺导管癌及邻近正常组织中VEGF-C和VEGF-R3表达,并将表达结果与淋巴结转移情况及临床病理特征进行统计学分析。结果乳腺导管癌中分别有78%和83%的VEGF-C、VEGF-R3阳性表达,而癌旁及正常乳腺组织散在性弱表达或无表达。VEGF-C在淋巴结转移组表达评分中位数为6,而在非淋巴结转移组评分中位数为1,差异有极显著性(P<0.01)。VEGF-R3在乳腺癌淋巴结转移组与淋巴结非转移组表达评分中位数分别为6.0、2.0,差异亦有极显著性(P<0.01)。结论VEGF-C与VEGF-R3在乳腺癌的侵袭进展及区域淋巴结转移方面可能起重要作用。

GRP78在三种不同乳腺癌细胞的表达及其意义

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在高低转移对的乳腺癌细胞的表达及其意义。方法:分别采用半定量RT-PCR,蛋白免疫印迹法和细胞免疫荧光方法检测GRP78在三种不同乳腺癌细胞株(MDA-MB-231、435S和MCF-7)的mRNA蛋白表达及其亚细胞定位情况。结果:GRP78 mRNA和蛋白在(MDA-MB-231细胞的表达最高,其次为(MDA-MB-435S,在MCF-7的表达最低;共聚焦显微镜下观察到GRP78蛋白主要定位在细胞浆,在细胞膜以及细胞核内也有少量的表达。结论:GRP78是乳腺癌的一个促癌基因,在乳腺癌的发生、发展过程中发挥着重要作用,其可作为抗乳腺腺癌治疗的一个新的分子靶点。

αv整联蛋白拮抗剂RGD肽对乳腺癌细胞增殖侵袭能力影响的研究

目的：研究αv整联蛋白拮抗剂RGD肽对乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7增殖侵袭能力的影响,探讨其在肿瘤靶向性治疗中的作用机制。方法：化学合成RGD肽,免疫细胞荧光技术检测RGD肽与MDA-MB-231、MCF-7细胞结合能力；MTT法检测不同浓度RGD肽对细胞增殖能力的影响；流式细胞学检测RGD肽处理对细胞周期和凋亡的影响；Boyden小室体外侵袭实验测定RGD肽处理后细胞迁移与侵袭能力的改变。结果：RGD肽与MDA-MB-231、MCF-7细胞均有特异性结合作用,15μmoI/L及更高浓度的RGD肽作用24h后细胞增殖能力显著降低(P＜0.01),细胞凋亡明显增加,细胞阻滞于G_0/G_1期,且RGD肽对细胞体外侵袭能力有不同程度的抑制作用。结论：RGD肽作为αv整联蛋白的一种拮抗剂,不仅具有药物、基因治疗载体的导向运输功能,更具有肿瘤的直接杀伤效应,是一种理想的肿瘤靶向性治疗药物。

可溶性VEGF受体-3原核表达载体的构建与蛋白表达

目的克隆并原核表达可溶性血管内皮细胞生长因子受体-3(sVEGFR-3),用于受体阻断剂的筛选及制备。方法利用RT-PCR技术从人胎盘组织中扩增VEGFR-3胞外Ⅰ～Ⅲ区cDNA片段,通过基因重组技术将该片段克隆至原核表达载体PTrcHisA中,连接产物转化大肠杆菌TOP10,IPTG诱导融合蛋白表达,纯化获得可溶性受体。结果成功构建表达载体,经IPTG诱导获得大量稳定表达的sVEGFR-3融合蛋白,纯化后获得纯度达到80%以上的可溶性受体。结论大量可溶性VEGFR-3的获得有助于进一步探索肿瘤淋巴道转移的靶向性治疗方案。

血管内皮生长因子受体-3对宫颈癌细胞凋亡的效应研究

目的研究血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)在人宫颈癌细胞凋亡过程中的作用。方法用基因重组方法构建人反义VEGFR-3基因真核表达载体,用电穿孔法转染人宫颈癌细胞系Hela细胞。采用WesternBlot分析转染前后细胞中VEGFR-3蛋白的变化。利用Hoechst33258染色和流式细胞仪观察转染后Hela细胞的凋亡情况。结果转染反义VEGFR-3质粒后,Hela细胞VEGFR-3的蛋白表达水平明显下降,细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。结论抑制VEGFR-3的表达可促进宫颈癌细胞的凋亡,VEGFR-3可能是肿瘤基因治疗的一个潜在新靶点。

