芦丁对人结肠癌SW480细胞凋亡的促进作用及其作用机制

目的:探讨芦丁对人结肠癌(CRC)SW480细胞凋亡的影响,阐明芦丁在CRC治疗中的作用及其可能的分子机制。方法:毒性与基因比较数据库(CTD)和GeneCards数据库预测与芦丁相关的交集mRNA,基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库预测交集mRNA的生物学功能及作用通路,采用String数据库寻找与Notch-1相关作用蛋白;以人CRC SW480细胞作为研究对象,分别给予0.1、1.0和10.0μmol·L^(-1)γ-分泌酶抑制剂DAPT初步筛选,进而给予1、2、4、8和10μmol·L^(-1)DAPT干预,筛选出芦丁与DAPT的最适给药浓度。实验分为空白对照组、芦丁组(22μmol·L^(-1))、DAPT组(1μmol·L^(-1))和芦丁+DAPT组(22μmol·L^(-1)芦丁+1μmol·L^(-1)DAPT);MTT法检测SW480细胞增殖活性,Hoechst33258核染色观察各组细胞凋亡形态,流式细胞术检测各组SW480细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中Notch-1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中,Notch-1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(caspase-9)、B细胞淋巴瘤(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达水平。结果:CTD和GeneCards数据库共有芦丁的34个交集mRNA;GO和KEGG数据库预测出交集mRNA与CRC细胞凋亡过程相关;String数据库中与Notch-1相关蛋白16个[相互作用分数(score)>0.42];芦丁与DAPT的最适给药浓度分别为22μmol·L^(-1)和1μmol·L^(-1)。与空白对照组比较,芦丁组、DAPT组和芦丁+DAPT组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中Notch-1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),细胞中caspase-3、caspase-9和Bax蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。芦丁组与DAPT组细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与芦丁组和DAPT组比较,芦丁+DAPT组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),caspase-3、caspase-9和Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:生物信息学分析及实验研究结果均表明芦丁能促进CRC细胞凋亡,这一作用可能是通过靶向调控Notch-1调节丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路来实现的。

INHBA在结直肠癌中的表达及其与微卫星状态和临床病理特征的关系

目的探讨INHBA在结直肠癌中的表达及其与微卫星状态、临床病理特征之间的关系。方法基于基因表达综合(GEO)数据库及基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库进行生物信息学分析,选定结直肠癌差异表达预后相关目标基因。收集2016年1月至2022年6月于锦州医科大学附属第三医院行手术治疗的107例结直肠癌患者蜡块组织,制备组织芯片,采用免疫组织化学法检测结直肠癌组织中微卫星状态[错配修复(MMR)蛋白MLH1、MSH2、MSH6、PMS2均为阳性表达为错配修复完整(pMMR),代表微卫星低度不稳定或微卫星稳定;若其中任何一个指标为阴性,则判定为错配修复缺陷(dMMR),代表微卫星高度不稳定]和INHBA的表达情况。回顾性分析患者临床病理资料,分析INHBA与微卫星状态及临床病理特征之间的关系。结果从GEO数据库筛选出结直肠癌3个数据集:GSE110223(13个癌组织、13个癌旁组织)、GSE110224(17个癌组织、17个癌旁组织)、GSE113513(14个癌组织、14个癌旁组织),筛选出癌组织和癌旁组织间差异表达上调和下调的前50个基因,经韦恩图分析3个数据集的交集基因,筛选出上调基因12个,下调基因17个;根据GEPIA数据库,共有的上调和下调差异基因中AQP8、ZG16、INHBA基因与结直肠癌预后相关,INHBA在结直肠癌组织中表达水平较癌旁(距肿瘤边缘≥5 cm)组织高(P<0.05),选定INHBA基因进行分析。对收集的结直肠癌蜡块组织进行免疫组织化学检测显示,结直肠癌组织INHBA高表达患者比例高于癌旁组织INHBA高表达患者比例[85.05%(91/107)比67.29%(72/107),P<0.05]。癌组织INHBA高表达与病灶部位[右半结肠比左半结直肠:94.00%(47/50)比77.19%(44/57)]、肿瘤长径[>5 cm比≤5 cm:92.73%(51/55)比76.92%(40/52)]、浸润深度[T3~4期比T1~2期:96.43%(54/56)比72.55%(37/51)]、分化程度[低、中分化比高分化:91.04%(61/67)比75.00%(30/40)]、淋巴结转移[是比否:93.02%(40/43)比78.13%(50/64)]均有关(均P<0.05),与年龄、性别、脉管癌栓、神经侵犯情况均不相关(均P>0.05)。pMMR组结直肠癌组织INHBA高表达患者比例高于dMMR组患者[93.22%(55/59)比75.00%(36/48),χ^(2)=6.91,P=0.008]。结论INHBA在结直肠癌组织中高表达,并且高表达的INHBA与结直肠癌的临床病理特征以及微卫星状态密切相关;INBHA可能为结直肠癌诊断、治疗及预后的新标靶。

p16^(INK4a)免疫细胞化学法对子宫颈癌筛查价值的Meta分析

目的采用循证医学方法综合评价子宫颈液基薄层细胞学检查(Thinprep liquid based cytology test,TCT)与p16^(INK4a)免疫细胞化学(p16^(INK4a)immunocytochemistry,p16^(INK4a)ICC)在子宫颈癌筛查中的价值。方法检索Pubmed,Google scholar,Cochrane clinical trial,中国知网,万方医学网等数据库,纳入有关p16^(INK4a)ICC及TCT筛查子宫颈癌的文献。采用诊断准确性实验质量评价纳入文献质量,采用Stata 16.0软件进行Meta分析。结果最终纳入10篇文献,共2694例患者,TCT与p16^(INK4a)ICC筛查的合并敏感度为86%(95%CI:77%~92%)和90%(95%CI:81%~95%),合并特异度为64%(95%CI:48%~78%)和79%(95%CI:69%~86%),合并阳性似然比为2.4(95%CI:1.6~3.6)和4.2(95%CI:2.8~6.3),合并阴性似然比为0.21(95%CI:0.13~0.34)和0.13(95%CI:0.06~0.25),合并诊断比值比为11(95%CI:6~22)和33(95%CI:13~85),受试者工作特征曲线下面积(AUC)为0.85和0.91。结论子宫颈癌筛查中应用p16^(INK4a)ICC检测较TCT具有更高的敏感性和特异性,有助于提高子宫颈癌筛查的准确性,避免漏诊。