转抗虫基因优良籼型恢复系的获得及其外源基因的遗传稳定性研究

用基因枪法将雪花莲外源凝集素基因 (gna )转移到优良籼型杂交稻恢复系蜀恢 5 2 7中 ,通过 PCR、PCR- South-ern blotting和 Southern blotting等分子方法检测证明 ,外源基因已稳定遗传到转基因第三代 (T2 )。转基因第一代植株 (T0 )在株高和结实率上与相应的组培、种子实生苗植株相比 ,发生明显的不可遗传的变异。随着繁殖代数的增加 ,转基因植株恢复到与对照植株一致。还讨论了 DNA微量提取法在转基因后代筛选中的运用。

稻瘟病圃中水稻品系的抗瘟性评价与育种利用

在20世纪80年代抗病育种的基础上,从1994-2003年采用人工辅助接种、自然发病的方法对12151份次水稻材料在病圃中的稻瘟病抗性进行了监测。结果表明,10年共计有4933份次叶瘟表现抗病,7103份次表现为感病,分别占总份次的40.60％和58.46％;有4071份次颈瘟表现抗病,7965份次表现为感病,分别占总份次的33.50％和65.55％。有9034份次的材料叶瘟颈瘟表现一致,占总份次的74.35％,其中叶瘟感病颈瘟也感病的材料份次是叶瘟抗病颈瘟也抗病材料的两倍;叶瘟颈瘟表现不一致的材料有3002份次,占总份次的24.71％,其中叶瘟感病而颈瘟抗病的材料份次多于叶瘟抗病而颈瘟感病的材料份次。利用早期筛选的抗源,选育了抗病优良籼型杂交稻恢复系6326、蜀恢162、蜀恢527等。对稻瘟病抗病育种和抗病品种的合理利用等问题也进行了讨论。

水稻抗虫转基因光温敏核不育系植株的获得

以质粒 pCUBAC HPT作抗虫基因供体 ,优良光温敏核不育系 6 12S为受体 ,采用基因枪转化法 ,获得了转抗虫基因sck和sbk的植株 .分子证据表明 ,外源基因已整合到受体基因组中 .蛋白活性测定和Westernblotting结果显示 ,转基因在受体植株中得到表达 .田间抗虫性测定表明 ,外源基因的转入提高了受体的抗虫性 .本文还讨论了转基因技术在水稻育种中的作用 .图 5表 2参

转抗虫基因三系优良保持系的获得

以质粒pBUSCK HPT作抗虫基因供体 ,优良籼型保持系D6 2B为受体 ,采用基因枪转化法 ,获得了转抗虫基因sck的植株。将转基因保持系与不育系D6 2A回交 ,获得转抗虫基因不育系。分子证据表明 ,外源基因能稳定转移到不育系中。蛋白活性测定显示 ,转基因在不育系中得到表达。

四川省杂交水稻种子寄藏真菌研究

为明确杂交水稻种子携带真菌种类、探讨种子健康状况，采用洗涤、吸水纸保湿培养等方法检测来源于四川省的22个杂交水稻种子样品。结果表明，杂交水稻种子平均夹带有3.65％的以稻粒黑粉病粒和稻曲病粒为主的病粒和菌核，每克种子真菌孢子负荷量平均达1.65×10^5个。吸水纸保湿培养法从22个样品获得1698个真菌菌株，种子带菌率为15％-93％，平均带菌率为38.56％。这些真菌菌株分属于至少27个属，其中以Aspergillus（占总菌株的11.66％）、Tilletia horrida（10.54％）、Fusarium（9.36％）、Rhizoctonia solani（8.07％）、Penicillium（7.54％）、Alternaria（4.95％）、Rhizopus（4.59％）、Ustilaginoidea virens（4.18％）、Sclerotium（4.12％）、Mucor（3.36％）这10个属种为优势菌群，合计占总菌株数的68.37％。杂交水稻种子寄藏真菌类群具有多样性，没有发现新的水稻种子寄藏真菌。