葡萄糖调节蛋白78在乳腺癌细胞侵袭及转移中的作用

目的探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在乳腺癌细胞(231)侵袭、转移过程所起的作用。方法构建GRP78真核反义表达载体,转染入231细胞,利用PCR和蛋白印迹方法检测转染有反义GRP78的231细胞和MCF-7细胞的GRP78表达情况;并用伤口愈合实验和体外侵袭实验证验转染细胞转移和侵袭的变化。结果转染反义GRP78的231细胞内GRP78RNA和蛋白表达明显低于未转染细胞;反义GRP78基因对乳腺癌细胞231细胞的侵袭和转移有抑制作用。结论GRP78是乳腺癌的一个促癌基因,下调GRP78基因表达能明显抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移能力。GRP78为乳腺癌基因治疗的一个新靶点。

二肽基肽酶对前列腺癌细胞系1E8侵袭转移的影响

目的:探讨二肽基肽酶(DDPⅣ)对前列腺癌细胞1E8侵袭、转移的影响。方法:用亚克隆技术构建DDPⅣ基因反义真核表达质粒,脂质体法将其分别转入高转移潜能的人前列腺癌细胞1E8,并应用脂质体介导的基因转摘要目的:探讨二肽基肽酶(DDPⅣ)对前列腺癌细胞1E8侵袭、转移的影响。方法:用亚克隆技术构建DDP染技术,将重组质粒导入1E8细胞中,应用细胞增殖抑制试验(CCK-8)、蛋白印迹和体外侵袭实验等方法观察了1E8细胞转染前后,细胞生长、DDPⅣ蛋白表达以及细胞体外侵袭能力等指标的变化。结果:成功构建了反义DDPⅣ真核表达载体;将其转染入1E8细胞36h、48h后,反义DDPⅣ基因对前列腺癌细胞的侵袭和转移有促进作用;DDPⅣ基因表达下调能使1E8细胞的体内外侵袭能力增强。结论:DDPⅣ是前列腺癌的一个抑癌基因,在前列癌的侵袭转移过程中发挥着重要作用,下调DDPⅣ基因表达能明显促进前列腺癌细胞的侵袭和转移能力。提示DDPⅣ可作为前列腺癌抗侵袭治疗的分子靶点。

PRXⅡ蛋白及mRNA在小鼠卵巢不同发育阶段的表达

目的:探讨PRXⅡ在小鼠卵泡发育不同阶段的表达。方法:选择不同发育时期的昆明小鼠卵巢,用免疫组化SP染色法,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同发育期卵巢组织中PRXⅡ蛋白、mRNA的表达水平。结果:PRXⅡ蛋白在各级卵泡的卵母细胞及颗粒细胞中均有表达,其表达水平随卵泡发育逐渐增强。始基卵泡与初级、次级、窦状卵泡相比,其卵母细胞及颗粒细胞中PRXⅡ蛋白表达水平明显较低,差异有统计学意义(P<0.005)。初级卵泡分别与次级、窦状卵泡相比其颗粒细胞中PRXⅡ蛋白表达水平较低,有显著差异(P<0.005)。闭锁卵泡PRXⅡ蛋白呈强阳性表达,明显高于生长卵泡中的表达水平。黄体及间质中亦见少量PRXⅡ表达。PRXⅡmRNA在卵巢组织中的表达水平随卵巢的生长发育呈先增高后降低的趋势。3、6、11周小鼠卵巢中PRXⅡmR-NA表达水平无统计学差异(P>0.05),但其表达水平是8天及15周小鼠卵巢组织的两倍。结论:卵泡发育不同阶段PRXⅡ均有表达,在卵泡发育后期和闭锁卵泡中强表达,提示PRXⅡ在卵泡的生长发育及闭锁过程中可能起重要的调控作用。

CD44v6和LYVE-1蛋白在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义

目的探讨CD44v6和LYVE-1蛋白在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义。方法应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法检测CD44v6、和LYVE-1在63例卵巢上皮性癌、5例卵巢良性上皮性肿瘤和4例正常卵巢组织中的表达情况。结果正常卵巢组织、卵巢良性上皮性肿瘤和卵巢上皮性癌中CD44v6和LYVE-1蛋白的表达具有显著差异;CD44v6表达强度与卵巢癌临床分期和组织学分级呈正相关,LYVE-1的表达和卵巢癌的临床分期正相关,而不同组织学分级间差异无显著性;CD44v6和LYVE-1的表达强度与淋巴结有无转移显著相关;CD44v6和LYVE-1在卵巢癌中协同表达。结论CD44v6和LYVE-1在卵巢癌发生发展、和淋巴转移中起不同程度的作用,其检测可为卵巢肿瘤生物学行为判定提供参考依据。