抗虫基因在转基因植株中聚合的初步研究

以质粒 pBUSCK HPT ,pCUSBK HPT和pGNA HPT作抗虫基因供体 ,优良籼型三系恢复系SH5 2 7和广亲合系W 2 0 0 8为受体 ,采用基因枪转化法 ,获得了转修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (sck)、修饰的Bt毒蛋白基因 (sbk)和雪花莲凝集素基因 (gna)的植株 .通过人工杂交 ,将外源基因聚合 .分子证据显示 ,作者获得了抗性基因聚合的材料 .蛋白活性测定表明 ,聚合基因的表达因载体结构相似而受到影响 ,但抗虫性却得到提高 .作者还讨论了聚合转基因在水稻育种中的作用和及其相关问题 .

杂交籼稻亲本愈伤组织培养力的研究

对多个重要杂交籼稻亲本愈伤组织培养力的研究结果表明 :不同水稻材料的愈伤组织诱导、继代、分化能力不同 ;不同外植体的愈伤诱导、继代、分化能力不同。成熟胚愈伤组织诱导率最高 ,从幼胚、幼穗获得的愈伤组织的继代和分化能力较强 ,质量也好 ;随着继代时间的延长 ,愈伤组织的质量下降 ;干燥处理有助于愈伤组织分化率的提高。本文还对不同外植体愈伤组织在转基因研究中的作用进行了讨论。

几种核盘菌菌核重寄生真菌生物防治潜能的研究

将核盘菌 (Sclerotiniasclerotiorum)菌核埋置于油菜土样中 ,从菌核内部分离到 8株与菌核在土壤中存活有关的真菌。经平板和盆钵筛选试验 ,得到对油菜菌核病有较强生物防治潜能的黄绿木霉 (Trichodermaaureoviride)J75和绿色粘帚霉 (Gliocladiumvirens)Y5 1菌株。对峙培养结果表明 ,两个菌株的菌落均能覆盖核盘菌菌落、侵染菌核、使菌核腐烂。其非挥发性代谢产物能抑制核盘菌菌丝生长、降低平板上形成菌核的重量。把J75和Y5 1菌株培养物接种于自然油菜土壤中 6个月后 ,使埋置在土壤中的菌核的校正腐烂率分别达 5 3 13%和 77 5 0 %。研究结果还表明 ,供试菌株纤维素酶活力与其生物防治潜能有一定关系 :纤维素酶活力越高 ,生物防治潜能越大。因此 ,可把真菌纤维素酶活力作为筛选土传植物病原菌生防菌株的一个参考指标。

水稻遗传转化选择系统优化初探

本文报道了通过调节潮霉素和头孢霉素的使用浓度 ,在抗虫转基因水稻研究中提高筛选率和绿苗再生率。筛选时潮霉素使用浓度为 2 0～ 30mg/L ,头孢霉素为 30 0～ 40 0mg/L ;分化时潮霉素使用 15～ 2 5mg/L ,头孢霉素为 2 5 0mg/L ,可得到较高的抗性愈伤组织筛选率和绿苗分化率 ,不同水稻材料有差异。分化时绿苗假阳性率在 10 %左右可得到较大量的阳性植株和减小工作量。

大豆立枯丝核菌G蛋白β亚基基因的克隆与分析

由立枯丝核菌[Rhizoctonia solani Khn,有性世代:Thanatephorus cucumeris(Frank)Donk]引起的大豆纹枯病(soybean sharp eyespot)是一种重要病害。G蛋白β亚基(guanine nucleotide binding protein beta-subunit)作为重要的信号传导因子,在植物病原菌致病分子机制中起着重要作用。为了解G蛋白β亚基基因的结构与功能,根据同源物种G蛋白β亚基相关序列设计引物,利用PCR和RT-PCR技术克隆了大豆立枯丝核菌G蛋白β亚基的基因序列和开放阅读框(G-protein beta-subunit of soybean Rhizoctonia solani,简写为gbsrs1,GenBank登录号为EU663628)。该片段全长1864bp,含有4个内含子和5个外显子;开放阅读框(ORF)长1047bp,编码348氨基酸残基,与多种真菌G蛋白β亚基的氨基酸序列相似程度较高,达79.72%～99.43%;该蛋白质具有2个α-螺旋和7个β-折叠的二级结构,形成无规则卷曲连接的桶形三级结构。将gbsrs1的ORF连接于原核融合表达载体pGEX-4T-2中,经IPTG诱导,获得了相应蛋白的表达。gbsrs1的克隆和特性研究为了解大豆立枯丝核菌的致病机理、有效防治纹枯病奠定了基础。

转抗虫基因杂交稻的配制及田间表现

以质粒 pBUSCK HPT作抗虫基因供体 ,优良籼型恢复系SH5 2 7为受体 ,采用基因枪转化法 ,获得了转抗虫基因sck的植株 .通过自交和选择剂潮霉素B的筛选 ,筛选到选择标记基因纯合的单株 (T2代 ) .将纯合单株与不育系G4 6A ,D6 2A和D70 2A杂交 ,获得转抗虫基因杂交稻 .分子证据和蛋白质测定表明 ,外源基因能稳定地转移到杂交稻中并正确表达 .农艺性状测定显示 ,转基因杂交稻与对照相比 ,抗虫性有所提高 ,其它性状没有发生变化 .作者还讨论了转基因技术在水稻育种中的作用 .

转基因改良水稻的抗螟虫性研究

以质粒 pCUSBK -HPT作抗虫基因供体 ,优良籼型恢复系蜀恢 5 2 7为受体 ,采用基因枪转化法 ,获得了转抗虫基因sbk的植株。室内和田间试验发现转基因植株抗虫性得到提高。分子证据表明外源基因在受体植株中的遗传是稳定的。

稻瘟病菌AVR-pita等位基因的遗传多样性研究(简报)

由真菌Magnaporthe grisea引起的稻瘟病是我国水稻三大病害之一．也是遍及世界各水稻产区的重要病害．每年均有不同程度的发生．流行年份一般减产10％-20％．严重的达40％-50％．局部田块甚至颗粒无收。稻瘟病菌在进化过程中形成了遗传多样性和毒性易变的特性．是水稻品种抗病性容易丧失的主要原因之一。对稻瘟病系统研究的证据表明．水稻与稻瘟病菌之间的互作．符合“基因对基因”假说。也就是说．水稻有一抗病基因，稻瘟病菌中就会有相对应的无毒基因．

抗稻瘟病水稻品种的田间表现分析

采用人工辅助接种、自然发病的方法对25个品种连续十年在病圃中的稻瘟病抗性进行了监测。结果发现,39.18%的年份品种组合叶瘟颈瘟在田间抗感表现出质的不同,有的叶瘟感病而颈瘟表现抗病,有的叶瘟抗病而颈瘟表现感病。叶瘟颈瘟表现一致的品种均出现在严重感病或抗性较强的品种。水稻本身的遗传背景对稻瘟病抗病基因的表现有影响。本文还就稻瘟病抗病育种和抗病品种的合理利用等问题进行了讨论。

水稻中一个与OsHSP90互作的新基因特性分析

OsHSP90是水稻中一类可以在不同逆境条件下被诱导的基因。利用酵母双杂交系统,在水稻低温和干旱cDNA文库中筛选出1个与OsHSP90互作的未知基因,命名为OsHSPBP。序列分析表明,该基因全长1321 bp,编码一个具有244个氨基酸残基的多肽,推测分子量为25.5 kD。在OsHSPBP蛋白的97-132位氨基酸残基间存在tify功能域,185-211位氨基酸残基构成CCT_2基序,与其他植物中的同源蛋白相似性介于30.66%-70.40%。经分析,该基因启动子区域存在6种不同的逆境反应顺式作用元件。RT-PCR半定量结果表明,OsHSP90与OsHSPBP在逆境胁迫下,均能被不同程度地诱导并呈现相似的表达趋势,说明两者可能与水稻逆境胁迫的应答和信号传递有关。