PCDGF反义RNA真核表达载体的构建、转染及其对卵巢癌细胞增殖能力的抑制效应

目的:检测特异性封闭高度恶性人卵巢癌细胞株Sw626、A2780中畸胎瘤源性生长因子(PC -cell -devivedGrowthFactor,PCDGF)的表达,并观察其对增殖能力的抑制效应。方法:用RT -PCR技术扩增PCDGF基因cDNA保守序列,经pGEM -TEasy载体克隆后双酶切,反向插入哺乳动物真核表达载体pcDNA3 1 ( +)构建反义PCDGF核酸载体。并通过脂质体转染法转染人卵巢癌细胞株Sw626、A2780,用RT- PCR和Westernblot技术检测转染前后PCDGFmRNA和蛋白的表达,MTT实验检测其增殖能力的变化。结果:PCDGF反义核酸载体转染株的mRNA和蛋白水平明显低于对照组,Sw626的抑制率分别为50%、72%;A2780分别为53%、70%。同时增殖能力亦明显降低,其抑制率Sw626及A2780分别为71%、73%。结论:PCDGF反义核酸在高度恶性人卵巢癌细胞株Sw626及A2780中起了特异性封闭作用。为进一步研究PCDGF的分子生物学特性、致瘤机理及今后利用反义PCDGF核酸载体治疗卵巢癌提供了实验和理论模型。

Hec1在胃癌组织中的表达及其在胃癌进展中的临床意义

目的:Hec1(癌高表达蛋白),作为着丝粒蛋白的重要组分及纺锤体检测点调节器,在肿瘤的发生和进展中发挥着重要的作用。因此,本文旨在研究Hec1在胃癌组织中的表达及其在胃癌进展中的临床意义。方法:采用Sybr Green荧光染料法的实时定量逆转录PCR方法检测30例胃癌标本及17例癌旁正常组织中Hec1 mRNA表达情况,其中TBP作为内参照。通过2-△CT法计算经过内源性管家基因标准化处理后的目的基因的表达,以此来比较各比较组之间Hec1 mRNA的表达差异。结果:(1)胃癌组织中Hec1 mRNA的表达(0.272±0.0369)明显高于癌旁正常组织(0.041±0.0231)。(2)Ⅰ/Ⅱ期(0.286±0.1843)、Ⅲ/Ⅳ期(0.269±0.0717)胃癌组织Hec1 mRNA表达量明显高于癌旁正常组织;但Ⅰ/Ⅱ期与Ⅲ/Ⅳ期胃癌组织相比较,Hec1 mRNA表达量没有明显差异。(3)Hec1 mRNA在无淋巴结转移组中的表达为0.325±0.2077,在有淋巴结转移组中的表达为0.238±0.0697;两者间无明显差异。结论:Hec1 mRNA在胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织,但与TNM分期及淋巴结转移情况无明显的相关性。

经阴道三维彩色多普勒超声在子宫腺肌病诊断及治疗中的应用价值

目的:探讨经阴道三维彩色多普勒超声在子宫腺肌病(AM)诊断及治疗中的应用价值。方法:选取2016年4月~10月华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科收治的117例经手术及病理证实的子宫腺肌病(AM)患者。回顾分析患者的三维彩色多普勒超声表现,探讨AM不同临床分型的手术情况及术后恢复情况。结果:59例患者彩色多普勒超声表现为弥漫型,其中32例行腹腔镜下全子宫切除手术,27例要求保留生育功能者,行腹腔镜下子宫楔形切除术,术后给予GnRHa联合曼月乐治疗。58例彩色多普勒超声表现为局限型,其中误诊或合并子宫肌瘤5例,均行腹腔镜下子宫病灶切除手术,术后给予GnRHa联合曼月乐治疗。术后绝大多数患者均恢复良好,痛经VAS评分较术前降低,保留生育功能的患者经量减少(P<0.05)。结论:经阴道三维彩色多普勒超声检查是诊断AM切实可行的方法,其诊断结果有助于制定个体化治疗方案,以最大限度地保留患者生育功能。

新型冠状病毒肺炎疫情防控期间妇科患者临床诊治和管理策略

2019年12月,湖北省武汉市集中暴发新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)疫情,且逐渐在全国各地蔓延。鉴于其人群普遍易感性,2020年1月20日国家卫生健康委员会将新型冠状病毒感染引起的肺炎纳入乙类传染病,并按甲类传染病管理[1~3]。此次,COVID-19疫情造成的后果与同为冠状病毒引起的严重急性呼吸道综合征(SARS)和中东呼吸综合征(MERS)相比更为深远和广泛[4,5]。