优良籼型恢复系转基因植株的获得及其遗传稳定性(英文)

报道了用基因枪转化法将雪花莲凝集素基因 (gna)转移到优良籼型杂交稻恢复系蜀恢 5 2 7中 .PCR、PCR -Southernblotting和Southernblotting等分子检测证明 ,外源基因以多拷贝单位点方式整合到受体基因组中并稳定遗传到转基因第三代 (T2 ) .转基因第一代植株 (T0 )在株高和结实率上与相应的组培、种子实生苗植株相比 ,发生明显的不可遗传的变异 ,随着繁殖代数的增加 ,转基因植株恢复到与对照植株一致 .Westernblotting表明 ,目的基因在转基因植株中正确表达 .蛋白活性分析显示 ,外源基因在转基因植株中合成的蛋白具有凝血生物活性 ,含量占可溶性总蛋白的0 .1%左右 .本文还对转基因技术在杂交稻育种中的应用进行了讨论 .图 4表 2参

抗虫基因转化优良籼型保持系D297B的研究

本文报道了用基因枪法将雪花莲外源凝集素基因(gna)转移到优良籼型杂交稻保持系D297B中。通过PCR、Southern blotting和Western blotting等分子检测方法证明,外源基因已整合到受体材料的基因组中并得到表达。蛋白活性测定结果显示转基因在受体中表达的蛋白具有生物活性。潮霉素抗性分析表明外源基因多数是以单位点形式整合并以3∶1方式遗传。另外。

水稻纹枯病菌拮抗菌B34分离鉴定及杀菌蛋白的获得

从水稻植株上分离到 1株对水稻纹枯病菌有较好拮抗作用编号为 B34的菌株 ,室内对水稻纹枯病菌的抑菌带达到 10 .3mm。经生理、生化检测及细胞壁化学成分分析 ,确定其为致黄假单胞菌 (Pseudomonas aureofaciens)。其代谢粗提物经蛋白酶作用 ,拮抗作用消失。经 70 %饱和度的 (NH4) 2 SO4沉淀 ,透析后得到粗杀菌蛋白 ,分别上样 Sephadex G- 10 0和DEAE-纤维素 - 32 L KB柱层析系统 ,分离纯化了杀菌蛋白 ,经 SDS- PAGE检测其分子量约为 33.0 k Da,经低温、真空干燥 。

广谱抗病虫几丁质酶产生菌X2-23的筛选与鉴定

X2 2 3是从水稻叶片分离到的一种几丁质酶活力较高的菌株 ,经Boller法测定 ,其几丁质酶活性达 2 5 .5U/mL。它对水稻纹枯病、稻瘟病、恶苗病 ,小麦赤霉病 ,油菜菌核病等 10多种真菌病原菌以及水稻白叶枯病菌等细菌病原菌具有不同程度的抑制作用。室内测试表明 ,它对水稻稻苞虫具有杀虫侵染作用 ,饲喂 12、2 4h后 ,其校正死亡率分别达到 5 7.77%、89.88%。该菌经形态学及生理生化特性鉴定 ,初步定为圆孢芽孢杆菌 (Bacillusglobisporus) ,是一种新的几丁质酶产生菌和生防菌。

用木霉、类木霉对水稻纹枯病进行生物防治的研究

从腐烂稻草上分离到 6个对水稻纹枯病菌有较强拮抗作用的菌株 ,经室内初步鉴定属于木霉、类木霉 ,经 PDA平板拮抗试验表明 ,黄绿木霉的 T3菌株抑菌率最大 ,为 5 2 .5 4%。纤维素酶活力测定试验表明 ,钩状木霉 >黄绿木霉 >绿粘帚霉 ,与抑菌试验结果并不同。田间试验结果表明它们对水稻纹枯病具有一定防效 ,以 T1～ T6混合菌喷施处理防效最好 ,可达 32 .2 5 %,并对结实率和千粒重等产量因素有较大提高作用。